三七總皂甙磷脂復合物制備研究

陳嬌婷, 溫慧玲, 黃 浩,羅國安，2(.贛南醫學院 藥學院，江西 贛州34000；2.清華大學分析中心，北京 00084)

?

三七總皂甙磷脂復合物制備研究

陳嬌婷1, 溫慧玲1, 黃 浩1,羅國安1，2
(1.贛南醫學院 藥學院，江西 贛州341000；2.清華大學分析中心，北京 100084)

目的：制備三七總皂甙磷脂復合物，并研究其理化性質。方法：采用溶劑揮發法制備三七總皂甙磷脂復合物，利用紫外光譜法、差示掃描量熱分析法對所得的磷脂復合物進行鑒定；測定磷脂復合物中三七總皂甙的含量；測定不同pH體系中三七總皂甙及其磷脂復合物的表觀油水分配系數。結果與結論：復合物在不同pH的正辛醇/水系統中，表觀油水分配系數與三七總皂甙有較大差異，油水分配性能顯著改善。

三七總皂甙：磷脂復合物；含量測定

三七為五加科人參屬植物[1]，始載于《本草綱目》，為常用傳統中藥之一，主產于云南和廣西，是傳統名貴中藥材。

三七性平，味甘，微苦，含有多種類型的化學成分，藥理作用廣泛，具有化瘀止血、活血定痛之功。三七對中樞神經有鎮痛作用，對缺血性腦損傷有保護作用，對心血管系統具有改善心肌缺血狀態、止血等作用[2-5]。已有研究表明[6]：三七的主要成分為三七總皂甙，Rb1和Rg1是人參屬植物所共有的成分，且含量最高，而Rl是三七特征皂甙成分，但其在三七生藥中含量很低，因此本文主要以三七皂甙Rg1和Rb1作為研究對象。三七皂甙Rg1和Rb1單體Caco-2細胞轉運透過系數(Papp)極低(1×10-7～1×10-8cm/s)，黏膜透過性差，三七皂苷Rg1和Rb1的大鼠絕對生物利用度分別為0.7l%和3.29%，口服吸收差[7]。因此，其屬于口服難吸收成分，而且根據藥物溶解性及胃腸道滲透性可將其歸為BcsⅢ或Ⅳ類。

藥物磷脂復合物是將藥物與磷脂在適宜條件下進行復合得到的一類物質。天然活性成分磷脂復合物的理化性質和生物藥劑學性質較原化合物均有不同程度的改變,通過與磷脂復合形成載體系統或前體藥物,可改善藥物經胃腸道或經皮吸收,故可獲得較高的血藥濃度,且藥物在體內消除變慢,生物利用度顯著提高[8]。為了提高三七總皂甙的生物利用度,本實驗制備了三七總皂甙磷脂復合物,并對其性質進行了研究,為三七總皂甙的綜合開發利用建立一定的實驗基礎。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

1200型高效液相色譜儀(Agilent公司)；UV-2550型紫外分光光度計(日本島津公司)；NETZSCHSTA499綜合熱分析儀(德國)。

1.2 試藥

三七總皂甙(昆明雙星科技開發有限公司提供)；乙腈(色譜純，國藥集團化學試劑有限公司)；超純水(實驗室自制)；所用其他試劑均為AR級。

2 方法與結果

2.1 三七總皂甙磷脂復合物制備

利用三七總皂甙脂溶性差，不溶于四氫呋喃,而磷脂和三七總皂甙磷脂復合物均易溶于四氫呋喃的特性, 按摩爾比1∶2的比例將三七總皂甙和磷脂后混勻，磁力攪拌至澄明，減壓蒸發除去反應溶劑,加入適量四氫呋喃充分溶解其中的剩余物質,然后進行抽濾, 收集沉淀物。再用少量四氫呋喃洗滌沉淀物,再次減壓蒸干，收集沉淀物, 減壓干燥24h后稱重,即得未與磷脂復合的三七總皂甙。

2.2 三七總皂甙磷脂復合物復合率測定

三七總皂甙初始投藥量與沉淀量的差值即為與磷脂復合的三七總皂甙的量,通過下式可計算出三七總皂甙與磷脂的結合百分率(M):

M=(A-B) /A×100%

其中A為三七總皂甙的初始投藥量；B為沉淀量。

計算得三七總皂甙磷脂復合物的復合率為98.3%，表明工藝可行。

2.3 三七總皂甙磷脂復合物光譜學分析

取一定量的三七總皂甙、磷脂、三七總皂甙與磷脂的物理混合物及三七總皂甙磷脂復合物,分別對其進行紫外、差示掃描量熱分析。

2.3.1 UV掃描 以體積分數為75%乙醇做溶劑進行紫外檢測,結果表明, 三七總皂甙、磷脂、三七總皂甙磷脂混合物和三七總皂甙磷脂復合物的紫外圖譜相同,最大吸收峰均在197nm處,只是復合物的吸光度明顯比前兩種小,表明磷脂復合物中三七總皂甙發色基團的結構未發生變化。由于磷脂的極性鍵與三七總皂甙發生了較強的相互作用,導致其吸光度減小了。

2.3.2 差示掃描量熱(DSC)分析 分別稱取三七總皂苷、磷脂、三七總皂苷與磷脂物理混合物及三七總皂甙磷脂復合物適量，置淺鋁皿中，程序升溫，升溫速度10℃/min，20～500℃進行掃描，N2流速0.2mL/min，差示掃描量熱結果見圖1，可見三七總皂甙與磷脂物理混合物相變溫度圖為兩種物質的疊加。形成復合物后,相變溫度降低,出現此現象可能是三七總皂甙的極性基團與磷脂的極性基團部分發生分子間相互作用，磷脂的兩條長脂肪酸鏈對三七總皂甙進行包裹，使其高度分散于磷脂中，進而改變了藥物相變溫度，使其特征峰明顯改變，這也證明形成了復合物，三七總皂甙磷脂復合物不同于其物理混合物。

