穿心蓮粉末飲片顆粒度適宜性研究*

★ 陸曉暉 唐芳瑞 馬志林 邵峰 黃慧蓮 劉榮華＊＊＊ (1.佛山市順德區(qū)第一人民醫(yī)院 廣東佛山5800;.江西中醫(yī)藥大學 南昌0004;.江西匯仁集團有限公司 南昌005)

穿心蓮為爵床科植物穿心蓮Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees的干燥地上部分。味苦，性寒。歸心、肺、大腸、膀胱經。具有清熱解毒、涼血、消腫之功效，主治感冒發(fā)熱、咽喉腫痛、口舌生瘡、頓咳勞嗽、泄瀉痢疾、熱淋澀痛、癰腫瘡瘍、蛇蟲咬傷等癥［1］。主要含二萜內酯類、黃酮類等活性成分［2］，其中二萜內酯類成分穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯是其主要活性成分和質量控制指標［1］。因其成分二萜內酯為脂溶性成分，溶出性能較差。劉開永等［3］研究發(fā)現，穿心蓮超微粉體中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯溶出速度高于其常規(guī)粉體，但此研究僅針對超微粉體，且僅以穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯為指標。然而對其主要活性成分的溶出度、指紋圖譜及浸出物等多角度探討穿心蓮粉末飲片顆粒度適宜性問題，目前尚未見報道。

中藥粉末飲片包括“散劑”“煮散”“袋泡劑”等，作為傳統(tǒng)中醫(yī)藥防治疾病的重要載體之一，是中藥飲片的重要組成部分，具有用量少、效果佳、服用便捷、活性成分溶出快等優(yōu)勢。本文以穿心蓮藥材為研究對象，對其進行粉碎分級處理，以主要活性成分穿心蓮內酯溶出度、總浸出物、HPLC指紋圖譜為指標，綜合考察分析，探討不同顆粒度對穿心蓮粉末飲片的質量影響，旨在為穿心蓮飲片的高效臨床應用提供實驗依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Aglient1200高效液相色譜儀，Agilent ChemStation工作站以及VWD檢測器(美國Aglient公司);精密恒溫水浴鍋(HH-S型，中國江蘇省金壇市醫(yī)療儀器廠);賽多利斯BT25S十萬分之一電子天平(德國Sartorius公司);數顯鼓風干燥箱(Gzx-9070MBE型，上海博迅實業(yè)有限公司醫(yī)療設備廠)。

1.2 試藥 穿心蓮內酯對照品(含測用，批號110797-200307，購于中國藥品生物制品檢定所);甲醇為色譜純;甲醇為分析純;水為雙蒸水(自制)。

穿心蓮藥材購于江中中藥飲片有限公司，經江西中醫(yī)藥大學劉榮華教授鑒定為爵床科植物穿心蓮Andrographis paniculata(Burm.f.)Nees的全草干燥品。

按照《中華人民共和國藥典》2010年版(一部)ⅡA“藥材取樣法”分別取上述試驗樣品，除去雜質，低溫緩慢烤干或弱日光下曬干，篩去碎屑。取穿心蓮藥材干燥品若干克，經粉碎機粉碎后，分別通過藥典篩1-9號，制備成10個同一批次藥材的不同顆粒度飲片樣品，編號依次為0-9號，備用，見表1。

表1 樣品分級表

2 穿心蓮粉末飲片中主要活性成分穿心蓮內酯的溶出度測定

2.1 供試品溶液的制備 根據常規(guī)飲片服用方式進行模擬，對已制備的10組穿心蓮顆粒化飲片樣品分別進行提取:分別精密稱取2.0g，以飲片質量:蒸餾水體積=1∶15，置于50mL圓底燒瓶中，加入30mL蒸餾水，稱重，以水浴進行回流提取，提取時間30min，趁熱過濾，放冷，加水補足重量，取濾液1mL，以1∶1甲醇稀釋定容至2mL，充分搖勻，吸取甲醇液若干，過0.45μm有機系濾頭，得樣品制備液，備用。

2.2 對照品溶液的制備 精密稱取穿心蓮內酯對照品5.37mg，置于10mL容量瓶中，加甲醇超聲溶解，定容，搖勻，制備成0.537mg/mL的對照品溶液，儲備備用。

2.3 色譜分離條件 Aglient1200高效液相色譜儀，Agilent ChemStation工作站以及VWD檢測器(美國Aglient公司);色譜柱:大連依利特-C18柱(4.6mm×200mm，5μm);流動相:乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)，梯度洗脫(0～30min，15%～30%A;30～50min，30%～75%A;50～60min，75%A);檢測波長:225nm;柱溫:25℃;進樣量:10μL;流速:1.0mL/min。

2.4 系統(tǒng)適應性實驗 分別精密吸取空白對照溶液、對照品溶液、供試品溶液各10μL，按“2.3項”下色譜條件依次注入高效液相色譜儀中，采用外標法測定含量，在上述條件下，得到色譜峰理論塔板數均不小于8 000，分離度均大于1.5。

2.3 方法學考察

2.3.1 線性關系考察 精密吸取一定量的穿心蓮內酯對照品儲備溶液，用甲醇稀釋調配成系列濃度的對照品溶液，得序列對照品溶液中穿心蓮內酯濃度(0.005 37，0.010 47，0.026 85，0.053 7，0.107 4mg/mL)，分別進樣10μL，測定峰面積，以對照品溶液的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標進行線性回歸，得到穿心蓮內酯的線性回歸方程:Y=19122X+5.7947(r=0.9991)，線性范圍:0.0537～1.074μg。

