仙茅酒對小鼠抗疲勞作用的影響

潘 明，陳欲云，劉春麗，鄔亞平，代聯(lián)伶，陳利娟

(四川理工學(xué)院 a.生物工程學(xué)院;b.化學(xué)與制藥工程學(xué)院，四川 自貢 643000)

引言

仙茅(Curculigo orchioides Gaertn.)，又名地棕、獨茅、仙茅參等，為仙茅屬藥用植物;具有補腎助陽、益精血、強筋骨和行血消腫的作用。文獻［1］報道仙茅、大葉仙茅和三葉鬼針草已被傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)用于治療各種疾病，如陽痿、腰膝無力、胃腸道和心臟疾病。董國明［2］研究表明，仙茅提取物對陽虛型SD大鼠血清SOD、血清Zn/Cu比值、血漿cAMP/cGMP水平的恢復(fù)可能是仙茅壯陽作用的機制。Wu Xiuying［3］的研究表明仙茅苷可以降低老年大鼠腦AchE的活性，并下調(diào)BACE1的表達而改善老年大鼠記憶缺失的癥狀。

運動性疲勞亦稱體力性疲勞，在中醫(yī)學(xué)屬于“勞”、“虛勞”的范疇，即勞動或運動可導(dǎo)致機體陽氣不足而引發(fā)肢軟乏力、神疲倦怠等氣虛癥候，形成體力性疲勞［4］。運動過程中，可因出汗津液損耗導(dǎo)致陰虛之癥;另一方面運動可致氣虛血瘀之癥;故人體能否迅速補充由于運動所消耗的精氣，排出運動過程中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物，恢復(fù)機體陰陽平衡是機體抗運動性疲勞的關(guān)鍵。

中國民間仙茅浸泡于酒中，制成仙茅酒用于治療陽痿滑精，腰膝冷痛，男子精寒，女子宮冷不孕，老年遺尿，小便余瀝等疾病。但尚未見仙茅酒抗疲勞作用的文獻報道，本研究對仙茅酒影響小鼠抗運動性疲勞作用機制做初步探討。

1 材料與儀器

1.1 材料

超氧化物歧化酶(SOD)測試盒，批號:20131206;乳酸脫氫酶(LDH)試劑盒，批號:20140317;肌糖原及肝糖原測定試劑盒，批號:20140121;全血乳酸(LD)試劑盒，批號:20140305;均購于南京建成生物工程研究所。仙茅，批號:20131208，購于四川省中藥飲片有限公司。

1.2 實驗動物

SPF級ICR小鼠50只，雄性，購于中國醫(yī)學(xué)研究院四川省人民醫(yī)院動物實驗中心，動物生產(chǎn)許可證SCXK(川)2013-15。

1.3 儀器

H-1850R臺式高速離心機，長沙湘儀離心機儀器有限公司;JJ-1電動攪拌器，常州國華電器有限公司;756pc紫外可見分光光度計，上海舜宇恒平科學(xué)儀器有限公司。

2 實驗方法

2.1 仙茅酒的制備

將仙茅200 g切成3 cm小段后浸泡于1000 mL小曲酒中，密封21天后過濾即得。

2.2 動物分組及給藥

SPF級ICR小鼠50只，正常飼養(yǎng)1周，開始實驗。按體質(zhì)量隨機分為空白對照組、小曲酒組、仙茅酒低劑量、中劑量、高劑量5組，每組10只。給藥量參照《藥理與中藥藥理實驗》［5］中推薦的成人服用中藥劑量折換成小鼠服用劑量，即空白對照組灌胃等劑量生理鹽水0.1 mL/10gBW，小曲酒組灌胃等劑量小曲酒0.1 mL/10gBW，仙茅酒低、中、高劑量組分別灌胃劑量為0.06 mL/10gBW、0.12 mL/10gBW、0.24 mL/10gBW，每天灌胃1次，連續(xù)14 d。

