熟地配方顆粒質量標準研究

王科鋒(武漢市中醫醫院,湖北 武漢 430014)

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熟地配方顆粒質量標準研究

王科鋒
(武漢市中醫醫院,湖北 武漢 430014)

目的：建立熟地配方顆粒的質量標準。方法：采用高效液相色譜法對熟地配方顆粒的主要活性成分毛蕊花糖苷進行定量分析。結果：毛蕊花糖苷在0.0135 3～0.541 2μg范圍內與峰面積線性關系良好(r=0.999 6)；平均加樣回收率為98.04%,RSD為1.65%(n=6)。結論：本方法簡便、準確、重復性好,可作為熟地配方顆粒的質量控制方法。

熟地黃；配方顆粒；高效液相色譜法；毛蕊花糖苷

熟地為玄參科植物地黃的塊根,具有補血滋陰的功效,可用于治療血虛萎黃,眩暈,心悸失眠,月經不調,崩漏,亦可用于腎陰不足的潮熱骨蒸、盜汗、遺精、消渴。熟地配方顆粒是由單味中藥飲片經提取濃縮制成,供中醫臨床配方用的制劑,其有效成分、性味、主治、功效和飲片完全一致,且不用煎熬而直接熱水沖服,服用簡單方便,療效確切,被越來越多患者認可,但其缺乏有效的質量控制標準,導致市面上流通的熟地配方顆粒質量不一,療效不穩定。本實驗采用高效液相色譜法對熟地配方顆粒主要活性成分毛蕊花糖苷的含量進行測定[1],為熟地配方顆粒的質量控制提供有效手段。

1 儀器與試藥

1.1 實驗儀器

日本島津高效液相色譜儀(LC-20AD泵、SIL-20A自動進樣器、SPD-M20A紫外檢測器、LC-SoLution色譜工作站)； KQ-500PV型數控超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司,40W,100 Hz)；FA2004電子分析天平(上海天平儀器廠,萬分之一)。

1.2 實驗試藥

毛蕊花糖苷對照品(批號：111530-201310,中國食品藥品檢定研究院,含量：93.3%)；熟地配方顆粒(江陰天江藥業有限公司，4g/袋,相當于飲片10g)；0.1%醋酸溶液；乙腈為色譜純；甲醇為分析純；水為超純水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱：ODS Phenomenex Gemini C18柱(250mm×4.6mm,5μm)；流動相：乙腈-0.1%醋酸溶液(16∶84)；流速：1.0mL·min-1；檢測波長：334nm；進樣量：10μL；柱溫：30℃,理論塔板數不低于5 000。

2.2 溶液配制

2.2.1 對照品溶液配制 精密稱取毛蕊花糖苷對照品14.5mg,置于50mL容量瓶,加流動相溶解,定容,得濃度為270.6μg·mL-1的毛蕊花糖苷對照品溶液,精密量取2mL置入10mL容量瓶中,加流動相定容,得濃度為54.12μg·mL-1的毛蕊花糖苷對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液配制 精密稱取熟地配方顆粒2g,置錐形瓶中,精密加入80%甲醇50mL,稱重,在40W,60Hz條件下超聲30min,放冷至室溫,以80%甲醇補足失重,搖勻濾過,即得供試品溶液。

2.3 專屬性考察

取毛蕊花糖苷對照品溶液、供試品溶液各進樣10μL,按“3.1”色譜條件測定,記錄色譜圖。結果顯示供試品溶液中毛蕊花糖苷分離度好,其他成分對毛蕊花糖苷的測定無干擾。見圖1。

2.4 線性關系考察

精密量取54.12μg·mL-1毛蕊花糖苷對照品溶液0.25、0.5、1.0、2.5、5.0mL分別置于10mL容量瓶中,流動相定容搖勻,得濃度為1.353、2.706、5.412、13.53、7.06μg·mL-1的對照品溶液,各進樣10μL,以毛蕊花糖苷濃度為橫坐標,峰面積為縱坐標作回歸方程,得線性回歸方程Y=16 763X-7 948.9；r=0.999 6。結果表明毛蕊花糖苷在1.353～54.12μg·mL-1范圍內線性關系良好。

