降脂脈安顆粒質量標準研究

金同慶，朱華榮(.昆山市中醫醫院，江蘇 昆山 25000；2.揚子江藥業集團有限公司，江蘇 南京 225000)

?

降脂脈安顆粒質量標準研究

金同慶1，朱華榮2*
(1.昆山市中醫醫院，江蘇 昆山 215000；2.揚子江藥業集團有限公司，江蘇 南京 225000)

目的：建立和完善降脂脈安顆粒的質量標準。方法：以紫外分光光度法測定降脂脈安顆粒中決明子蒽醌類成分和黃芪總皂苷的含量。結果：決明子蒽醌類成分在0.0025～0.0200mg/mL濃度范圍內線性良好，r=0.9999，平均加樣回收率97.59%，RSD=1.15%；黃芪總皂苷成分在0.016～0.036mg/mL濃度范圍內線性良好，r=0.9996，平均加樣回收率97.50%，RSD=1.29%。結論：此方法簡便、準確、靈敏度高，重現性好，可作為該制劑的質量控制方法。

降脂脈安顆粒；紫外分光光度；總蒽醌；總皂苷；質量控制

降脂脈安顆粒是昆山市中醫醫院的自制制劑，處方是由生黃芪、丹參、決明子、生山楂、麥芽按照一定比例組成，并經過適當的方法制成的顆粒制劑。該制劑具有補氣活血，消積祛瘀，治療高脂血癥、脂肪肝等癥。本文對紫外分光光度法測定制劑中決明子總蒽醌和黃芪總皂苷的方法進行了方法學考察，包括線性范圍、精密度、穩定性、重復性、加樣回收率5個方面。獲得了滿意的結果，進一步提高了醫院自制制劑的質量控制。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

FA2004N電子天平(上海精密科學儀器有限公司)，ZF20C暗箱式紫外線分析儀(上海市顧村電光儀器廠)，SHB-ⅢS循環水式多用真空泵(鄭州長城科工貿有限公

司)，DZF-6050真空干燥箱(上海精宏實驗設備有限公司)，HHS型電熱恒溫水浴鍋(上海博迅實業有限公司醫療設備廠)，RE-52A型旋轉蒸發儀(上海申勝生物技術有限公司)，HS3120超聲儀。

1.2 試藥

1，8-二羥基蒽醌對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號0829-9702)；黃芪甲苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號110781-200613)；降脂脈安顆粒(昆山中醫醫院自制制劑，批號為110708、111103、120309)；使用試劑均為分析純。

2 定量分析

2.1 決明子

中醫認為，決明子具有清肝明目、潤腸通便的功效[1]。藥理研究表明，決明子能降血脂、降血壓、瀉下、保肝、護眼[2-7]。決明子含有多種成分，如蒽醌類、萘駢-吡咯酮類、脂肪酸類、氨基酸、無機元素等，主要成分為蒽醌類，含量約占1%。文獻報道了蒽醌類成分具有抗菌、調節免疫、降血脂、瀉下、抗氧化等作用[8-11]。目前主要采用醇提取蒽醌苷，酸水解苷成苷元，再用氯仿萃取，醋酸鎂顯色，紫外分光光度法測定制劑中決明子總蒽醌[12-13]。

2.1.1 對照品溶液制備 取1，8-二羥基蒽醌對照品2.50mg，精密稱定，置于50mL量瓶中，加乙醇至刻度，搖勻即得濃度為0.05mg/mL的對照品溶液。

2.1.2 供試品溶液制備 取降脂脈安顆粒(批號120309)1袋，約15g，精密稱重，置圓底燒瓶中，加入200mL乙醇加熱回流2h，濾過，再加入100mL乙醇回流1h，濾過，合并濾液，旋轉蒸發至100mL以下，用25%乙醇定容至100mL備用。精密量取20mL，蒸干，加10%(V/V)鹽酸溶液30mL，置沸水浴中加熱水解1h，立即冷卻。用氯仿強力振搖萃取4次，每次20mL，合并氯仿液并回收至干。殘渣加入0.5%醋酸鎂甲醇液溶解，并稀釋至100mL，搖勻。

2.1.3 陰性對照品溶液制備 按處方量制成缺決明子的陰性模擬制劑，按“2.1.1”項下制備成陰性對照品溶液。

2.1.4 最大吸收波長 精密吸取1，8-二羥基蒽醌對照品溶液2mL，置于10mL量瓶中，水浴蒸發氯仿至干，殘渣加入0.5%醋酸鎂甲醇液溶解，并稀釋至刻度，搖勻。于分光光度計200 ～ 800nm處掃描，由掃描結果確定最大吸收波長為507nm。

