創傷后應激障礙患者外周血單個核細胞的p11 mRNA表達變化及意義

李喆，張志強，祁鳴，張桂青

(1石河子大學醫學院，新疆石河子832002;2石河子大學醫學院第一附屬醫院)

創傷后應激障礙(PTSD)是指由于異乎尋常的威脅性或災難性的心理創傷導致延遲出現和長期持續的精神障礙［1］。PTSD發病的潛伏期從幾周到數月不等(很少超過6個月)［2］。目前，臨床醫生主要依據病史、臨床表現作出診斷，還沒有一個明確的實驗室指標來幫助診斷PTSD。有學者認為，血液生物學標志物檢測對于診斷PTSD具有潛在的價值，同時指出外周血單個核細胞p11 mRNA可作為PTSD的生物學標志物來進行研究［3］。2014年3～9月，我們觀察了PTSD患者p11 mRNA表達變化，并探討其意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 PTSD患者19例(PTSD組)，男4例，女15例;經歷創傷事件年齡25～65(46.68±14.05)歲。納入標準:①符合《國際精神障礙分類與診斷標準》(第10版)中的PTSD診斷標準，且經臨床心理科醫生診斷確診;②年齡18歲以上，性別不限;③意識清楚、病情平穩且愿意接受各類問卷、量表調查者;④至少半年內未接受過免疫抑制劑及免疫增強劑治療;⑤創傷事件前無明顯軀體疾病異常;⑥征得受試者或其監護人知情同意。排除標準:①嚴重心、腦、肝、腎疾病及其他嚴重的軀體疾病;②內分泌系統、免疫系統、神經系統疾病，急、慢性感染者;③精神發育遲滯者;④懷孕、哺乳婦女;⑤有長期飲酒或藥物依賴史。經歷創傷事件類型:喪親11例，車禍5例，被侮辱2例，目擊創傷事件1例。距創傷事件時間(0.49±0.79)a。婚姻狀況:已婚11例，未婚1例，離異1例，喪偶6例;受教育程度:9 a及以下5例，9 a以上14例。另選同期經歷創傷事件但未發生PTSD的患者13例(非PTSD組)及健康體檢者19例(對照組)。

1.2 p11 mRNA檢測 ①外周血單個核細胞分離:早8:00～10:00空腹抽取肘靜脈血2 mL，乙二胺四乙酸抗凝，等比例稀釋，以2 000 r/min離心20 min用以分離外周血單個核細胞;用PBS溶液洗滌1～2次，將得到的細胞轉移至干凈無核酶EP管中，存入－80℃冰箱保存備用。②總RNA提取和逆轉錄:采用總 RNA提取試劑盒提取總 RNA，TIANScript cDNA第一鏈合成試劑盒和隨機引物合成cDNA。③引物設計及合成:設計p11和β-actin基因擴增引物，p11:5'-AAATTCGCTGGGGATAAAGG-3'，5'-AGCCCACTTTGCCATCTCTA-3'。β-actin:5'-ACCTGTACGCCAACACAGTG-3'，5'-ACACGGAGTACTTGCGCTCA-3'。④實時熒光定量聚合酶鏈式反應(QRT-PCR):采用Real Master Mix(SYBR Green)試劑盒，在64孔ABI Prism 7300序列檢測系統上進行QRT-PCR擴增。以管家基因β-actin作為內對照基因來標化目的基因的表達水平。每個待測樣本的基因和內對照基因均重復3次，同時分別設立3個陰性對照孔。定量QRT-PCR反應體系為20 μL，包括9 μL 2.5 × Real Master Mix/20 × SYBR solution，正、反向引物(均為 1 μmol/L)各 1 μL，cDNA 模版 2 μg。反應程序:94℃起始模板變性2 min，1個循環;94℃變性20 s;55℃退火30 s;68℃延伸1 min，40個循環。⑤采用log2R進行相對定量分析。

1.3 臨床癥狀評估 采用創傷后應激障礙量表平民版(PCL-C)、漢密頓焦慮量表(HAMA)、漢密頓抑郁量表(HAMD)評估患者病情。

1.4 統計學方法 采用SPSS17.0統計軟件。3組間p11 mRNA表達水平的比較采用F檢驗，進一步的兩兩比較采用LSD法。PTSD組與非PTSD組HAMA、HAMD、PCL-C評分比較采用 t檢驗。相關性分析采用Pearson相關分析法。P≤0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 p11 mRNA表達比較 PTSD組、非PTSD組、對照組 p11 mRNA相對表達量分別為 －0.495±0.920、0.911 ±1.474、－0.000 ±0.791，PTSD 組、對照組分別為與非PTSD組比較，P均＜0.05。

