阿托伐他汀對(duì)ApoE基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變中TRPC5表達(dá)的影響*

齊 潔， 徐 芳， 馬 慧， 崔建國(guó)， 張清潭△

(1濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院老年內(nèi)科，山東 濱州 256603； 2濱州醫(yī)學(xué)院病理生理教研室，山東 煙臺(tái) 264003)

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阿托伐他汀對(duì)ApoE基因敲除小鼠動(dòng)脈粥樣硬化病變中TRPC5表達(dá)的影響*

齊 潔1， 徐 芳2， 馬 慧1， 崔建國(guó)1， 張清潭1△

(1濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院老年內(nèi)科，山東 濱州 256603；2濱州醫(yī)學(xué)院病理生理教研室，山東 煙臺(tái) 264003)

目的： 觀察載脂蛋白E基因敲除(ApoE-/-)小鼠動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成過(guò)程中血管平滑肌細(xì)胞瞬時(shí)受體電位通道5(TRPC5)蛋白的表達(dá)變化，以及阿托伐他汀藥物干預(yù)對(duì)TRPC5的影響并探討其作用機(jī)制。方法: 將40只6周齡雄性ApoE-/-小鼠隨機(jī)分為模型組和他汀干預(yù)組，高脂飼料喂養(yǎng)建立動(dòng)脈粥樣硬化模型。他汀干預(yù)組給予阿托伐他汀(20 mg·kg-1·d-1)灌胃，模型組給予等量生理鹽水灌胃。20只同齡雄性野生型C57BL/6J小鼠給予普通飼料喂養(yǎng)作為正常對(duì)照組。各組小鼠分別喂養(yǎng)至20和30周齡，分別取10只取血并處死。取主動(dòng)脈根部做石蠟切片行HE染色形態(tài)學(xué)觀察，測(cè)量并計(jì)算斑塊相對(duì)面積；免疫組織化學(xué)染色檢測(cè)各組小鼠TRPC5蛋白表達(dá)變化。取胸腹段主動(dòng)脈行實(shí)時(shí)熒光定量PCR，檢測(cè)主動(dòng)脈中TRPC5通道蛋白mRNA的表達(dá)水平。結(jié)果: 與模型組相比，阿托伐他汀干預(yù)組的血脂明顯下降，斑塊總面積明顯減小，TRPC5蛋白水平及 mRNA含量明顯下降；30周齡模型組的TRPC5蛋白表達(dá)稍高于20周齡模型組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；30周干預(yù)組較20周干預(yù)組相比，TRPC5水平有降低趨勢(shì)且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論: 阿托伐他汀可能通過(guò)下調(diào)TRPC5蛋白表達(dá)從而延緩動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)程。

TRPC5； 載脂蛋白E； 動(dòng)脈粥樣硬化； 血管平滑肌細(xì)胞； 阿托伐他汀

動(dòng)脈粥樣硬化(atherosclerosis，AS)是心腦血管疾病最常見(jiàn)的基本病因，嚴(yán)重影響人類的生活質(zhì)量和健康水平[1]。其病理生理過(guò)程是由多種危險(xiǎn)因子導(dǎo)致血管內(nèi)皮損傷，刺激多種細(xì)胞(包括淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞等)參與局部脂質(zhì)和糖類積聚、纖維組織增生和鈣質(zhì)沉著形成斑塊，并伴有動(dòng)脈血管中層退變。血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cells，VSMCs)增殖與凋亡是決定動(dòng)脈粥樣硬化斑塊發(fā)生發(fā)展的重要環(huán)節(jié)[2-3]。其中，瞬時(shí)受體電位通道(transient receptor potential channel，TRPC)介導(dǎo)血管平滑肌細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞等多種細(xì)胞參與了AS的病理生理過(guò)程[4]，且已有研究發(fā)現(xiàn)TRPC家族成員之一的TRPC5蛋白表達(dá)主要位于血管平滑肌細(xì)胞，參與其收縮、肥大、增殖和遷移等生理及病理過(guò)程[5]，能夠促進(jìn)AS的發(fā)展。本實(shí)驗(yàn)擬通過(guò)載脂蛋白E基因敲除(apolipoprotein E-knockout,ApoE-/-)小鼠建立AS模型，觀察AS病程中不同時(shí)點(diǎn)主動(dòng)脈VSMCs內(nèi)TRPC5蛋白表達(dá)的改變，以及阿托伐他汀干預(yù)治療后對(duì)該蛋白表達(dá)的影響，探討阿托伐他汀抗AS的作用機(jī)制。

