SurePath與Cytospin兩種液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的比較研究

摘要：目的 比較SurePath和Cytospin兩種液基細(xì)胞學(xué)制片技術(shù)的優(yōu)缺點。方法 收集了2013年8月～2014年7月在彭州市婦幼保健院進(jìn)行宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢測的6970例標(biāo)本，其中2750例采用Cytospin制片，4220例采用SurePath制片，兩組標(biāo)本均采用TBS-2001判讀標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行質(zhì)量評估和分類報告，并對報告結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計學(xué)分析。結(jié)果 與Cytospin比較，SurePath的標(biāo)本不滿意率降低了86.16%，ASC-US+檢出率提高了124.20%，LSIL+檢出率提高了188.59%，HSIL+檢出率提高了209.54%，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 與Cytospin比較，SurePath在多項技術(shù)性能中均表現(xiàn)出了明顯的優(yōu)勢，為細(xì)胞學(xué)實驗室提供了一套更好的制片方案。

關(guān)鍵詞：宮頸液基細(xì)胞學(xué)；TBS；SurePath；Cytospin

Comparative Study of SurePath and Cytospin Two Kinds of Liquid-based Cytology Production Technology

CAI Yong-bin，LIU Ke-ming，LEI Ying，YIN Xian-ke

（MCH Hospital of Pengzhou City，Pengzhou 611930，Sichuan，China）

Abstract：Objective Comparing the advantages and disadvantages of SurePath and Cytospin two kinds of liquid-based cytology production technology.Methods 2013 August to 2014 July were collected 6970 specimens of cervical liquid-based cytology in the MCH Hospital of Pengzhou， of which 2750cases were treated with producer Cytospin， and 4220 cases were treated with SurePath production， two groups of specimens are used for interpretation of TBS-2001 standards for quality evaluation and classification of the report，and the results were statistically analyzed.Results Compared with Cytospin， the specimens unsatisfactory rate of SurePath is reduced by 86.16%，the detection rate of ASC-US+ increased by 124.20%，the detection rate of LSIL+ increased by 188.59%，the detection rate of HSIL+ increased by 209.54%，The difference was statistically significant.Conclusion Compared with Cytospin， SurePath in a number of technical performance showed obvious advantage，Provides a better production scheme for cytology laboratory.

Key words：Cervical liquid-based cytology； TBS；SurePath；Cytospin

液基細(xì)胞學(xué)（Liquid-based cytology）制片技術(shù)革新了標(biāo)本采集和制片方法，極大的提高了細(xì)胞學(xué)實驗室的制片質(zhì)量。隨著液基制片逐步替代傳統(tǒng)巴氏涂片，市場上出現(xiàn)了大量不同類型的液基細(xì)胞學(xué)制片產(chǎn)品。采用不同的設(shè)備和方法其制片質(zhì)量如何，尚需通過不斷的臨床實踐來檢驗。

1資料與方法

1.1一般資料 收集了2013年8月～2014年7月在彭州市婦幼保健院進(jìn)行宮頸液基細(xì)胞學(xué)檢測的6970例標(biāo)本。其中2013年8月～2014年1月的2750例標(biāo)本使用Cytospin制片，2014年2月～7月的4220例標(biāo)本使用SurePath制片。

1.2方法

1.2.1取樣工具 Cytospin采用丹陽市東勝塑料制品有限公司生產(chǎn)的一次性宮頸細(xì)胞取樣刷；SurePath采用荷蘭Rovers Medical Devices公司生產(chǎn)的Rovers○R Cervex-Brush（宮頸細(xì)胞刷）。

1.2.2制片設(shè)備 Cytospin，又稱為細(xì)胞離心涂片機(jī)，為湖北孝感闊海醫(yī)療科技有限公司的產(chǎn)品，由振蕩器、過濾裝置和離心甩片機(jī)組成；SurePath，又稱為AutoCyte，為美國BD公司的產(chǎn)品，由振蕩器、樣本轉(zhuǎn)移機(jī)（PrepMate○R）、離心機(jī)、制片染色機(jī)（PrepStain○R）和程控電腦組成。

