桂花組織培養研究進展

摘要：桂花（Osmanthus fragrans Lour.）是木犀科（Oleaceae）木犀屬植物，是我國傳統十大名花之一。具有極強的觀賞性，又有巨大的藥用價值。通過桂花組織培養技術獲得再生植株可以用于桂花的快速繁殖、輔助育種、種質資源保存、產生人工種子等。本文綜述了桂花叢生芽的誘導、增殖與生根及愈傷組織的誘導與分化，并對今后桂花組織培養研究做了展望。

關鍵詞：桂花；叢生芽；增殖；生根；分化

中圖分類號：S68 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2014）12（c）-0000-00

桂花（Osmanthus fragrans Lour.）是木犀科（Oleaceae）木犀屬植物，是我國傳統十大名花之一。《本草綱目》記載“桂花生津，辟臭，治療風蟲牙痛。現代藥理研究表明，桂花有降血糖、抗氧化、抗炎和抑菌作用。組織培養可用于植物的快速繁殖、輔助育種、種質資源保存、產生人工種子等[1]。我國桂花研究者通過腋芽、幼莖、胚、子葉等組織培養獲得再生植株。本文總結了桂花組織培養的研究進展。

1 叢生芽的誘導、增殖與生根

1.1 初代培養

取材部位和時期決定了培養難易程度并影響培養結果。在桂花組織培養研究中，使用最多的外植體是嫩梢，因其帶菌少，易消毒，操作簡單。最早開展桂花離體培養的是秦新民[2]，他以MS作為基本培養基，激素組合為1.0 mg.L-1 6-BA（1.0mg.L-1 ZT）+ 0.05 mg.L-1NAA，誘導幼嫩莖段產生叢生芽[2]；王彩云實驗結果表明NAA改為0.25 mg.L-1誘導率更高[3]；呂志鵬等通過正交實驗認為MS+2. 5 mg.L-1 6-BA+ 0.5 mg.L-1NAA效果最好[4]；何鋼等則認為1/2MS+ 0.5.mg.L-1 6-BA+ 0.2mg.L-1 NAA更有利于金獅桂幼莖叢生芽的誘導[5]；宋會訪等則使用了LMc+KT 8.0mg L-1+NAA 0.1 mg L-1培養基[6]。桂花當年的生長期短，幼嫩莖段取材時間極為有限。為了延長桂花組織培養取材時間，袁王俊[1]、李林[7]等分別用休眠芽、萌動芽和幼嫩莖段為材料，系統研究了初代培養的條件，休眠芽以B5+7.0 mg·L-16-BA+0.05 mg ·L-1NAA，萌動芽以B5+5.0 g·L-16-BA +0.05 mg·L-1NAA，同時發現B5培養基相比于MS培養基產生的愈傷組織少，且生長速度快。蔡新玲等也認為桂花萌發芽由于經過低溫休眠，芽體充分分化，營養物質積累豐富，苞片緊密，污染率低，且操作容易，是桂花組織培養很好的外植體[8]。

胚培養在雜交育種中可以進行胚拯救，縮短育種年限，具有重要意義。袁王俊等以B5+2 mg·L-16-BA+0.1mg ·L-1NAA為培養基，成功誘導桂花胚離體萌發[9]。馬燕[10]、梁茂廠[11]等以大花金桂、籽銀桂、籽丹桂幼胚為材料，結果與袁王俊等的研究基本一致。

1.2 繼代培養

相對于初代培養，繼代培養研究較少。宋會訪等研究認為LMc+TDZ 0.5 mg L-1+0.10 mg L-1 NAA有利于增值[6]。袁王俊等發現，無論是休眠芽、萌動芽和幼嫩莖段，其萌發后繼代培養最適合的培養基均為B5+2.0 mg·L-16-BA+0.05 mg·L-1NAA，而呂志鵬則認為B5+3.0 mg·L-16-BA+0.4 mg·L-1NAA效果最好[1]。

1.3生根培養

生根方面，研究者的結果比較一致，培養基為1/2MS（B5）+ 2-3mg.L-1 NAA+0-0.05mg.L-1 6-BA培養基。

2 愈傷組織的誘導、分化及胚狀體的形成

彭盡暉等最先實現了桂花愈傷組織的誘導與增殖，以四季桂花梗作外植體，在MS+ 1.5 mg L-1 BA +0.1 mg L-12，4-D培養基上，暗處理7d，愈傷組織誘導率可達85.71%。用2，4-D

繼代培養以MS+ 1.5 mg L-12ip+0.1 mg L-1NAA培養基效果最好[12、13]。同時發現繼代培養中采用2，4-D作為生長激素，雖然生理活性強，誘導率高，但易使細胞老化，喪失生活力。王

珍華等[13]則以大花金桂的子葉為外殖體誘導產生愈傷組織，且愈傷組織在分化培養基1/2MS + 0.5mg.L-1TDZ+0.1 mg.L-1NAA培養基上產生不定芽，首次實現了桂花愈傷組織分化成苗。Zou 等[14]以下胚根、下胚軸、胚芽和子葉被作為外殖體，MS+1.0 mg.L-1 BA + 0.5 mg.L-1 2，4-D為培養基產生胚性愈傷組織，接著在MS+1.0 mg.L-1 BA and 0.5 mg.L-1 NAA培養基上產生了胚狀體，第一次經由胚狀體產生再生植株。

3 結論

桂花叢生芽的誘導、增殖與生根以及愈傷組織的誘導與分化在目前是我國桂花組織培養研究領域比較成熟的技術。我國桂花研究者通過腋芽、幼莖、胚、子葉等組織培養獲得了再生植株；通過愈傷組織的誘導、分化及胚狀體的形成等技術也獲得了桂花再生植株。這大大的縮短了育種年限，對桂花的快速繁殖、輔助育種、種質資源保存、產生人工種子等都極有益處。

4 存在問題及展望

盡管桂花組織培養的研究取得了不小進展，但尚存在一些問題，具體包括： （1）各個研究者使用的基本培養基各不相同，沒有統一的適合桂花組織培養的基本培養基；（2）增殖率低是桂花組織培養中存在的最大問題；（3）目前還沒有桂花遺傳轉化體系方面的研究。今后工作中，我們應該篩選適合桂花組織培養的培養基，甄選提高增殖率的方法，建立成熟的遺傳轉化體系。

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