2.1.5 陰性干擾實驗 分別精密吸取1，8-二羥基蒽醌對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各2mL，依照“2.1.4”項下操作。結果1，8-二羥基蒽醌對照品溶液在507nm波長處有最大吸收，供試品溶液在相同的波長處有較大吸收，陰性對照品溶液在相同波長處無干擾峰。

2.1.6 標準曲線繪制 精密吸取1，8-二羥基蒽醌對照品溶液0.5、1.0、2.0、3.0、4.0mL，分別置于10mL量瓶中，水浴蒸發氯仿至干，殘渣加入0.5%醋酸鎂甲醇液溶解，并稀釋至刻度，搖勻。以0.5%醋酸鎂甲醇液為空白，于507nm處，按照紫外可見分光光度法(中國藥典2010版一部 附錄ⅤA)測定吸收度Y為縱坐標，濃度X(mg·mL-1)為橫坐標，繪制標準曲線，結果回歸方程為：Y=49.924X-0.004，r=0.9999，結果見表1、圖1。

表1 標準曲線考察結果

圖1 標準曲線

2.1.7 精密度考察 精密量取對照品溶液，按照“2.1.6”項下方法，自“水浴蒸發氯仿至干”起，依法連續測定6次，結果見表2，RSD=1.73%，表明此方法精密度良好。

表2 精密度試驗

2.1.8 穩定性考察 取供試品溶液，在分光光度計上，于507nm處，以0.5%醋酸鎂甲醇液為空白，每隔10min進行測定，結果見表3，RSD=1.22%，表明70min內溶液的穩定性良好。

表3 穩定性試驗

2.1.9 重復性試驗 按“2.1.2”項下制得同一批次(120309)供試品5份，以0.5%醋酸鎂甲醇液為空白，在分光光度計上于507nm處，測定吸收度。結果總蒽醌平均含量為0.0183%，RSD=1.43%，重復性良好，見表4。

表4 重復性試驗

2.1.10 回收率考察 精密稱取同一批次(120309)降脂脈安顆粒6份，分別按“2.1.2”項下制得供試品溶液，每份分別量取20mL，加入1，8-二羥基蒽醌對照品溶液10mL，以0.5%醋酸鎂甲醇液為空白，在分光光度計上，于507nm處，測定吸收度。結果平均回收率為97.59%，RSD=1.15%，見表5。

2.1.11 樣品含量測定 按“2.1.2”項下制得3個批次(110708、111103、120309)供試品11份，以0.5%醋酸鎂甲醇液為空白，在分光光度計上于507nm處測定吸收度。計算樣品中總蒽醌的含量，結果見表6。

表5 回收率試驗

表6 三批樣品總蒽醌含量測定

根據3批樣品測定結果，暫定樣品中每袋含總蒽醌以1，8-二羥基蒽醌計算，每袋不得少于0.002g。

2.2 黃芪

中醫認為，黃芪具有補氣升陽、固表止汗、利水消腫、生津養血、排膿、生機等功效[14]，藥理研究表明，黃芪具有調節免疫、抗炎、鎮痛、利尿、耐缺氧及抗疲勞等功效[15-16]。其主要成分為三萜皂苷、多糖及黃酮類化合物。文獻報道黃芪皂苷具有免疫調節、抗腫瘤、降糖和改善心血管疾病等生物活性[17-20]。目前黃芪皂苷類化合物多先采用醇類溶劑(如乙醇或甲醇等)提取，然后用紫外分光光度法測定黃芪總皂苷含量[21-22]。

2.2.1 樣品制備 取降脂脈安顆粒一袋(批號120309)，約15g，精密稱重，置圓底燒瓶中，加入200mL乙醇加熱回流2h，濾過，再加入100mL乙醇回流1h，濾過，合并濾液，旋轉蒸發至100mL以下，用乙醇定容至100mL備用。

2.2.2 陰性對照品溶液制備 按處方量制成缺黃芪的陰性模擬制劑，同上法制備成陰性對照品溶液。

2.2.3 對照品制備 用電子天平準確稱取黃芪甲苷對照品6.0mg，用甲醇溶于50mL容量瓶中搖均即得濃度為0.12mg/mL對照品溶液。

2.2.4 測定波長 用移液管準確吸取1.0mL濃度為0.122mg/mL的黃芪甲苷溶液，加入干燥試管中，于恒溫水浴鍋中揮干甲醇溶液，加入新鮮配制的5%香草醛-冰酷酸溶液0.2mL，再加入0.8mL高氯酸溶液，搖勻，于60℃水浴加熱15min，取出，然后在冰水中冷卻10min，最后準確移取5mL冰醋酸至顯色后的溶液中，空白為隨行試劑，在400～700nm波長范圍內進行掃描．結果黃芪甲苷對照品在579nm處有最大吸收，故測定波長為579nm。