2.5 精密度試驗

取54.12μg·mL-1毛蕊花糖苷對照品溶液進樣10μL,按“2.1”色譜條件重復進樣 6次,以毛蕊花糖苷峰面積計算RSD為0.92%,表明儀器精密度良好。

圖1 各溶液HPLC圖譜(1為毛蕊花糖苷峰)

2.6 穩定性試驗

取“2.2.2”項下供試品溶液,在0、2、4、8、24、48h進樣10μL,按“2.1”色譜條件測定,計算得RSD為1.14%,說明供試品溶液在48h內穩定性良好。

2.7 重復性試驗

取同一批熟地配方顆粒適量,按“2.2.2”供試品溶液的制備方法分別制備6份供試品溶液,按“2.1”色譜條件測定毛蕊花糖苷的峰面積,得RSD為1.58%,表明此方法重復性良好。

2.8 加樣回收率試驗

精密稱取已知含量的熟地配方顆粒1g共6份,分別加入0.9mL 270.6 μg·mL-1的毛蕊花糖苷對照品溶液,按“2.2.2” 項供試品制備方法制備,按“2.1”色譜條件各進樣10μL,測定毛蕊花糖苷的峰面積,樣品中毛蕊花糖苷的平均加樣回收率為98.04%,RSD為1.65% 。詳見表1。

2.9 樣品含量測定

取三個批號的熟地配方顆粒樣品,每個批號3份,每份精密稱取2g,按“2.2.2”項下供試品制備方法制備供試品溶液,按“2.1”色譜條件各進樣10μL,測定毛蕊花糖的峰面積,代入回歸方程計算,見表2。熟地配方顆粒中毛蕊花糖苷的平均含量分別為486.35、484.11、488.26μg·g-1,RSD分別為1.51%、0.51%、0.63% 。

表1 加樣回收率結果

表2 樣品含量測定結果

3 討論

3.1 供試品溶液制備方法確定

本實驗中,比較了加熱回流提取法和超聲提取法對熟地配方顆粒中毛蕊花糖苷的提取效率,得出超聲提取法提取效率高且所用時間較短,故選用超聲提取法。在提取溶劑方面,比較了乙醇、甲醇,最后測出用甲醇作提取溶劑時,毛蕊花糖苷含量較高,且對不同濃度甲醇溶液做比較,最終選定80%甲醇溶液作提取溶劑。對超聲提取時間確定時,發現超過半小時,毛蕊花糖苷含量不再增加,故提取時間選定為半小時。

3.2 含量限度確定

本實驗所用的熟地配方顆粒規格為4g/袋,相當于飲片10g,按2010版《中國藥典》規定熟地中毛蕊花糖苷含量不得少于0.02%,則熟地配方顆粒中毛蕊花糖苷的含量不得少于500μg·g-1,而實驗測出三個批號熟地配方顆粒中毛蕊花糖苷的平均含量為486.35,484.11,488.26μg·g-1,均小于500μg·g-1,查閱相關文獻[2-4]得出毛蕊花糖苷不穩定,在熟地配方顆粒制備過程中含量減少,建議以毛蕊花糖苷含量不得少于400μg·g-1為熟地配方顆粒的質量標準。

本實驗操作簡便,精密度高,穩定性良好,能準確測出熟地中毛蕊花糖苷的含量,可用于熟地配方顆粒的質量控制與綜合評價。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].北京：化學工業出版社,2010:115-116.

[2] 吳培培,閆明,霍仕霞.苯乙醇苷類化合物的研究進展[J].醫藥導報,2011,30(10):1316-1319.

[3] 尚偉慶.地黃炮制過程中毛蕊花糖苷變化的研究[J].新中醫,2014,46(5):209-211.

[4] 王宏潔,金亞紅,李鵬躍,等.鮮、生、熟地黃藥材中3種活性成分含量的比較[J].中國中藥雜志,2008,33(15):1923-1925.

(責任編輯：魏 曉)

2015-01-09

王科鋒(1990-),男,湖北省武漢市中醫醫院藥師,研究方向分為臨床藥學。

R284

A

1673-2197(2015)11-0040-02

10.11954/ytctyy.201511016