2.3.2 精密度試驗 取穿心蓮內酯對照品溶液，按上述色譜條件進樣10μL，連續(xù)5次，記錄該對照品的峰面積，計算其峰面積RSD值為0.49%，表明儀器的精密度良好。

2.3.3 穩(wěn)定性試驗 稱取樣品4號，按“2.1”方法制備供試溶液，按上述色譜條件，分別在0，2，4，8，12h進樣10μL測定，得到穿心蓮內酯的峰面積，計算其峰面積RSD值為1.27%，表明樣品在12h內的穩(wěn)定性良好。

2.3.4 重復性試驗 分別取6號穿心蓮顆粒化飲片樣品5份，按“2.1”方法制備供試溶液，按上述色譜條件，分別進樣10μL分別得出穿心蓮內酯峰面積，計算其峰面積RSD值0.74%，表明樣品重現性良好。

2.3.5 加樣回收率試驗 精密稱取已知含量的穿心蓮粉末飲片5號樣品5份，各2.0g，分別加入與樣品量之比約為1∶1的對照品，按“2.1”項下方法制備得供試品，各進樣10μL，分別計算得回收率，結果見表2。由以下結果表明，穿心蓮內酯的回收率符合實驗要求，表明本實驗方法的準確定良好。

表2 加樣回收率試驗結果(n=5)

2.3.6 實驗結果 根據上述方法測定了10種穿心蓮粉末飲片中穿心蓮內酯的溶出度，結果見表3。

表3 穿心蓮粉末飲片穿心蓮內酯溶出度

3 穿心蓮顆粒化飲片浸出物測定

分別精密稱定穿心蓮粉末化飲片組，各10.0g，每組平行測定3次，以飲片質量:蒸餾水體積=1∶15，置于500mL圓底燒瓶中，加入150mL蒸餾水，以水浴回流提取，時間30min，趁熱過濾，放冷，水浴蒸發(fā)，減壓干燥，至恒重，采用減重法進行稱定。結果見表4。

表4 穿心蓮粉末飲片熱水提取浸膏得率(n=3)

4 穿心蓮顆粒化飲片HPLC指紋圖譜測定與分析

4.1 樣品前處理 分別精密稱取穿心蓮粉末飲片各組樣品，各1.0g，以飲片質量:蒸餾水體積=1∶30，按“2.1”項下制備供試溶液的方法處理，得樣品制備液，備用。

4.2 色譜條件 按照“2.3項”下的色譜條件測定10組穿心蓮粉末飲片樣品的HPLC指紋圖譜，并進行分析。

4.3 實驗結果 按上述色譜分析法測定10組穿心蓮粉末飲片的HPLC色譜指紋圖譜，見圖1。

圖1 穿心蓮粉末飲片HPLC色譜指紋圖譜

圖2 穿心蓮粉末飲片對照指紋圖譜共有峰的標定

4.3.1 共有峰的標定 利用“中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)2004A版”軟件，以穿心蓮原飲片(0號)為參照峰生成穿心蓮粉末飲片共有模式的對照指紋圖譜，如圖2。以5號峰為參照峰(S)，其保留時間為1，各共有峰的相對保留時間、相對峰面積見表5、6所示，結果表明RSD值小于3%，符合指紋圖譜的要求。

4.3.2 共有峰相對峰面積

4.3.3 非共有峰面積 通過對10組穿心蓮粉末飲片樣品的HPLC指紋圖譜結果測定，統(tǒng)計各組粉末飲片非共有峰面積占總峰面積比值，其共有峰面積百分比在15.32%～20.90%，非共有峰面積的百分比在79.10%～84.68%，結果見表7。

表5 10組穿心蓮粉末飲片共有峰相對保留時間

表6 10組穿心蓮飲片共有峰相對峰面積

表7 10組穿心蓮粉末飲片指紋圖峰面積表

5 小結

穿心蓮粉末飲片粉碎度對穿心蓮內酯溶出呈現隨著粉碎度的增加而增長的趨勢。原因可能是穿心蓮飲片屬草本植物，淀粉含量較低，水煎煮不易糊化，有利于有效成分物質的溶出，但當粉碎度達到一定程度后(120目以上)，穿心蓮內酯基本能完全溶出。穿心蓮粉末飲片浸出物同樣隨顆粒度減小而增加的趨勢，但在80目以上時浸膏得率基本達到穩(wěn)定值。指紋圖譜分析表明，隨著顆粒度的越細，穿心蓮指紋圖譜總峰面積出現先增加后降低的趨勢，并在80～120目時達到最大值，大于200目時，總峰面積降低更明顯。綜合分析以上結果，我們擬定120～150目為穿心蓮粉末飲片的最佳顆粒度，此時其粉末飲片質量最佳。

［1］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典﹒一部［S］.北京:化學工業(yè)出版社，2010:251-252.

［2］蔣珍藕.穿心蓮屬植物化學成分研究進展［J］.中成藥，2011，33(8):1 382-1 388.

［3］劉開永，張敏，李道敏，等.微粉化穿心蓮中穿心蓮內酯和脫水穿心蓮內酯的溶出特性［J］.中成藥，2010，32(4):673-675.