哮喘類中藥制劑中非法添加化學藥品檢測方法研究

張 鶴，孟憲生，朱禹澎，畢 帥，李 征

(1.遼陽市食品藥品檢驗所，遼寧 遼陽 111000；2.遼寧中醫藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600)

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哮喘類中藥制劑中非法添加化學藥品檢測方法研究

張 鶴1，孟憲生2*，朱禹澎1，畢 帥1，李 征1

(1.遼陽市食品藥品檢驗所，遼寧 遼陽 111000；2.遼寧中醫藥大學 藥學院，遼寧 大連 116600)

目的：建立快速、準確、高靈敏度測定哮喘類中藥制劑中非法添加醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、醋酸地塞米松、潑尼松、地塞米松的分析方法，并對10批市售藥品進行檢測。方法：采用TLC法對非法摻入的化學藥物進行定性鑒別，并以HPLC法測定含量，采用C18色譜柱(250mm×4.6mm，5μm)，以乙腈-水(40∶60)為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長為240nm。結果：市售藥品中，3批樣品檢測出非法摻有醋酸潑尼松，其重量百分含量分別為0.4237%、0.5061%、0.6035%。結論：該方法操作簡便、選擇性強、靈敏度高、結果準確可靠，可以有效檢測出哮喘類中藥制劑中非法添加的糖皮質激素類化學藥品。

哮喘類中藥制劑；高效液相色譜法；糖皮質激素；醋酸潑尼松

哮喘作為常見病、多發病，已成為嚴重威脅公眾健康的一種主要慢性疾病，哮喘本身不易治療，且易引起許多其他疾病。中藥以其療效獨特、毒副作用小、安全有效的特點在治療慢性病方面雖有其優勢，但短期療效不如西藥理想。近年來，一些不法生產廠家及私人診所為了迎合患者用藥不良反應少、見效快的需求，以純中藥制劑之名、行添加化學藥之實，在中成藥中非法添加化學藥品，患者在毫不知情的情況下長期、大量服用此類制劑，極易引發嚴重的不良反應，損害身體健康[1]。本文參考有關文獻[1-7]，擬建立檢測方法，對哮喘類中藥制劑中非法添加的五種糖皮質激素類化學藥品(醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、醋酸地塞米松、潑尼松、地塞米松)進行定性和定量分析。建立了快速、準確的分析方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

日本島津公司2010高效液相色譜儀，LC-10AT vp輸液泵，SPD 10Avp可變波長紫外檢測器，TA-130柱溫箱，ANASTAR色譜數據處理系統。

1.2 試劑與試藥

對照品：醋酸潑尼松(10012-0105)，醋酸氫化可的松(0013-0106)，潑尼松(100199-199401)，醋酸地塞米松(100122-200804)，地塞米松(100129-200303)，以上對照品均購自中國食品藥品檢定研究院。甲醇為色譜純，水為二次蒸餾水，10批樣品購于藥房及私人診所。

2 方法與結果

2.1 TLC法測定

2.1.1 供試品溶液制備 取樣品約一次性用量，加甲醇適量，超聲溶解20min，濾過，將濾液于水浴上蒸干，加甲醇1mL使溶解，即得。

2.1.2 對照品溶液制備 取醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、潑尼松、醋酸地塞米松、地塞米松對照品適量，加甲醇制成各含1mg/mL的對照品溶液。

2.1.3 薄層色譜法 按薄層色譜法試驗，吸取上述供試品溶液10μL，對照品溶液各5μL,分別點于同一硅膠GF254薄層板上，以乙酸乙酯-氯仿-丙酮(1.5∶4∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外燈254nm下檢視。結果顯示，有3批供試品在醋酸潑尼松處出現陽性斑點。

2.2 HPLC法測定

2.2.1 色譜條件 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以乙腈-水(40∶60)為流動相；檢測波長為240nm。

2.2.2 對照品溶液配制 取上述5種對照品溶液各10mg，加甲醇定容至100mL容量瓶中，制成0.1mg/mL的儲備液。分別精密吸取儲備液，甲醇適量稀釋，制成每1mL中約含1、5、10、25、50μg的系列標準溶液。

2.2.3 供試品溶液配制 取樣品適量，研勻，精密稱取一次口服劑量，加甲醇適量溶解，定容至50mL容量瓶中，超聲提取20min，放冷，加甲醇補足減失的重量，過濾，精密吸取2mL，加流動相定容至10mL容量瓶中，過0.45μm微孔濾膜濾過，備用。

2.2.4 空白溶液配制 取TLC法鑒別項下未檢出添加化學藥品的供試品，按上述供試品制備方法配制，制成空白溶液。

2.3 方法學考察

2.3.1 系統適用性試驗 取對照品溶液、供試品溶液和空白溶液各10μL，注入高效液相色譜儀，記錄色譜圖。由色譜圖可知，各目標對照品分離度良好，空白溶液中的中藥成分不干擾測定。見圖1。

圖1 供試品(A)、對照品(B)、空白(C)色譜

2.3.2 檢測限 以信噪比為3∶1時的對照品進樣量作為檢測限，醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、潑尼松、醋酸地塞米松、地塞米松的檢測限分別為1.2、1.1、1.4、1.3、1.3ng。

2.3.3 線性關系試驗 取各組分濃度約為 1、5、10、25、50μg/mL的系列標準溶液10μL注入高效液相色譜儀，記錄色譜峰峰面積。以對照品濃度(μg/mL)為橫坐標(X)、峰面積為縱坐標(Y)，繪制標準曲線。結果表明，各組分濃度在1～50μg/mL范圍內線性關系良好。結果見表1。