材 料 和 方 法

1 動(dòng)物與試劑

實(shí)驗(yàn)組選取6周齡ApoE-/-雄性小鼠(品系C57BL/6J)40只，正常對(duì)照組為同周齡C57BL/6J雄性小鼠20只，均購(gòu)自北京大學(xué)醫(yī)學(xué)部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，合格證編號(hào)為SCXK(京)2011-0012。小鼠體重18～20 g，飼養(yǎng)條件為二級(jí)，室溫控制在23～25 ℃，相對(duì)濕度50%～60%，光照時(shí)間07:00～19:00，自由飲水及進(jìn)食。阿托伐他汀由美國(guó)輝瑞公司惠贈(zèng)(藥物批號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字J20070060)，用0.9%氯化鈉溶解。TRPC5抗體購(gòu)自Abcam；SP試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開(kāi)發(fā)有限公司；Trizol、反轉(zhuǎn)錄試劑盒和SYBR?Green熒光試劑盒為T(mén)aKaRa產(chǎn)品；其它相關(guān)試劑均由濱州醫(yī)學(xué)院醫(yī)藥研究中心提供。

2 方法

2.1 動(dòng)物分組與模型制備 選取40只6周齡ApoE-/-雄性小鼠給予高脂飲食(基礎(chǔ)飼料78.85%+脂肪21%+膽固醇0.15%)，隨機(jī)分為模型組(生理鹽水，0.1～0.2 mL，ig)和阿托伐他汀干預(yù)組(阿托伐他汀 20 mg·kg-1·d-1，ig)，每組20只。同時(shí)選取20只同齡C57BL/6J雄性小鼠作為正常對(duì)照組，給予普通飼料飲食。

2.2 標(biāo)本處理 每組小鼠喂養(yǎng)至20周齡和30周齡時(shí)各取10只處死，處死前禁食不禁水12 h。無(wú)菌條件下取出心臟和主動(dòng)脈根部，4%多聚甲醛固定處理后石蠟包埋，制成4 μm連續(xù)切片用于HE染色以及TRPC5的免疫組織化學(xué)染色。分離出主動(dòng)脈胸腹段于-80 ℃凍存，抽提主動(dòng)脈總RNA，反轉(zhuǎn)錄后采用SYBR?Green實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)TRPC5 mRNA的表達(dá)。

2.3 血清學(xué)指標(biāo)測(cè)定 全血以2 500 r/min 4 ℃低溫離心20 min，取血清，應(yīng)用全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)甘油三酯(triglyceride，TG)、總膽固醇(total cholesterol，TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high-density lipoprotein cholesterol，HDL-C)和低密度脂蛋白膽固醇(low-density lipoprotein cholesterol，LDL-C)含量。

2.4 病理組織學(xué)圖像測(cè)量和分析 主動(dòng)脈根部石蠟切片行HE染色，用Image-Pro Plus 6.0形態(tài)計(jì)量學(xué)測(cè)算斑塊面積及血管內(nèi)外膜長(zhǎng)度，回歸標(biāo)準(zhǔn)圓形后計(jì)算斑塊面積與血管管腔面積相對(duì)比值。免疫組化染色檢測(cè)TRPC5陽(yáng)性染色積分吸光度值(integral absorbance，IA)(DAB顯色為棕褐色)。PBS緩沖液代替Ⅰ抗作為空白對(duì)照。結(jié)果判定：光鏡下，陽(yáng)性表達(dá)的細(xì)胞圍繞藍(lán)色細(xì)胞核的胞漿呈棕褐色。每個(gè)標(biāo)本共取5張切片染色，同一切片在相同環(huán)境下測(cè)量3次，取平均值作為測(cè)量結(jié)果。

