高效液相色譜法測定唑來膦酸制劑含量

摘 要：目的 建立注射用唑來膦酸含量測定方法。方法 采用離子對高效液相色譜法，色譜柱為Ultimate柱（150mm*4.6mm，5um），以甲醇：四丁基氫氧化銨溶液（用磷酸調pH至3.5）（35：65）為流動相，流速為1.0mL/min，檢測波長為215nm。結果 輔料不干擾本品含量測定，耐用性試驗符合規定，溶液溶度在4.1ug/mL～60ug/mL范圍內線性關系良好，準確度平均回收率為99.3%，RSD為0.6%，重復性及中間精密度符合規定，溶液穩定性研究結果表明溶液在8h內穩定。結論 所建立的含量測定方法操作簡便、準確，重現性好，可用于本品含量測定。

關鍵詞：唑來膦酸 方法學 含量測定

中圖分類號：R927 文獻標識碼：A 文章編號：1674-098X（2015）04（b）-0090-01

唑來膦酸的藥理作用主要是抑制骨吸收，其作用機制尚不完全清楚，可能與多方面作用有關。唑來膦酸在體外可抑制破骨細胞活動，誘導破骨細胞調亡，還可通過與骨的結合阻斷破骨細胞對礦化骨和軟骨的吸收。唑來膦酸還可以抑制由腫瘤釋放的多種刺激因子引起的破骨細胞活動增強和骨鈣釋放[1]。我們采用高效液相色譜法測定唑來膦酸制劑含量，建立本品含量測定方法[2-4]。

1 儀器與試藥

Agilent 1260 Series高效液相色譜儀（VWD檢測器），色譜柱AQ-C18 5μm Ultimate 4.6×150mm。

唑來膦酸對照品（含量：99.8%），注射用唑來膦酸由哈藥集團生物工程公司提供，其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

色譜條件：用烷基硅烷鍵合硅膠（C18）為填充劑，用甲醇與四丁基氫氧化銨溶液（用磷酸調pH至3.5）（35∶65）為流動相，檢測波長為215nm。理論板數按唑來膦酸峰計算應不低于5000。

測定法取本品，精密稱定，用流動相溶解并制成每1mL含20μg的溶液，精密量取20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖，另精密稱取對照品，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。

2.1 專屬性試驗

唑來膦酸、空白輔料（檸檬酸鈉、甘露醇）、起始物料及中間體，流動相溶解，按照擬定方法進樣，結果唑來膦酸與其他物質可有效分離，唑來膦酸峰純度符合規定，表明輔料、中間體及起始物料不干擾含量測定。在該色譜條件下，主峰對稱因子0.98，塔板數8000。

2.2 耐用性試驗

更換3根不同型號色譜柱、所用流動相比例（所用流動相變化范圍為±5%）、色譜柱的柱溫（25℃、30℃、35℃）及實驗時的流速（0.8mL/min、1.0mL/min、1.2mL/min），評價各項試驗指標的變化對含量測定影響，結果表明各項指標變化對含量測定結果無明顯影響，符合耐用性試驗的規定。色譜峰的對稱因子在0.9～1.1之間，理論塔板數均大于5000。

2.2 線性試驗范圍

取唑來膦酸對照品適量，精密稱定，用流動相溶解并稀釋至刻度，搖勻，用作對照品的儲備液。分別精密量取唑來膦酸對照品儲備液1mL、2mL、4mL、8mL、16mL，置50mL容量瓶中，加流動相分別稀釋至刻度，搖勻。制成系列溶度溶液，分別精密量取20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以唑來膦酸的濃度為橫坐標，峰面積為縱坐標，進行線性回歸，結果當進樣量為20μL時，唑來膦酸濃度在4.1μg/mL～60μg/mL濃度范圍內線性關系良好。

2.3 準確度試驗

稱取唑來膦酸對照品，精密稱定，加實驗用流動相溶解對照品并稀釋制成濃度約為20μg/mL的溶液，作為準確度實驗的對照品溶液。取唑來膦酸原料適量各3份，分別精密稱定樣品，將樣品各置于100mL的容量瓶中，加流動相溶解（必要時超聲）并稀釋至刻度，搖勻。分別精密量取2mL，加流動相稀釋至10mL，作為準確度實驗的供試品溶液德80%、100%、120%組。精密量取對照品溶液及供試品溶液各20μL，注入液相色譜儀，記錄測定的色譜圖，按外標法以峰面積計算唑來膦酸藥品的含量，并計算各回收率。結果平均回收率為99.3%，相對標準偏差為0.6%，準確度試驗符合要求。

2.4 重復性及中間精密度試驗

取供試品6份，分別精密稱定。分別加實驗用流動相使溶解并定量稀釋制成供試品溶液。按照擬定的含量測定方法進行試驗，結果表明本品平均含量為99.8%，RSD為0.4%，方法的重復性符合要求。

取供試品，照含量測定方法進行測定，變動因素為人員、實驗時間及實驗儀器（安捷倫、島津液相），考察含量測定結果一致性情況。結果12次測定的平均含量為99.2%，相對標準偏差為0.9%，中間精密度符合規定。

2.5 溶液穩定性試驗

取供試品適量，精密稱定供試品，25℃條件下放置8 h，分別于0 h、1 h、2 h、4 h、5 h及8 h進樣測定。考察樣品含量變化情況，結果8 h含量基本無變化，表明供試品溶液在25℃條件下放置8 h內較穩定。

2.6 樣品含量測定

取本品10瓶，精密稱定，用流動相溶解制成20ug/mL的溶液，按照所確定含量測定方法，測定唑來膦酸供試品的含量，結果分別為99.6%、100.5%、99.3%。

3 結語

所建立含量測定方法可行，操作簡便，結果準確，重現性好，專屬性強，可用于唑來膦酸制劑含量測定。

參考文獻

[1]彭六保，崔巍.唑來膦酸的臨床應用研究進展[J].中國新藥與臨床雜志，2007，3（26）：237-240.

[2]鄭國鋼，方瀅芝.高效液相色譜法測定注射用唑來膦酸的含量[J].藥學實踐雜志，2003，21（6）：55-56.

[3]王玲玲.高效液相色譜法測定注射用唑來膦酸含量和有關物質[J].中國新藥雜志，2006，15（8）：11.

[4]鄭朝華，陳寶龍.反相離子對高效液相色譜法測定唑來膦酸粉針劑中主藥和有關物質[J].中國新藥雜志，2004，13（10）：919-920.