1.2.3樣本收集 Cytospin和SurePath均采用相同的樣本收集方法：①用干棉球輕輕拭去宮頸外口的粘液及分泌物；②將宮頸取樣刷刷頭中間部較長的刷毛插入子宮頸管內(nèi)，周邊部刷毛頂端覆蓋在宮頸外口處，柔和的向前抵住取樣刷，保持一定的壓力，順時針同向旋轉(zhuǎn)3～5 w；③在盛有保存液的瓶子里涮洗宮頸刷，然后下推或拔脫宮頸刷刷頭，并將刷頭刷尖向下浸泡于樣本收集瓶的保存液內(nèi)；④擰緊瓶蓋，標(biāo)記受檢者姓名和識別信息。

1.2.4制片步驟 Cytospin：①振蕩；②過濾；③標(biāo)記載玻片，安裝制片夾；④吸取2～4 ml細(xì)胞混懸液滴入對應(yīng)的樣本端口；⑤啟動細(xì)胞離心涂片機(jī)（2000 r/min），離心1 min；⑥取片，并適當(dāng)干燥（約30s）；⑦95%酒精固定（約30 min）；⑧染色；⑨脫水、透明并封固。SurePath：①振蕩；②標(biāo)注離心管，并加入4 ml密度梯度分離液；③運(yùn)行PrepMate樣本轉(zhuǎn)移機(jī)，將樣本轉(zhuǎn)移至離心管；④離心機(jī)第一次離心（離心力200 g，時間2 min）；⑤用負(fù)壓吸引器吸出離心管上層的血液、粘液及雜質(zhì)；⑥第二次離心（離心力800 g，時間10 min）；⑦倒盡離心管液體，保留富集細(xì)胞團(tuán)；⑧準(zhǔn)備玻片架，安放沉降室；⑨安放離心管架、玻片架和染液管架；⑩運(yùn)行PrepStain制片系統(tǒng)；○11取片，并脫水、透明及封固。

1.2.5染色方法 Cytospin和SurePath均采用巴氏染色。

1.2.6標(biāo)本質(zhì)量評估及結(jié)果判讀 采用TBS-2001（The Bethesda system）判讀標(biāo)準(zhǔn)對所有Cytospin和SurePath制片進(jìn)行標(biāo)本質(zhì)量評估和分類報告。

1.2.7質(zhì)量控制 全部\"不滿意\"標(biāo)本和\"陽性\"涂片需經(jīng)過至少2名醫(yī)生重復(fù)閱片，陰性涂片進(jìn)入常規(guī)質(zhì)控程序。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 統(tǒng)計學(xué)分析采用SPSS 19.0軟件，率的比較使用χ2檢驗，P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2結(jié)果

2.1 SurePath制片與Cytospin 制片的TBS報告結(jié)果比較，見表1。

2.2 SurePath制片與Cytospin制片的ASC-US+檢出率、LSIL+檢出率及HSIL+檢出率比較，見表2。

3討論

3.1自從20世紀(jì)40年代Papanicolaou醫(yī)生開始用細(xì)胞學(xué)涂片診斷宮頸癌以來，全世界都用巴氏涂片進(jìn)行宮頸癌篩查。Laara的研究顯示，在篩查質(zhì)量和覆蓋面積較高的地區(qū)和國家，該方法可以減少浸潤性宮頸癌的發(fā)病率達(dá)80%[1]。由于巴氏涂片簡單易行，經(jīng)濟(jì)有效，該技術(shù)幾乎被一成不變地沿用了將近5 0 年。20世紀(jì)80 年代末和90年代初， 大量發(fā)生在美國女性巴氏檢查假陰性診斷的訴訟案引起了人們的關(guān)注。Frable等的報道顯示，巴氏涂片的假陰性率至少為15%～20%[2]。直到20世紀(jì)90年代末，美國食品與藥物管理局（FDA）相繼批準(zhǔn)了ThinPrep（新柏氏）及AutoCyte（現(xiàn)稱為SurePath）兩種液基細(xì)胞學(xué)制片產(chǎn)品應(yīng)用于臨床診斷。隨著液基細(xì)胞學(xué)逐步替代傳統(tǒng)巴氏涂片，市場上出現(xiàn)了大量各式各樣的液基細(xì)胞學(xué)制片裝置，根據(jù)制片原理的不同，大致可分為離心式制片、濾膜式制片和沉降式制片3種類型。