2.2 HAMA、HAMD、PCL-C 評分比較 PTSD 組HAMA、HAMD、PCL-C 評分分別為(21.63 ±7.79)、(25.11 ±8.56)、(55.84 ±6.35)分，非 PTSD 組分別為(10.31 ±6.22)、(13.00 ±9.88)、(31.77 ±5.09)分，兩兩比較，P 均 ＜0.05。

2.3 相關性分析 p11 mRNA相對表達量與HAMD 評分呈負相關(r= －0.299，P=0.033)，與PCL-C 評分呈負相關(r= －0.385，P=0.030)，與HAMA 評分無相關性(r= －0.233，P=0.111)，與經歷創傷事件的年齡無相關性(r=－0.184，P=0.315)，與距創傷事件的時間無相關性(r=－0.031，P=0.867)。

3 討論

p11又稱為 S100A10或 calpactionⅠ輕鏈，是S100家族中的成員［4］;人們首先在大腦中發現這個家族，并且因為可以溶解在100%的硫酸銨中而稱為S100［5］。p11在不同的細胞和組織中表達量不同，在肺、腸、腎中高表達，在紅細胞中不表達，在肝臟中有適當表達［6，7］。p11調節許多細胞過程，如細胞周期進程和分化;通過F-肌動蛋白的重組，參與胞吐和胞吞，還可以將5-羥色胺1B受體從細胞質運輸到細胞膜［8，9］。Svenningsson 等［9］發現，大鼠大腦的額葉皮質、下丘腦腹內側、海馬p11 mRNA與5-羥色胺1B受體的分布相似，在抑郁癥動物模型中，p11 mRNA水平下降，在經過三環類抗抑郁、單胺氧化酶抑制劑、電休克治療后p11 mRNA表達水平升高。這些都說明了p11在抗抑郁藥藥物治療的機制中發揮著作用。Melas等研究也證明，p11與抗抑郁藥物作用密切相關。既往研究發現，p11是藥物治療的新關鍵，通過5-羥色胺1B受體與五羥色胺系統發生相互作用。

既往研究［10］發現，PTSD患者 p11 mRNA較對照組下調。而本研究結果顯示，PTSD組與對照組p11 mRNA相對表達量比較無統計學差異。本研究中收集的患者病程較短，不同患者處于疾病的不同階段，可能是導致與之前研究結果不同的原因。本研究還發現，非PTSD組p11 mRNA表達量較其他兩組增加。根據量表結果提示，非PTSD組的患者中部分表現出焦慮與抑郁問題，但尚不足以診斷為焦慮癥或抑郁癥，是否會進一步發展為焦慮癥或抑郁癥需要進一步隨訪。事實上，DSM-Ⅳ并不推薦將經歷喪親之痛2個月以內的人診斷為抑郁，即使他/她有抑郁病史，這一點應引起我們的重視。此外，p11 mRNA在非PTSD組中上升，這是否提示p11 mRNA水平上升阻止了PTSD的發生發展值得進一步研究。此前研究發現，在PTSD小鼠中，大腦的前額皮質、海馬和杏仁核中p11 mRNA相對表達量增加。在PTSD患者死后的尸檢研究中發現，背側前額葉皮層中p11 mRNA上升。外周血與中樞系統的不一致，可能是p11 mRNA在不同組織中表達不同造成的，也有可能是不同創傷經歷和不同疾病階段造成的。但中樞系統取材困難，不適宜活體研究，外周血取材方便，并能夠動態反應機體情況，中樞系統與外周系統是否存在不同的分子機制，仍值得進一步研究。

同時，在本研究中有52.6%的患者有自殺傾向，有自殺行為的人僅有1例。Henderson等［11］研究發現62%診斷PTSD的個體有自殺觀念。既往研究［12］發現，自殺未遂者外周血單個核細胞p11 mRNA下降，在沒有自殺者中有所上升。而本研究中自殺未遂者較少，這也可能是導致研究結果不同的另一原因。Su等［10］發現，PTSD患者p11 mRNA與HAMD評分呈正相關。本文結果顯示，p11 mRNA表達量與HAMD、PCL-C評分有關，但與HAMA評分、經歷創傷事件的年齡、距創傷事件的時間、創傷事件的類型無相關性。提示p11 mRNA可能與患者的臨床癥狀有一定的相關性。

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