2.5 RNA的提取和逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng) 采用Trizol兩步法抽提主動(dòng)脈的總RNA，按照TaKaRa的反轉(zhuǎn)錄試劑盒要求反轉(zhuǎn)錄提取總RNA，10 μL反應(yīng)體系如下：RNA 2 μL，5×PrimeScript buffer 2 μL，PrimeScript RT Enzyme Mix I 0.5 μL，Oligo dT Prime(50 μmol/L) 0.5 μL，Random 6 mers(100 μmol/L) 0.5 μL，去RNA酶水 4.5 μL。反應(yīng)條件為37 ℃ 15 min，85 ℃ 5 s，1個(gè)循環(huán)后最后得到的cDNA，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

2.6 Real-time PCR檢測(cè)主動(dòng)脈血管中TRPC5 mRNA的表達(dá) 采用實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)TRPC5 mRNA的表達(dá)，內(nèi)參照基因?yàn)镚APDH，由大連寶生物設(shè)計(jì)引物序列。TRPC5的上游引物為5’-ACAAAAAGGTCAACTACTCACCG-3’，下游引物為5’-CAGTGGCATAGTCCCCCTTCT-3’；GAPDH的上游引物為5’-AACTGCTTAGCACCCCTGGC-3’，下游引物為5’-ATGACCTTGCCCACACAGCCTT-3’。PCR反應(yīng)體系如下：SYBR?Prime Ex Taq(Tli RNaseH Plus)10 μL，PCR上游引物(10 μmol/L) 0.4 μL，PCR下游引物(10 μmol/L) 0.4 μL，ROX Reference Dye(50×)0.4 μL，DNA模板 2 μL，dH2O 6.8 μL。反應(yīng)條件為95 ℃ 30 s；然后95 ℃ 5 s，60 ℃ 34 s 共40個(gè)循環(huán)。反應(yīng)結(jié)束，設(shè)定最佳閾值，得到Ct值。用2-ΔΔCt法計(jì)算。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(mean±SD)表示，所有統(tǒng)計(jì)分析均使用SPSS 13.0統(tǒng)計(jì)軟件處理。組間均數(shù)比較采用單因素方差分析，兩兩比較采用q檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

結(jié) 果

1 不同周齡各組小鼠血脂水平

ApoE-/-小鼠血脂可自發(fā)性升高，高脂飲食能加速血脂增高速度。與對(duì)照組比較，模型組血清的TC、TG和LDL-C均升高(P<0.05)，以TC和LDL-C增高最為明顯，且隨周齡增加而增高；而HDL-C有所下降(P<0.05)。給予阿托伐他汀后血清TC、TG和LDL-C均降低(P<0.05)，且以TC和LDL-C下降最為顯著，HDL-C水平有所升高(P<0.05)。30周齡干預(yù)組與20周齡干預(yù)組比較，TC和LDL-C有下降趨勢(shì)，HDL-C有升高趨勢(shì)，但差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見(jiàn)表1。

表1 各組小鼠血脂水平的比較

*P<0.05vscontrol at the same age;#P<0.05vsmodel at the same age;△P<0.05vs20 weeks in the same group.

2 不同周齡小鼠主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊的病理學(xué)觀察

C57BL/6J小鼠正常組可見(jiàn)主動(dòng)脈壁厚薄均勻，內(nèi)膜完整，無(wú)動(dòng)脈粥樣硬化斑塊形成，血管中層VSMCs亦未見(jiàn)明顯病理變化。20周齡ApoE-/-小鼠模型組主動(dòng)脈內(nèi)膜明顯增厚，局部可見(jiàn)明顯腔內(nèi)凸起的纖維斑塊，纖維帽較完整，內(nèi)含脂質(zhì)中心及泡沫細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞、彈力纖維及膠原組織構(gòu)成纖維帽主要結(jié)構(gòu)；干預(yù)組內(nèi)膜不完整，無(wú)連續(xù)性，局部?jī)?nèi)膜明顯增厚，并有泡沫細(xì)胞聚集。30周齡模型組AS斑塊彌漫血管全管腔，纖維肌性成分減少，有壞死中心形成，斑塊底部有柳葉狀的膽固醇結(jié)晶；干預(yù)組斑塊面積及病變程度較模型組顯著減輕，見(jiàn)圖1。

Figure 1.Observation of aortas in each group under optical microscope(HE staining,×40).

