生熟五味子對玉泉丸降糖作用及化學成分影響研究

高 慧，張 爽，高 雁，佟 鑫

(遼寧中醫藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600)

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生熟五味子對玉泉丸降糖作用及化學成分影響研究

高 慧，張 爽，高 雁，佟 鑫

(遼寧中醫藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600)

目的：比較生熟五味子對玉泉丸降血糖作用及化學成分的影響，為五味子“生熟異用”提供實驗依據，并分析炮制原理。方法：采用鏈脲佐菌素(STZ)構建高血糖SPF級大鼠模型，于給藥第7天、14天采用血糖儀測定大鼠血糖值；采用HPLC法檢測玉泉丸中葛根素、五味子醇甲的含量，比較生熟五味子對玉泉丸降糖作用及指標性成分含量的影響。結果：兩種方法配制的玉泉丸降血糖作用無顯著性差異：含生五味子玉泉丸中，五味子醇甲、葛根素的含量分別為0.011 7%、0.032%；含醋五味子玉泉丸中，五味子醇甲、葛根素的含量分別為0.006 1%、0.024%。結論：玉泉丸原方選用生五味子較為科學合理。

五味子；醋制；玉泉丸；血糖值；五味子醇甲；葛根素

五味子為木蘭科植物五味子(SchisandraChinensis(Turcz.) Baill.)的干燥成熟果實，歸肺、心、腎經，收斂固澀、益氣生津、補腎寧心[1]。中醫學理論[2]認為五味子“入補藥熟用，入嗽藥生用”，即五味子“生熟異用”，《中國藥典》收載的五味子炮制品均為醋五味子，五味子醋制后可增強收斂酸澀的功效[3]。關于五味子炮制前后藥效學性能的研究，目前有保肝作用、免疫作用等方面的文獻報道[4-5]。本課題組前期對五味子補益、止咳、降血糖等作用進行生熟比較研究，從其臨床應用角度來說，復方是中藥臨床應用的主要形式，因此將五味子納入復方，將玉泉丸原方中生五味子換為醋五味子，與原方降糖作用進行比較，并選取五味子醇甲、葛根素等成分作為指標，分析玉泉丸化學成分，為五味子“生熟異用”的炮制原理及臨床合理應用提供實驗依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 動物 雄性SD大鼠，SPF級，體重180～220g，購于遼寧長生生物技術有限公司，SCXK(遼)2010-0001。

1.1.2 試劑 五味子，購自遼寧丹東鳳城五味子種植基地；天花粉、地黃、葛根、麥冬、甘草、糯米、大棗等均購自大連開發區保健大藥房，均對照2010版《中國藥典》自行鑒定。醋五味子自行炮制[4]。

陽性對照藥(阿卡波糖)，購自拜耳醫藥保健有限公司(BJ09769)。鏈脲佐菌素，購自Sigma公司(05758)。血糖試紙，購自拜安康有限公司(4991-2008)。五味子醇甲對照品(110857-200709)、葛根素對照品(110752-200511)均購自中國食品藥品檢定研究院。HPLC用水為純水，甲醇為色譜純。

1.1.3 儀器 拜安康血糖儀(拜耳醫藥保健有限公司，型號：1816)。高效液相色譜儀(日本島津LC-10AP)。醫用超聲清洗器(昆山超聲儀器有限公司)，電子天平(Mettler Toledo AG285)。

1.2 降血糖活性比較

1.2.1 玉泉丸(分別含生五味子、醋五味子)水煎液的制備 取天花粉、地黃、葛根、麥冬、糯米各15g，生五味子(或醋五味子)、甘草各5g，加10倍量水，煎煮3次，每次1h，合并煎液，濃縮，分別制成含生五味子或醋品五味子的玉泉丸水煎液(濃度均為0.84g/mL)。

1.2.2 造模 實驗大鼠高脂飼料喂養，同時灌服脂肪乳，每天1次，使大鼠體重達350g左右；采用腹腔注射STZ方式造模，劑量35mg/kg，造模72h后測定大鼠血糖值，將血糖值高于18mmol/L的大鼠隨機分為模型對照組、陽性對照組(阿卡波糖)、玉泉丸生五味子組、玉泉丸醋五味子組，另取未造模大鼠作為空白對照組，每組10只。空白對照組、模型對照組大鼠給予生理鹽水(10mL/kg)灌胃，其他各組大鼠給予相應藥液(10mL/kg)灌胃，每天1次，連續14天。

1.2.3 血糖值測定 給藥后第7天、14天，大鼠斷尾采血，采用血糖儀與血糖試紙測大鼠血糖值[6]。

1.3 化學成分比較

1.3.1 色譜條件 色譜柱：ECOSIL120-5-C18柱(250mm×4.6mm，5μm)；檢測波長：254nm；流動相：甲醇(A)-水(B)。梯度洗脫條件：0～20min，65%A；20～30min，75%A。流速：1.0mL·min-1；柱溫：室溫。