2.3 血清SOD、LDH測定

各組小鼠連續(xù)給藥14 d，參照《保健食品功能學(xué)評價程序和方法》［6］中抗疲勞作用檢驗方法進行實驗。各組小鼠末次給藥30 min后，稱重，在小鼠尾根部負荷一塊質(zhì)量為小鼠體質(zhì)量10%的重物，將小鼠置于水溫25℃、水深25 cm的水箱中游泳3 min，然后將小鼠取出，5 min后摘眼球取血，收集于 2 mL離心管中，3500 r/min離心8 min，取上清即得血清。

血清SOD活力測定按照試劑盒說明書操作，血清中總SOD(T-SOD)活力計算公式:

血清LDH活力測定，乳酸脫氫酶催化乳酸生成丙酮酸的同時將煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)還原成NADH。通過測定NADH在440 nm處吸光度可求得各樣本乳酸脫氫酶的活力。

2.4 全血乳酸(LD)含量測定

依照全血乳酸(LD)試劑盒說明書步驟操作，按2.3項小鼠摘眼球取血，留取50 μL全血，置于用肝素鈉處理過的離心管中，再加入0.6 mL蛋白沉淀劑，靜置10 min，3500 r/min 離心 8 min，取上清液 20 μL 加入酶工作液和顯色劑充分混勻，37℃孵育10 min，加入終止劑終止反應(yīng)。于530 nm波長處測定其吸光度值。

2.5 肝糖原和肌糖原含量測定

［7］濃硫酸可使得糖原脫水生成糖醛衍生物，后者再與蒽酮作用形成藍色化合物與同法處理的標準葡萄糖溶液比色定量。各組小鼠取血后立即脫頸椎處死，解剖取出肝臟和后肢肌肉，置于冰凍生理鹽水中，剔除結(jié)締組織，用濾紙吸干，稱重(樣本質(zhì)量≤100 mg為宜)。按樣本質(zhì)量(mg):堿液體積(μL)=1:3配制濃減溶液，將樣本加入濃堿溶液中，沸水水浴20 min，流水冷卻后加入蒸餾水，按照試劑盒說明書操作，于620 nm波長處，測各樣本OD值。糖原含量的計算公式:

2.6 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件，各組數(shù)據(jù)以±s表示。組間差異用單因素方差分析進行統(tǒng)計學(xué)分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié)果與討論

3.1 小鼠一般情況變化

對小鼠一般情況觀察(表1)，用藥兩周后與空白對照組比較，仙茅低、中劑量組小鼠毛色、食欲正常，精神狀態(tài)好，體質(zhì)量無顯著性差異(P＞0.05);仙茅酒高劑量組小鼠體質(zhì)量顯著性增加(P＜0.05)，這可能是由于仙茅酒高劑量增加了小鼠食欲使得體質(zhì)量顯著性增加。

表1 各組小鼠體質(zhì)量

3.2 血清SOD的含量

小鼠血清中SOD的含量見表2，與空白對照組比較，仙茅酒高、中劑量組血清 SOD含量顯著升高(P＜0.05)，仙茅酒低劑量組有增加趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義;與小曲酒組比較，仙茅酒高、中劑量組血清SOD含量也顯著性升高(P ＜0.05)。

在勞累性運動中，SOD被認為是抑制活性氧產(chǎn)生的抗氧化酶系中最先起作用的酶系之一［8］。另有研究報道［9］，血清中的SOD活性增加與運動性疲勞所致的氧化應(yīng)激反應(yīng)加強有關(guān)系;SOD能夠增強機體內(nèi)代謝廢物的清除能力，從而消除疲勞。連續(xù)給藥14 d后，仙茅酒中的活性成分顯著性地增加小鼠血清SOD含量，說明仙茅酒能增加小鼠體內(nèi)陰離子自由基的清除從而增加小鼠抗疲勞能力。

