HLPC法測定青海不同產區冬蟲夏草腺苷含量

尚 林，李建菊，尚 軍(.青海省紅十字醫院，青海 西寧 80008；.青海省黃河水電新能源分公司，青海 西寧 80008；3.青海師范大學 青藏高原環境與資源教育部重點實驗室，青海 西寧 80008)

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HLPC法測定青海不同產區冬蟲夏草腺苷含量

尚 林1，李建菊2，尚 軍3*
(1.青海省紅十字醫院，青海 西寧 810008；2.青海省黃河水電新能源分公司，青海 西寧 810008；3.青海師范大學 青藏高原環境與資源教育部重點實驗室，青海 西寧 810008)

目的：評價青海省不同產地冬蟲夏草藥材的內在質量。方法：以高效液相色譜法測定來源于10個產地的冬蟲夏草腺苷的含量。結果：10個產地冬蟲夏草的腺苷含量范圍在0.011%～0.065%，其中玉樹冬蟲夏草腺苷含量最高為0.065%，其次是果洛為0.041%，化隆、民和及互助三地產冬蟲夏草腺苷含量稍高于2010版《中國藥典》標準。結論：不同產地冬蟲夏草的腺苷含量不同，以玉樹、果洛兩地冬蟲夏草品質較優。

冬蟲夏草；腺苷；HLPC

冬蟲夏草(Cordycepssinensis)又名中華蟲草，簡稱蟲草，是麥角菌科真菌冬蟲夏草寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上的子座及幼蟲尸體的復合體，是一種傳統的名貴滋補中藥材，有調節免疫系統功能、抗腫瘤、抗疲勞等多種功效[1-3]。腺苷是一種遍布人體細胞的內源性核苷，可直接進入心肌經磷酸化為腺苷酸，參與心肌能量代謝，同時還參與擴張冠脈血管，增加血流量。腺苷對心血管系統和機體的許多其他系統及組織均有生理作用。腺苷是冬蟲夏草主要有效成分之一，也是蟲草中功效成分的重要指標，2010年版《中國藥典》將其作為指標成分應用于冬蟲夏草的質量控制，規定腺苷含量不得少于0.010%。

青海省冬蟲夏草數量和質量居全國之冠，其中玉樹、果洛占青海省總產量的85%以上，以玉樹產量為最高；此外，海南藏族自治州所屬的興海縣、同德縣、貴德縣，黃南藏族自治州所屬的同仁縣、河南縣，海東地區的化隆縣、互助縣、民和縣腦山地區也有分布，但數量較少[4,5]。近年來由于冬蟲夏草價格漲勢迅猛，人們為追求經濟利益，每年幾乎在全省冬蟲夏草分布區都有采挖，為了闡明青海省不同產地冬蟲夏草的藥材道地性及其品質特點，本文采用HPLC 法分析了10個產地的冬蟲夏草中主要有效成分腺苷的含量。

1 儀器與藥品

1.1 儀器

Waters600 高效液相色譜儀系列(Waters公司)；Pl202-L梅特勒-托利多分析天平。

1.2 藥品

腺苷標準品(純度≥99%，美國進口)，甲醇為色譜純，其它試劑均為分析純；實驗水均為三級去離子水。冬蟲夏草在2013年5月收購于產地農民，新鮮冬蟲夏草去泥沙后于-86℃保存。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

以SunfireTM C18柱(250mm×4.6mm，5μm) 為固定相，磷酸鹽緩沖液(pH6.5) (取0.01moL·L-1磷酸二氫鈉68.5mL與0.01moL·L-1磷酸氫二鈉31.5 mL混合)-甲醇(85∶15)為流動相，流速1.0mL·min-1，檢測波長為260nm。理論塔板數按對照品峰計算，應不低于2 000[1]。在以上條件下，樣品分離狀況良好，見圖1、圖 2。

2.2 樣品前處理

取1～10號冬蟲夏草樣品，分別粉碎，過三號篩，精密稱取1.00g，置于25mL具塞比色管中，加入90%甲醇約20mL，密塞超聲30min，放至室溫后90%甲醇定容至25mL，經0.45μm濾膜過濾，濾液吸入進樣小瓶作為待測樣液。

2.3 線性關系考察

準確稱取腺苷樣品10mg于10mL比色管中，用水—甲醇(85∶15)溶解并定容于10mL，即為1mg/mL的儲備液。精密吸取標準儲備液，將其分別稀釋為0.0、10.0、20.0、30.0、50.0μg/mL不同濃度的溶液，每個濃度進樣2次，進樣體積為10μL，取平均峰面積得到不同的響應值，如圖3所示；以標準溶液濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，繪制標準曲線，得線性回歸方程為y=32 561x+6 929.8，R2=0.999 8，腺苷在10～50μg范圍內呈良好線性關系。