Cytospin是細(xì)胞離心涂片機(jī)的代名詞，用于制作細(xì)胞學(xué)涂片已有40多年的歷史，英國Shandon Cytospin是離心式制片技術(shù)的代表。趙華等的報道顯示，與巴氏涂片比較，Shandon Cytospin制片的異常細(xì)胞檢出率提高了3.5倍（269.23%）[3]。本項研究使用的湖北闊海Cytospin制片原理與Shandon Cytospin相同。其產(chǎn)品的優(yōu)勢是設(shè)備要求不高，耗材成本較低。局限性是未采用梯度離心細(xì)胞富集技術(shù)、細(xì)胞定量采集技術(shù)、自動染色技術(shù)和不可避免的空氣干燥。空氣干燥會導(dǎo)致細(xì)胞退變、微細(xì)結(jié)構(gòu)消失、出現(xiàn)煎蛋樣改變等人工假象，這是導(dǎo)致細(xì)胞學(xué)鑒別診斷困難最為常見的原因之一。

ThinPrep（新柏氏）是美國Hologic公司的產(chǎn)品，1996年通過美國FDA認(rèn)證，是濾膜式制片技術(shù)的代表。Monsonego 等的多中心研究顯示，與傳統(tǒng)涂片比較，ThinPrep的標(biāo)本不滿意率增加了10.42%，HSIL檢出率提高了58%，LSIL檢出率提高了18%，ASCUS檢出率提高29%[4]。印永祥等的報道顯示，與傳統(tǒng)涂片比較，ThinPrep的標(biāo)本不滿意率降低了31.57%，異常細(xì)胞檢出率提高了204.05%[5]。

SurePath又稱為AutoCyte，是美國BD公司的產(chǎn)品，1998年通過美國FDA認(rèn)證，是沉降式制片技術(shù)的代表。其制片特點主要有：①密度梯度試劑與低速離心相結(jié)合，使標(biāo)本混懸液分層；通過負(fù)壓吸引器祛除離心管上層的血液、粘液及雜質(zhì)等干擾制片的物質(zhì)；然后再通過第二次離心富集上皮細(xì)胞用于制片。②玻片位于沉降室底部，定量吸取細(xì)胞混懸液加入預(yù)置了一層緩沖水的沉降室，利用重力作用，細(xì)胞自上而下飄落到玻片上，不但能夠增加捕捉病變細(xì)胞的幾率，而且最大限度地保護(hù)了細(xì)胞的自然形態(tài)。③每張涂片獨立染色，染液一次性使用，既避免了標(biāo)本的交叉污染，又保證了染色的一致性和可重復(fù)性。④每批次可自動制片并染色48張，制片效率非常高，特別適合大樣本標(biāo)本的批量化處理。