表2 仙茅酒對小鼠血清SOD含量的影響

3.3 血清LDH的活力

檢測小鼠血清中LDH含量，結(jié)果見表3。與空白對照組相比，仙茅酒組LDH活力均有提高，但沒有統(tǒng)計學(xué)意義。

表3 仙茅酒對小鼠血清LDH活力的影響

LDH是一個能夠準確反應(yīng)肌肉損傷程度的指標，LDH可以催化乳酸轉(zhuǎn)化為丙酮酸，與乳酸的清除代謝相關(guān)，可減少乳酸的堆積［10］。由此可見，血清LDH活力是反映乳酸清除速度的指標。連續(xù)給藥14 d后，負重游泳3 min，各組小鼠血清中LDH含量均有增高的趨勢，但無統(tǒng)計學(xué)意義。可能延長仙茅酒干預(yù)時間，可以顯著性地提高小鼠血清LDH而加快乳酸清除速度。

3.4 全血LD的含量

小鼠全血LD含量檢測結(jié)果見表4，與空白對照組比較，仙茅酒高劑量組(P＜0.05)小鼠全血LD含量顯著性降低，小曲酒組、仙茅酒低、中劑量組小鼠全血LD含量有降低趨勢，但無顯著性差異(P ＞0.05);與小曲酒組比較，仙茅酒高劑組小鼠全血LD含量顯著性降低(P ＜0.05)，提示仙茅酒中的活性成分增加了小曲酒的抗疲勞作用。

表4 仙茅酒對小鼠全血乳酸含量的影響

Chang Qi［11］的研究表明，全血乳酸是一個運動強度指標，電流刺激組的大鼠肌肉乳酸濃度低于運動對照組，提示肌肉乳酸濃度降低促進了運動大鼠有氧代謝過程中ATP的產(chǎn)生。肌乳酸是供能體系的中間產(chǎn)物，長時間劇烈運動會使機體相對缺氧，糖酵解加快，產(chǎn)生大量肌乳酸，這是導(dǎo)致疲勞的重要原因。運動過程中，肌肉產(chǎn)生的乳酸會在5～15 min內(nèi)滲入血液，使血乳酸含量上升，最終二者達到平衡，所以可以通過測定血乳酸含量反映肌乳酸情況［12］。本研究中各組小鼠連續(xù)給藥14 d，負重游泳3 min后，仙茅酒高劑量組可顯著性地降低小鼠全血中LD含量，從而提高小鼠抗疲勞的能力。

3.5 肝糖原及肌糖原的含量

小鼠肝糖原和肌糖原含量測定結(jié)果見表5，與空白對照組比較，仙茅酒高、中劑量組小鼠肌糖原含量明顯增高(P＜0.05)，仙茅酒高劑量組小鼠肝糖原含量也顯著性增高(P＜0.05);與小曲酒組比較，仙茅酒高劑量組小鼠肌糖原含量顯著性升高(P＜0.05)。

表5 仙茅酒對小鼠肝糖原與肌糖原的影響

在運動過程中，ATP的消耗和能源的不足是身體疲勞的關(guān)鍵因素，機體的能量供應(yīng)主要依賴于糖原發(fā)生糖酵解產(chǎn)生的ATP，所以糖原的儲備直接影響運動能力［13］。在中等運動強度過程中，疲勞主要是由于肌肉中的糖原耗盡［14］。文獻［15］報道，運動使得肌糖原不斷消耗，機體為維持血糖水平，將動用肝糖原而導(dǎo)致肝糖原減少。在本研究中，仙茅酒可以通過增加肝糖原與肌糖原含量從而增加小鼠的運動耐力，減輕疲勞程度。

4 結(jié)束語

實驗結(jié)果顯示，仙茅酒高劑量組(0.24 mL/10gBW)和中劑量組(0.12 mL/10gBW)可以提高小鼠的運動耐力，其機制可能與仙茅酒增加小鼠血清SOD含量從而加強機體清除運動過程中產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物的能力，間接地增強小鼠運動耐力有關(guān);同時降低小鼠全血LD含量及升高小鼠肌糖原和肝糖原含量，為小鼠運動抗疲勞提供直接的能源。

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