3 不同周齡小鼠主動(dòng)脈粥樣硬化斑塊面積定量分析

20周齡模型組、阿托伐他汀干預(yù)組與正常對(duì)照組 AS 斑塊面積/動(dòng)脈總面積分別為0.20±0.03、0.14±0.01與0；30周齡模型組、阿托伐他汀干預(yù)組與正常對(duì)照組 AS 斑塊面積/動(dòng)脈總面積分別為0.44±0.03、0.23±0.02與0；與20周齡模型組比較，30周齡模型組斑塊面積顯著增大(P<0.05)；而同一周齡小鼠斑塊面積相比較，阿托伐他汀干預(yù)組顯著小于模型組(P<0.05)，見(jiàn)圖2。

Figure 2.The plaque area/lumen area in different groups. Mean±SD. n=10. *P<0.05 vs model at the same age; #P<0.05 vs 20 weeks in the same group.

4 不同周齡小鼠主動(dòng)脈TRPC5蛋白免疫組化IA值的表達(dá)變化

與正常組C57BL/6J小鼠比較，TRPC5蛋白在ApoE-/-小鼠模型組及阿托伐他汀干預(yù)組動(dòng)脈粥樣硬化斑塊中的表達(dá)明顯增高(P<0.01)，且以模型組增高最為明顯；同周齡ApoE-/-小鼠阿托伐他汀干預(yù)組中TRPC5蛋白表達(dá)較模型組有所下降(P<0.01)。30周齡干預(yù)組與20周齡干預(yù)組相比較呈下降趨勢(shì)(P<0.05)。30 周齡ApoE-/-小鼠模型組與20周齡模型組相比，30周齡C57小鼠與20周齡C57BL/6J小鼠比較均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見(jiàn)圖3～4。

5 不同周齡小鼠主動(dòng)脈TRPC5 mRNA的表達(dá)變化

各時(shí)點(diǎn)ApoE-/-小鼠模型組的TRPC5 mRNA水平顯著高于正常組C57BL/6J小鼠(P<0.05)，給藥治療后明顯降低(P<0.05)。20周齡正常對(duì)照組C57BL/6J小鼠mRNA表達(dá)比30周齡正常組略高，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。30周齡時(shí)ApoE-/-小鼠模型組TRPC5 mRNA表達(dá)稍高于20周齡模型組，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)；30周干預(yù)組較20周干預(yù)組相比有降低的趨勢(shì)，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，見(jiàn)圖5。

討 論

ApoE-/-小鼠[6]是目前公認(rèn)的研究AS發(fā)病機(jī)制以及抗AS藥理學(xué)研究等方面最經(jīng)典的動(dòng)物模型之一，而C57/BL6J小鼠與其具有相同的遺傳背景，因而常在研究中作為健康對(duì)照組。ApoE-/-小鼠AS的發(fā)病機(jī)制是通過(guò)影響肝臟對(duì)VLDL和乳糜微粒代謝，使膽固醇?xì)埩Ｔ谘獫{堆積引起高脂血癥，血脂持續(xù)增高，大量膽固醇在血管壁沉積形成AS，這與人類動(dòng)脈粥樣硬化形成過(guò)程相似[7]。ApoE-/-小鼠可以自發(fā)形成AS，高脂飲食能加速疾病進(jìn)程。本實(shí)驗(yàn)采用高脂飼喂ApoE-/-小鼠建立AS疾病模型，經(jīng)觀察發(fā)現(xiàn)隨時(shí)間延長(zhǎng)其血脂持續(xù)性增高，20周齡時(shí)形成表面的纖維帽，內(nèi)含脂質(zhì)、巨噬細(xì)胞、VSMCs和泡沫細(xì)胞的纖維斑塊，此時(shí)病變僅局限于部分血管壁；至30周齡演變?yōu)橹鄻影邏K，且斑塊彌漫整個(gè)血管橫切面，研究結(jié)果與劉劍剛等[8]的研究相一致。