圖1 冬蟲夏草腺苷標準品高效液相色譜

2.4 精密度試驗

取對照品溶液，重復進樣5次，每次10μL，對照品峰面積RSD 為0.11%，表明儀器精密度良好。

2.5 穩定性試驗

取對照品溶液在0、2、4、6、8h分別進樣10μL，記錄峰面積，結果5次進樣腺苷峰面積RSD為1.75%，表明對照品溶液在8h內較穩定。

圖2 冬蟲夏草1號樣品腺苷高效液相色譜

圖3 腺苷標準曲線

2.6 重復性試驗

取冬蟲夏草1號樣品，精密稱定1.21g，按“2.2”樣品制備方法，平行操作制備6份，以上述色譜條件測定，根據外標法以峰面積進行定量，RSD為0.46%。

2.7 加樣回收率試驗

精密稱定已知腺苷含量的樣品0.5g，添加腺苷對照品適量，按含量測定項下方法測定，5次測定的結果為(98.12±2.05)%。

2.8 含量測定

精密吸取“2.2”制備的1～10號冬蟲夏草樣本待測液10μL，按上述色譜條件測定，外標法計算含量，結果見表1。

表1 青海省不同產地冬蟲夏草中腺苷含量

3 討論

由表1 可見，產區不同，冬蟲夏草的腺苷含量不同。玉樹產冬蟲夏草中腺苷含量要高于青海其他地區產冬蟲夏草中腺苷含量；以腺苷含量為指標評價冬蟲夏草藥材的內在質量，玉樹和果洛產冬蟲夏草質量要優于青海其他產區冬蟲夏草。這與傳統認為玉樹和果洛冬蟲夏草品質優于青海其他地區的觀點一致[6]。上述10個產地的冬蟲夏草腺苷含量均大于0.010%，符合 2010 年《中國藥典》冬蟲夏草項下要求。但對冬蟲夏草還需要考慮與冬蟲夏草品質相關的其他成分，如蟲草多糖、氨基酸、核苷類物質、甾醇類物質、脂肪酸、維生素以及礦質元素等的含量[7,8]。

[1] 國家藥典委員會，中華人民共和國藥典[M].一部.北京:中國醫藥科技出版社,2010:27.

[2] 漆偉,雷偉,嚴亞波,等.冬蟲夏草藥理學作用的研究進展[J].環球中醫藥,2014,7(3):227-230.

[3] 許國彩.青海冬蟲夏草及有效成分對免疫調節作用的研究進展[J].高原醫學雜志,2012,22(4):62-64.

[4] 于斌,梁留科,李湘豫,等.青海省冬蟲夏草資源特征分析[J].植物分類與資源學報,2012,34(5):478-482.

[5] 李芬,吳志豐,徐翠,等.三江源區冬蟲夏草資源適宜性空間分布[J].生態學報,2014,35(5):1318-1325.

[6] 尹定華,陳仕江,馬開森.冬蟲夏草資源保護、再生及持續利用的思考[J].中國中藥雜志,2011,36(6):814-816.

[7] 張志紅,楊璐敏,邰麗梅,等.冬蟲夏草生理活性成分的研究進展[J].中國食用菌,2014,33 (4):1-4.

[8] 肖遠燦,胡風祖,董琦,等.青海玉樹不同產地冬蟲夏草中 15 種核苷類成分比較研究[J].中國藥學雜志,2014,49(22):1983-1988.

(責任編輯：魏 曉)

Contents Determination of Adenosine in Different Origins Cordyceps Sinensis by HPLC

Shang Lin1，Li Jianju2，Shang Jun3*
(1.Qinghai Red Cross hospital，Xining 810008, China 2.Qinghai Huanghe Hydropower Development Co. Ltd. New Energy Branch，Xining 810008,China；3.Key Laboratory of Education Ministry on Environment and Resources in Qinghai and Tibet Plateau,Qinghai Normal University，Xining 810008,China)

Objective:In order to evaluate ten different origin cordycepssinensis’ immanent quality in Qinghai.Methods:we took HPLC as the detection.Results:the ten different origin cordyceps adenosine’s content were in the range of 0.011 ～ 0.065%, and Yu Shu cordyceps adenosine’s content were up to 0.065%, and the second was Guo-Luo which cordyceps adenosine’s content were 0.041%, while Hua-Long, Min-He and Hu-Zhu，these three place’scordyceps adenosine content are slightly higher than the "Chinese pharmacopoeia(2010)" regulation. This article implied that cordyceps adenosine’s content is different in different producing areas,Yu-Shu and Guo-Luo’scordycepssinensis quality better than the other place in Qing-Hai.

Cordyceps Sinensis；Adenosine；HLPC

2015-03-12

青海省藥用動植物資源研究重點實驗室項目(2013-Z-Y10)

尚林(1963-)，男，青海省紅十字醫院主管藥師，研究方向為天然藥物研究。

尚軍(1975-)，男，青海師范大學副教授，研究方向為天然藥物化學。E-mail：shjun2004@126.com

R284

A

1673-2197(2015)15-0029-02

10.11954/ytctyy.201515011