2.2.5 陰性干擾實驗 分別精密吸取黃芪甲苷對照品溶液、供試品溶液及陰性對照品溶液各1mL，依照“2.2.4”項下操作。結果黃芪甲苷對照品溶液在579 nm波長處有最大吸收，供試品溶液在相同的波長處有較大吸收，陰性對照品溶液在相同波長處無干擾峰。

2.2.6 線性關系考察 精確吸取對照品溶液0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8mL分別加入6個干燥具塞試管中，在恒溫水浴鍋中揮干甲醇溶液，分別加入新鮮配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL，再加入0.8mL高氯酸溶液，搖勻，于60℃恒溫水浴加熱15min，取出，然后在冰水中冷卻10min，最后準確移取5mL冰醋酸至顯色后的溶液中，空白為隨行試劑。在579nm下，按照紫外可見分光光度法(中國藥典2010版一部 附錄ⅤA)分別測出它們的吸光度，并以吸光度Y為縱坐標，黃芪甲苷的含量X為橫坐標得回歸方程為：Y=3.325r-0.0085，R=0.9996，見表7、圖2。

表7 標準曲線考察結果

圖2 黃芪甲苷標準曲線

2.2.7 精密度試驗 精確吸取對照品溶液0.1mL，按照“2.2.6”項下，自“分別加入新鮮配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL”起操作，依法測定吸光度，重復測定5次，其RSD為0.19%，結果表明精密度良好，見表8。

表8 精密度試驗

2.2.8 穩定性試驗 精確吸取樣品溶液0.1mL，轉入具

塞試管中揮干乙醇，按照“2.2.6”項下，自“分別加入新鮮配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL”起操作，顯色后放置0、0.5、1.0、1.5、2.0h后測定吸光度，其RSD為0.26%，結果表明樣品溶液在2.0h內穩定，結果見表9。

表9 穩定性試驗

2.2.9 重復性試驗 按“2.2.1”項下制得同一批次(120309)樣品溶液5份，每份各量取0.1mL，轉入干燥具塞試管中揮干乙醇，按照“2.2.6”項下，自“分別加入新鮮配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL”起操作，顯色后測定吸光度，其RSD為0.21%，結果表明其重復性良好，結果見表10。

表10 重復性試驗

2.2.10 加樣回收率試驗 稱取同一批次(120309)降脂脈安顆粒6份，分別按“2.2.1”項下的方法制得供試品溶液，每份分別量取0.1mL，精密加入一定量的黃芪甲苷對照品溶液，按照“2.2.6”項下，自“分別加入新鮮配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL”起操作，顯色后測定吸光度，計算回收率，結果平均回收率為97.5%，RSD=1.29%，見表11。

表11 回收率試驗

2.2.11 樣品含量測定 按“2.2.1”項下方法制得3個批次(110708、111103、120309)樣品溶液11份，每份各量取0.1mL，轉入干燥具塞試管中揮干乙醇，按照“2.2.6”項下，自“分別加入新鮮配制的5%香草醛-冰醋酸溶液0.2mL”起操作，顯色后測定吸光度，計算樣品中總皂苷的含量，結果見表12。

表12 三批樣品總蒽醌含量測定結果

根據3批樣品測定結果，暫定樣品中每袋含總皂苷以黃芪甲苷計算，每袋不得少于0.15g。

3 結語

本實驗利用紫外分光光度法，測定醫院自制制劑中總蒽醌的含量，方法簡便、準確、靈敏度高。利用紫外分光光度法測定，以黃芪甲苷為對照品，測得標準曲線后，再測定黃芪中總皂苷的含量是非常成熟的方法。測定結果具有較高的參考價值。為昆山市中醫醫院的自制制劑降脂脈安顆粒的質量控制和標準提升，提供了一定的科學依據。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010：136.

[2] 黎海彬,方昆陽,呂翠婷,等.決明子、山楂提取物不同配比降血脂作用的研究[J].中草藥,2007,30(5):573-575.

[3] 李續娥,郭寶江.決明子蛋白質和蒽醌苷對高脂血癥大鼠血脂的影晌[J].中國臨床康復,2004,8 (18):3694-3695.