動(dòng)脈粥樣硬化始動(dòng)環(huán)節(jié)為血管內(nèi)皮受損， LDL在內(nèi)皮下積聚并被自由基氧化，生成氧化修飾的低密度脂蛋白(oxidized LDL, ox-LDL)，ox-LDL參與VSMCs增殖與遷移，并促進(jìn)和加速AS進(jìn)展[9]。目前已證實(shí)VSMCs的增殖和遷移是決定AS及動(dòng)脈損傷后再狹窄的關(guān)鍵因素[10]。AS發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，作為對(duì)血管損傷和炎癥反應(yīng)的一部分，VSMCs由收縮表型轉(zhuǎn)變?yōu)樵鲋潮硇停粩嘣鲋场⑦w移到內(nèi)膜，釋放大量細(xì)胞外基質(zhì)(extracellular matrix，ECM)，并參與纖維斑塊的構(gòu)成。隨著AS病變發(fā)展，粥樣斑塊形成并向復(fù)合病變進(jìn)展時(shí)，VSMCs發(fā)生凋亡并且遠(yuǎn)大于增殖效應(yīng)，引起斑塊易損甚至破裂。

Figure 3.The expression of TRPC5 in the VSMCs of different groups (IHC,×400). The arrows indicate the lumen of the blood vessels.

Figure 4.IA value of TRPC5 in the VSMCs of different groups. Mean±SD. n=10. **P<0.01 vs control at the same age; ##P<0.01 vs model at the same age; △P<0.05 vs 20 weeks in the same group.

經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)TRPC家族在VSMCs中大量表達(dá)，最普遍的是TRPC1、TRPC4和TRPC5[11]。其中TRPC5通道蛋白具有脂質(zhì)離子亞型受體特性，可識(shí)別作為ox-LDL主要成分的溶血磷脂膽堿(lysophosphatidylcholine，LPC)，并且被ox-LDL中的1-磷酸鞘氨醇(sphingosine 1-phosphate，S1P)成分激活[12]。本實(shí)驗(yàn)觀察發(fā)現(xiàn)：TRPC5通道蛋白在正常組C57BL/6J小鼠主動(dòng)脈VSMCs中是穩(wěn)定低表達(dá)的；20周齡ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈VSMCs中表達(dá)量明顯增高，至30周齡時(shí)TRPC5蛋白表達(dá)量增加不明顯。其機(jī)制可能是，高脂血癥引起血管管壁ox-LDL明顯增高，激活了TRPC5通道，促進(jìn)VSMCs內(nèi)Ca2+的增加，并刺激VSMCs由收縮表型轉(zhuǎn)變?yōu)樵鲋潮硇瓦w移至血管內(nèi)膜，吞噬ox-LDL及脂質(zhì)形成泡沫細(xì)胞，參與纖維斑塊形成并促進(jìn)AS進(jìn)展。隨病情進(jìn)展至粥樣斑塊時(shí)，由于細(xì)胞外基質(zhì)、各種蛋白酶、多種刺激因子及胞內(nèi)Ca2+超負(fù)荷等相互作用，引起細(xì)胞損傷和促進(jìn)VSMCs凋亡程序啟動(dòng)，影響了TRPC5蛋白的表達(dá)。

Figure 5.The mRNA expression of TRPC5 in different groups. Mean±SD. n=10. *P<0.05 vs control at the same age; #P<0.05 vs model at the same age; △P<0.05 vs 20 weeks in the same group.

阿托伐他汀屬于3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶抑制劑，許多研究發(fā)現(xiàn)他汀類除調(diào)脂作用外，還具有改善血管內(nèi)皮細(xì)胞功能、抗炎、抗氧化、抑制VSMCs增生等其它作用[13]，并進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)他汀可以對(duì)多種離子通道進(jìn)行調(diào)控[14]。各種證據(jù)亦證明他汀類可以穩(wěn)定AS斑塊[15]，對(duì)心腦血管發(fā)揮保護(hù)作用。2013年美國(guó)心臟病學(xué)會(huì)與美國(guó)心臟協(xié)會(huì)聯(lián)合頒布的最新版降膽固醇治療降低動(dòng)脈粥樣硬化性心血管疾病(atherosclerotic cardiovascular disease，ASCVD)風(fēng)險(xiǎn)指南[16]中亦強(qiáng)調(diào)了他汀類藥物在ASCVD一二級(jí)預(yù)防的重要作用，但目前關(guān)于他汀抗AS的具體機(jī)制仍不明確。該實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)阿托伐他汀除了在高脂飼喂的ApoE-/-小鼠中的直接降脂作用外，還可以顯著縮小ApoE-/-小鼠主動(dòng)脈 AS斑塊面積并下調(diào)TRPC5蛋白的表達(dá)，且隨治療時(shí)間延長(zhǎng)其抑制作用更明顯。可能機(jī)制為，阿托伐他汀一方面通過(guò)加速血液中LDL清除，減少其被氧化為ox-LDL的機(jī)會(huì)，并減少TRPC5通道的激活從而抑制VSMCs增殖和遷移；另一方面可以通過(guò)降低細(xì)胞內(nèi)活性氧，減少氧化應(yīng)激從而抑制了TRPC5蛋白表達(dá)；抑制細(xì)胞內(nèi)鈣超載，延緩了動(dòng)脈粥樣硬化的病理進(jìn)程。