表1 標準曲線及線性關系考察結果

2.3.4 穩定性試驗 精密吸取混合對照品溶液分別于0、2、4、6、12h進樣，記錄色譜峰面積，計算RSD。結果表明，對照品溶液在12h內穩定。5種目標對照的RSD分別為0.61%、0.59%、0.68%、0.49%、0.72%。

2.3.5 重復性試驗 取供試品(含醋酸潑尼松)精密稱定6份，按供試品制備方法制備供試品溶液，吸取10μL注入高效液相色譜儀，將峰面積帶入標準曲線計算含量。結果RSD為1.3%，表明該方法重復性良好。

2.3.6 回收率試驗 取不含添加化學物質的中藥制劑1批，稱取9份，每份取1次口服劑量，分別加入5種對照品0.5、1.0、2.5mg，每個濃度平行配制3份，按供試品制備方法項下制備供試品溶液，吸取10μL注入液相色譜儀進行測定，計算回收率。5種目標對照品的回收率分別為98.5%、99.2%、98.9%、99.1%、98.8%，RSD均<1.5% 。

2.3.7 含量測定 對抽取的10批次治療哮喘類中藥制劑進行檢測， 結果在2批平喘膠囊及某私人診所配制的止咳平喘制劑供試品溶液的液相色譜中呈現與醋酸潑尼松對照品色譜圖保留時間相一致的色譜峰。對檢測到的成分進行定量，結果顯示：2批平喘膠囊分別含醋酸潑尼松0.4237%、0.5061%；某私人診所配制的止咳平喘制劑含醋酸潑尼松0.6035%。

3 討論

哮喘類中藥制劑通常含有多味中藥，成分較多，如僅采用TLC法專屬性不強，容易出現假陽性結果，所以本文在采用TLC法粗篩定性鑒別后，再采用HPLC法進行定量分析，可快速、準確地對哮喘類中藥制劑中非法添加的醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、醋酸地塞米松、潑尼松、地塞米松同時進行檢測，專屬性強，5種化合物可達到基線分離。

在波長200～400nm范圍進行掃描，醋酸潑尼松、醋酸氫化可的松、醋酸地塞米松、潑尼松、地塞米松的紫外最大吸收波長分別為240、243、239.5、239.5、239.5nm，為使各化合物均有較大的紫外吸收，有較好的檢測靈敏度，選擇240nm作為檢測波長。

本文建立的方法操作簡便、快速，結果準確、可靠，能夠用于檢測治療哮喘類中藥制劑非法添加的糖皮質激素，可作為哮喘類中藥制劑中質量和安全用藥的控制 。

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典臨床用藥須知·化學藥和生物制品卷(2005年版)[S].北京:人民衛生出版社,2005：243-244,437-445.

[2] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典[M].二部.北京：化學工業出版社,2005.

[3] 董永成，杜士明,陳永順.中成藥及保健品非法添加化學成分的類型、危害及對策[J].時珍國醫國藥，2006，17(8)：1601-1602 .

[4] 李小敏，畢雪艷，李莉.平喘鎮咳中成藥中非法添加兩種化學藥品檢驗方法的研究[J].中國藥事，2007，21(6)：447．

[5] 劉金艷，趙春杰，王超眾.抗風濕類中成藥中添加糖皮質激素的檢測[J].中國藥品標準，2008,9(6)：424-426 .

[6] 胡毅堅，吳春芬.高效液相色譜法測定復方地塞米松霜中2組分的含量[J]. 中國藥房，2006，17(20)：1546 .

[7] 吳春敏,陳海濱.中成藥中非法添加化學物質的現狀與對策[J].海峽藥學，2003(6):107.

[8] 劉吉金.降壓保健品及中成藥中非法添加化學成分的快速檢測方法研究[J].中成藥,2008,30(1):144-146.

(責任編輯：魏 曉)

Study on the Method for Detecting the Chemical Drugs Added Illegally to Asthma in Chinese Medicine Preparation

Zhang He1，Meng Xiansheng2*，Zhu Yupeng1，Bi Shuai1，Li Zheng1

(1.LiaoYang Institute for Food and Drug Control,Liaoyang 111000, China;2.College of pharmacy，Liaoning University of Traditional Chinese Medicine，Dalian 116600，China)

Objective:To establish a quick，accurate，sensitive method for analysis of acetamidophenol，prednisone hydrocortisone，dexamethasone，prednisonand dexamethasone mixed in Asthma traditional Chi-nese medicine．Methods:Qualitative identification of the chemical drugs illegally adulterated with TLC method，And with the HPLC method for the determination of Using C18column(250mm×4.6mm，5μm)， Using ace-tonitrile and water (40∶60) as the mobile phase, A flow rate of 1mL/min,The detection wavele-ngth of 240nm．Results:Prednisone acetate was found in 3 form ulations,and the percentages of contents were 0.4237%、0.5061%、0.6035%．Conclusion:The method is simple，selectire，sensitive，reliable and accurate,and it can be used to detect adrenal cortical horm one illegaly added into the traditional Chinesemedicine．

Asthma Preparations of Traditional Chinese Medicine；High Performance Liquid Chromatography；Sugar Cortical hormone；Prednisone Acetate

2015-02-11

張鶴(1982-)，女，遼陽市食品藥品檢驗所主管中藥師，研究方向為中藥檢驗及質量標準。

孟憲生(1964-)，男，遼寧中醫藥大學教授，博士生導師，研究方向為中藥組分配伍、代謝組學及藥品質量分析。Email：mxsvvv@126.com

R284

A

1673-2197(2015)13-0013-03

10.11954/ytctyy.201513006