[4] 張 榮,劉必旺,王永輝,等.決明子乙酸乙酯提取物對非酒精性脂肪肝大鼠的防治作用[J].山西中醫,2009,25 (7) ,45-47.

[5] 韓昌志.決明子煎劑對家兔和狗睫狀肌中乳酸脫氫酶活性的影響[J].同濟醫科大學學報,1994,23 (6):470-472.

[6] 張加雄,萬 麗,胡軼娟,等.決明子提取物瀉下作用研究[J].時珍國醫國藥,2005,16 (6):67-68.

[7] 劉菊秀,苗 戎,狄俊英,等.決明子降壓作用的實驗研究[J].天津中藥,1990(5):37-38.

[8] 王文風,陳聰敏,陳瓊華,等.蒽醌衍生物抗厭氧菌的實驗研究[J].中國藥科大學學報,1990,21(6):354-357.

[9] 鄧響潮,孫桂波,宋 威,等.決明子蒽醌苷對小鼠免疫功能的調節作用[J].藥物研究,2008,17(11):10-11.

[10] 田大年,黃宇.決明子茶中游離蒽醌含量及抗氧化能力的研究[J].食品研究與開發,2014,35(12):54-57.

[11] 曲 毅,王伽伯,李會芳,等.蒽醌類中藥的致瀉強度與化學含量相關性研究[J].中國中藥雜志,2008，33(7):806-808.

[12] 張小梅,楊榮平,勵娜,等.決明子中蒽醌類成分的含量測定[J].時珍國醫國藥,2007,18(1):97-98.

[13] 康 建,屈凌波,吳擁軍,等.分光光度法測定決明子中總蒽醌含量[J].中醫研究,2011,24(5):35-37.

[14] 國家藥典委員會.中國藥典[S].北京:中國醫藥科技出版社,2010：284.

[15] 朱華野,樸 龍.黃芪提取物抗炎、鎮痛、耐缺氧及抗疲勞作用的研究[J].時珍國醫國藥,2007,18(5):156-157.

[16] 方 光.黃芪注射液治療免疫性疾病的效果觀察[J].福建醫藥雜志,2000,22(1):338.

[17] 楊小敏,徐曉武,盧荷蓮,等.黃芪皂苷對小鼠腹腔巨噬細胞的免疫增強作用[J].中國免疫學雜志,2008,9(24):804-807.

[18] 杜小燕,覃 華,韓 艷,等.黃芪皂苷Ⅳ對心肌缺血/再灌注損傷的保護及抗凋亡作用的研究[J].現代生物醫學進展,2011,11(22):218-221.

[19] 劉明華,任美萍,陳健平,等.黃芪皂苷抗腫瘤活性研究[J].中藥藥理與臨床,2009,25(2):68-70.

[20] 李楠,范 穎,賈旭鳴,等.黃芪不同有效部位對糖尿病模型大鼠血清胰島素、脂聯素的影響[J].中國實驗方劑學雜志， 2011,17(5):144-146.

[20] 杜學勤,趙正保.黃芪中黃芪皂苷的提取分離工藝研究[J].中成藥,2008,30(7):1066-1068.

[21] 唐 君.比色法測定黃芪中黃芪總皂苷含量[J].安徽中醫學院學報,2004,23(5):37-38.

(責任編輯：余 婷)

Quality Standards for Particles of Lipid-lowering Clock Security

Jin Tongqin1，Zhu Huarong2*
(1.Traditional Chinese Medicine Hospital of Kunshan,Kunshan 215000,China;2.Yangzi River Pharmacetuical Group,Nanjing 225000,China)

Objective:To establish and improve the quality of the particles of lipid-lowering clock security standards.Methods:UV spectrophotometry cassia seed,anthraquinones and saponins in Radix Astragali.Results:cassia seed anthraquinones.0025～0.0200mg/mL concentration range of linear,r = 0.999 9,the average recoveries of 97.59%,RSD=1.15%; total saponins in astragalus 0.016～0.036mg / mL,good linearity in the range r=0.999 6,average recoveries of 97.5%,RSD=1.29%.Conclusion:The method is simple,accurate,high sensitivity,good reproducibility can be used as a quality control method for the preparation

Lipid-lowering clock security particles; UV spectrophotometry; Total anthraquinone; Total saponins determination of content

2015-01-23

金同慶(1980-)，男，江蘇省昆山市中醫醫院主管中藥師，研究方向為中藥學。

朱華榮(1981-)，男，碩士，揚子江藥業集團有限公司高級項目管理師，研究方向為中藥、天然藥物開發。

R284.2

A

1673-2197(2015)15-0042-05

10.11954/ytctyy.201515018