綜上所述，我們發(fā)現(xiàn)TRPC5在ApoE-/-小鼠AS斑塊形成的過(guò)程中表達(dá)上調(diào)，而阿托伐他汀可以下調(diào)TRPC5通道表達(dá)，且下調(diào)作用隨時(shí)間延長(zhǎng)更為顯著。因此推測(cè)阿托伐他汀可能通過(guò)減少TRPC5表達(dá)來(lái)抑制VSMCs增殖和遷移，從而延緩AS斑塊進(jìn)展。我們將通過(guò)后續(xù)實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步探討TRPC5在VSMCs增殖與遷移過(guò)程中的具體分子機(jī)制及阿托伐他汀的作用機(jī)制，為AS防治提供新的思路。

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Effect of atorvastatin on TRPC5 expression in atherosclerosis of apolipoprotein E-knockout mice

QI Jie1, XU Fang2, MA Hui1, CUI Jian-guo1, ZHANG Qing-tan1

(1DepartmentofGeriatricMedicine,AffiliatedHospitalofBinzhouMedicalUniversity,Binzhou256603,China;2DepartmentofPathophysiology,BinzhouMedicalUniversity,Yantai264003,China.E-mail:qtzhangby@126.com)

AIM: To observe the changes of transient receptor potential channel 5 (TRPC5) in vascular smooth muscle cells (VSMCs) of apolipoprotein E-knockout (ApoE-/-) mice and the effect of atorvastatin interference, and to investigate the mechanism of atorvastatin therapy. METHODS: MaleApoE-/-mice at 6 weeks of age were used to establish the atherosclerosis model by feeding with hyperlipidic diet. The mice were randomly divided into model group and atorvastatin group. The mice in atorvastatin group were lavaged with atorvastatin at 20 mg·kg-1·d-1, while the mice in model group received normal saline. The healthy C57BL/6J mice with the same age and the same genetic background, feeding with ordinary food, served as control group. At the time points of 14 and 24 weeks, the mice were sacrificed. The serum was collected for detecting the lipid levels. The aortic roots of the heart were taken to make paraffin sections with HE staining for measuring and comparing the relative atherosclerotic plaque area in each section. The expression of TRPC5 in VSMCs was examined with immunohistochemical staining. The mRNA levels of TRPC5 in the serum and the thoracoabdominal aorta were measured by real-time PCR. RESULTS: Compared with model group, blood lipids in atorvastatin group were significantly decreased, and the formation of plaque under aorta intima also decreased. The protein expression of TRPC5 in atorvastatin group decreased significantly compared with model group. Compared with 20-week model group, TRPC5 in 30-week model group showed increasing tendency, but has no statistical significance. Compared with 20-week atorvastatin group, TRPC5 of 30-week atorvastatin group declined. CONCLUSION: Atorvastatin suppresses TRPC5 expression, thus attenuating atherosclerotic development inApoE-/-mice.

TRPC5; Apolipoprotein E; Atherosclerosis; Vascular smooth muscle cells; Atorvastatin

1000- 4718(2015)03- 0457- 06

2014- 11- 10

2014- 12- 08

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No. 81401625)； 濱州醫(yī)學(xué)院科研啟動(dòng)基金資助項(xiàng)目(No. BY2009KYQD05)

△通訊作者 Tel: 0543-3258527； E-mail: qtzhangby@126.com

R541.4； R972+.6

A

10.3969/j.issn.1000- 4718.2015.03.013