2.4 三七總皂甙磷脂復合物中三七總皂甙含量測定

色譜條件：色譜柱：Kromasil C18(4.6mm×250mm，5μm)；流速：1.00mL/min；檢測波長：197nm；柱溫：室溫；進樣量：20μL。采用二元梯度洗脫：A相為乙腈，B相為水，梯度洗脫:0min→5min→20min→45min→67min→82min；流動相A∶B比例為10∶90，20∶80，35∶65，43∶57，58∶42，75∶25。

圖1 三七總皂苷(A)、磷脂(B)、三七總皂苷與磷脂物理混合物(C)、三七總皂甙磷脂復合物(D)的DSC掃描

2.5 三七總皂甙磷脂復合物油水分配系數的測定

藥物的脂溶性與其在胃腸道的滲透性密切相關，因此通過測定藥物及其磷脂復合物在不同體系中的油水分配系數，可以描述藥物脂溶性大小。

采用搖瓶法測定，分別量取pH為2、3、4、5、6的水20mL，置磨口三角瓶中，各2份，分別加入適量的三七總皂甙及其磷脂復合物，25℃振搖12h至溶解平衡，移至離心管中，3 000r·min-1離心20min。取上層液10mL，置磨口三角瓶中，分別加入正辛醇10mL，25℃振搖至溶解平衡(預試驗表明平衡時間為24h)，3 000r·min-1離心20min。分別量取水相和正辛醇相2mL置10mL量瓶中，甲醇定容后測定，三七總皂甙及其磷脂復合物正辛醇/水分配系數測定結果見表1。

表1 三七總皂甙及其磷脂復合物正辛醇/水分配系數測定

從表1可以看出，復合物對于三七總皂甙在正辛醇中的溶解度提高了50多倍，在水中的溶解度提高了4倍多，P值提高10倍多。結果表明，磷脂能有效地提高三七總皂甙的正辛醇/水表觀分配系數，提高了三七總皂甙的溶解性能。

3 討論

三七總皂甙磷脂復合物在正辛醇/水系統中進行表觀油水分配系數的測定，結果顯示藥物形成磷脂復合物后使藥物的脂溶性得到了顯著性提高。這可能是因為：三七總皂甙與磷脂的極性基團發生了較強的相互作用，而磷脂的兩個長鏈脂肪酸不參與復合反應，可以自由移動，包裹磷脂的極性部分形成一個親脂性的表面，使復合物的脂溶性較原料藥顯著提高。

本文制備的三七總皂甙磷脂復合物很好地解決了該藥物脂溶性差的問題，同時該復合物還可以作為制劑中間體制備微丸等固體、液體制劑，為三七總皂甙制劑的開發提供了新的思路。

[1] G FY,ZGZ.The survey of the study of chemical components in radix notoginseng.[J] chin pharm,1992,27(3):138．

[2] YOON SR, NAH JJ, SHIN YH, KIM SK, et al.Ginsenosides induce differential antinociception and inhibit substrance P inducednociceptive response in mice[J].Life Sciences,1998，62(21)：319-325.

[3] 馬麗焱，王春蘭，張琪，等. 三七皂甙對腦組織血液供應和能量代謝的影響[J].中國藥理學通報，1998，14(1)：27-34.

[4] 蘇善國，王曉晴，三七總皂甙和阿托品對實驗性心肌缺血作用的觀察[J]，昆明醫學院學報，1994，15(1)：56-63.

[5] NG TB,LIU F,WANG HX．The antioxidant effects of apueous and organic extracts of Panax quinquefolium,Panax notoginseng,Codonopais pilosula，Pseudotellaria heterophyland and Glehnis littondis[J].Journal of Ethnopharmacology,2004,93(2-3):285-288.

[6] 鄭光植，楊崇仁.三七生物學及其應用[M].北京：科學出版社，1994：78．

[7] 潘素靜，龍曉英，林婉婷,等.復方丹參制劑口服吸收研究新進展[J].中成藥，2013，35(7)：1526-1529.

[8] 翟光喜，婁紅祥，鄒立家,等.藥物磷脂復合物的研究進展[J].中國藥學雜志，2001,36(12):800-803.

(責任編輯：魏 曉)

Preparation of Total Saponins of Panax notogieng Phospholipid Complex

Chen Jiaoting1,Wen Huiling1,Huang Hao1,Luo Guoan1，2
(1.Gannan Medical University, Ganzhou 341000，China;2.Analysis Center,Tsinghua University, Beijing 100084，China)

Objective:To prepare a total saponins of panax notogieng phospholipid complex. Methods:Total saponins of panax notogieng phospholipid complex was prepared by solvent evaporation. It was analyzed by ultraviolet spectroscopy (UVS)，differential scanning calorimetry (DSC)．The content of total saponins of panax notogieng in the phospholipid complex was determined and the apparent oil-waterpartition coefficients of phospholipid complex were also examined in different systems．Results and Conclusions:The apparent partition coefficients in different systems were significantly different among the complex and bulk drug．

Total Saponins of Panax Notogieng; Phospholipid Complex; Content Determination

2015-03-17

陳嬌婷(1980-)，女，贛南醫學院講師，研究方向為藥物新劑型與新技術。

R284

A

1673-2197(2015)15-0023-03

10.11954/ytctyy.201515009