3.2細(xì)胞學(xué)報告的準(zhǔn)確性與樣本的采集、制片的質(zhì)量以及醫(yī)生的閱片經(jīng)驗密切相關(guān)。Frable等的報道顯示，在傳統(tǒng)巴氏涂片中，有高達(dá)53%～90%假陰性的原因是涂片中沒有能診斷的細(xì)胞[2]。在樣本采集環(huán)節(jié)，SurePath采用荷蘭Rovers Medical Devices公司的Rovers？ Cervex-Brush，與普通宮頸細(xì)胞刷相比，其刷毛采用了專利外觀及橫切面設(shè)計，能夠更加容易的采集到宮頸管移行區(qū)的上皮細(xì)胞，這是降低標(biāo)本不滿意率和提高異常細(xì)胞檢出率的一個容易被忽視的因素。無論是ThinPrep、Cytospin，還是SurePath，在樣本收集瓶里涮洗宮頸刷，盡量使細(xì)胞從刷子和粘液中脫落下來，這是取樣時可以普遍采用的一項操作技巧。Bigras等的研究顯示，將宮頸刷刷頭放入樣本保存瓶中，可以保證最佳的液基細(xì)胞學(xué)樣本收集[6]。在制片環(huán)節(jié)，湖北闊海Cytospin使用了一種簡便的內(nèi)置式過濾裝置，對粘液和雜質(zhì)具有一定的分離作用。SurePath采用梯度離心細(xì)胞富集技術(shù)，能很好的分離血液、粘液和雜質(zhì)。接觸性出血既是宮頸癌前病變最常見的一種癥狀，又是導(dǎo)致標(biāo)本制片不滿意最常見的一種原因。Brenda等的研究顯示，SurePath采用的細(xì)胞富集方法與ThinPrep的膜濾過方法相比，能處理的可能混雜血液量顯著增加[7]，這也是SurePath的標(biāo)本不滿意率顯著低于Cytospin制片的一個重要原因。Fremont-Simith等的多中心研究顯示，與傳統(tǒng)涂片比較，SurePath的標(biāo)本不滿意率降低了58.44%，HSIL檢出率提高了64.44%，LSIL檢出率提高了107.16%，ASC-US檢出率提高了75.12%。本項研究顯示，與Cytospin比較，SurePath的標(biāo)本不滿意率降低了86.16%（P<0.01）， ASC-US+檢出率提高了124.20%（P<0.01），LSIL+檢出率提高了188.59%（P<0.01），HSIL+檢出率提高了209.54%（P<0.05），差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

總之，制片質(zhì)量受到樣本的采集質(zhì)量、設(shè)備的智能化程度以及制片人員的專業(yè)素質(zhì)等多種因素的影響。與Cytospin比較，SurePath液基細(xì)胞學(xué)制片系統(tǒng)在多項技術(shù)性能中均表現(xiàn)出了明顯的優(yōu)勢，為細(xì)胞學(xué)實驗室提供了一套更好的制片方案。

參考文獻(xiàn)：

[1]Laara E.Trends in mortality from cervical cancer in the Nordic countries：association with organized screening programmes[J].Lancet，2005，34（4）：247-249

[2]Frable WJ，Austin RM，Collins RJ，et al.Medicolegal affairs：IAC task force summary[J].Acta Cytol，1998，42（1）：76-119

[3]趙華，陸以農(nóng)，陳萍倩，等.細(xì)胞離心涂片機(jī)制作液基細(xì)胞涂片在宮頸病變診斷中的可行性評估[J].實用醫(yī)技雜志，2005，12（2）：284-285.

[4]Monsonego J，Autillo-Touati A，Bergeron C，et al.Liquid-based cytology for primary cervical cancer screening：a multi-centre study[J].Br J Cancer，2001，84（3）：360-366.

[5]印永祥，趙華，黃望珍.液基細(xì)胞學(xué)技術(shù)與傳統(tǒng)細(xì)胞學(xué)涂片檢測宮頸鱗狀細(xì)胞病變的比較[J].中國婦幼保健，2012，27（8）：1234-1236.

[6]Bigras G，Rieder MA，Lambercy JM，et al.Keeping Collecting Device in liquid medium is mandatory to ensure optimized Liquid-based cervical cytologic sampling[J].Journal of Lower Genital Tract Disease，2003，7（3）：168-174.

[7]Brenda J.Sweeney，Zafarul Haq，James F.Happel，et al.Comparison of the effectiveness of two liquid-based Papanicolaou systems in the handling of adverse limiting factors，such as excessive blood[J].Cancer Cytopathology.2006，108（1）：27-31.

編輯/張燕