1.3.2 對照品溶液制備 精密稱取五味子醇甲、葛根素對照品，用甲醇溶解，制備混合對照品溶液，濃度分別為0.586、0.282mg/mL。

1.3.3 供試品溶液制備 取一定體積的玉泉丸(分別含生品、醋品五味子)水煎液，水浴蒸干后加甲醇溶解，過濾，濾液轉移至25mL容量瓶，加甲醇至刻度，搖勻，過0.45μm微孔濾膜，即得。

樣品含量測定：取玉泉丸(分別含生品、醋品五味子)水煎液供試品，按上述色譜條件操作，記錄色譜峰及峰面積，為計算樣品含量。

1.4 統計學方法

2 結果

2.1 降血糖實驗結果

灌服脂肪乳1個月后，大鼠體重基本達到350g以上，腹腔注射STZ后，大鼠均表現出典型糖尿病癥狀，“三多一少”，即多飲、多食、多尿及體重減輕。72h后血糖值表明造模成功，大鼠血糖值明顯升高，且大于18mmol/L。連續給藥7天后，給藥組大鼠血糖值有所降低，含生五味子組與含醋五味子組大鼠血糖下降明顯，含醋五味子組大鼠改善程度較含生五味子組無顯著性差異。給藥14天后，含生五味子、醋五味子玉泉丸組大鼠血糖繼續降低，接近正常血糖值水平，差異無統計學意義(P>0.05)。結果見表1。

組別造模后給藥7天給藥14天玉泉丸(生五味子)20.91±0.997.12±2.46*4.68±0.77*玉泉丸(醋五味子)22.51±1.36.85±0.88*4.03±0.49*空白對照組4.29±0.70*3.26±0.53*△3.14±0.46*模型對照組20.60±1.0720.38±2.62△20.00±2.11△阿卡波糖組20.64±0.958.14±2.40*3.04±0.34*

注：與模型組比較，*P<0.05；與阿卡波糖組比較，△P<0.05。

2.2 含量測定實驗結果

玉泉丸樣品HPLC色譜見圖1。

a：五味子醇甲;b:葛根素。

含生五味子玉泉丸中，五味子醇甲、葛根素的含量分別為0.011 7%、0.032%；含醋五味子玉泉丸中，五味子醇甲、葛根素的含量分別為0.006 1%、0.024%。測定結果見表2。

表2 玉泉丸中五味子醇甲、葛根素含量測定結果 (%)

3 討論

實驗結果表明，含生五味子、醋制五味子成分玉泉丸均可降低糖尿病大鼠的血糖值，使大鼠血糖趨于正常值，差異無統計學意義(P>0.05)。前期五味子生熟飲片降血糖實驗結果表明，醋制五味子較生五味子降糖作用起效的時間點不同，但實驗終點兩者血糖值結果無顯著性差異。本實驗將五味子不同炮制品納入復方進行研究，實驗結果與生熟飲片結果相近，因五味子在方中非君藥，對復方藥效的實驗結果影響并不明顯。

含生五味子玉泉丸中五味子醇甲、葛根素含量均遠高于含醋制五味子玉泉丸。生五味子、醋制五味子中五味子醇甲成分含量分別為0.011 7%、0.006 1%，故含醋制五味子玉泉丸的醇甲含量低于含生五味子玉泉丸并非由醋蒸引起，同時葛根素含量增加，說明生五味子加入復方有利于煎煮過程中有效成分(如五味子醇甲、葛根素等)的溶出，其原理有待進一步研究。

實驗選擇方中君藥葛根的指標性成分葛根素及五味子的指標性成分五味子醇甲進行研究，其含量的差異可從化學成分角度解釋五味子“生熟異用”的原因。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[S].一部.北京: 中國醫藥科技出版社,2010: 61-62.

[2] 張浩.仁術便覽[M].海口：海南國際新聞出版社，1995:320.

[3] 賈天柱.中藥炮制學[M].上海：上海科學技術出版社，2010: 266.

[4] 陸兔林，毛春芹，呂高虹，等.五味子不同炮制品補益作用的實驗研究[J].中國藥學雜志，2009,44(15)：1147-1149.

[5] 姚慶，陸兔林，胡芳，等.五味子不同炮制品對小鼠CYP450的誘導作用[J].華西藥學雜志，2011，26(3):249-251.

[6] 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實驗方法學[M]．第3版.北京：人民衛生出版社，2002.

(責任編輯：李嵐春)

2015-04-20

國家發改委中醫藥行業科研專項項目：19種生熟異用中藥飲片臨床規范使用研究 (20110700704)

高慧(1974-)，女，遼寧中醫藥大學副教授，研究方向為中藥炮制原理。

R284

A

1673-2197(2015)16-0016-02

10.11954/ytctyy.201516007