虎眼萬年青藥理活性及安全性研究進展

摘要：近年來，虎眼萬年青的化學成分，藥理活性方面的研究均取得重要進展，其廣泛的藥理活性包括抗腫瘤，免疫調(diào)節(jié)，鎮(zhèn)痛抗炎，防治肝損傷等多方面。本文對虎眼萬年青的藥理活性及安全性研究進行文獻整理與分析，為該藥材的臨床及開發(fā)利用提供參考。

關(guān)鍵詞：虎眼萬年青；藥理活性；安全性

虎眼萬年青（Ornithogalum caudatum ait），別名珍珠草、海蔥、鳥乳花等，為百合科、虎眼萬年青屬多年生草本植物。由于其不僅具有較高的觀賞性，也具有很高的藥用價值，民間將其作為中藥材使用。虎眼萬年青鮮汁液外敷可以消炎、消腫、止痛，水煎內(nèi)服可以解毒化瘀，治療肝炎、肝硬化等頑疾[1]。

1 虎眼萬年青藥理活性研究

1.1抗腫瘤活性 虎眼萬年青的抗腫瘤作用，文獻報道較多，而且從多個角度闡明了其抗腫瘤的機制。OSW-1對多種腫瘤細胞都具有非常強的靶向細胞毒性，而對正常細胞的毒性損傷卻很小，它的抗癌活性為紫杉醇、阿霉素以及喜樹堿的10～100倍[2，3]。目前研究普遍認為OSW-1類化合物的作用機制在于，其能夠破壞細胞的線粒體膜，從而誘導細胞凋亡。有研究[4]發(fā)現(xiàn)OSW-1能夠破壞白血病細胞以及胰腺癌細胞線粒體膜，使得跨膜電位降低，胞漿內(nèi)Ca2+濃度增加，激活Ca2+依賴性的細胞凋亡途徑，誘導細胞凋亡。也有研究[5]發(fā)現(xiàn)OSW-1能夠與Caspase-8結(jié)合，并激活其誘導Bcl-2裂解，使線粒體膜無法保持完整性，細胞色素C釋放至胞漿，從而細胞凋亡。

但由于OSW-1的提取分離、合成工藝復雜且耗資較高。亦有不少學者研究虎眼萬年青的總皂苷（ORS）的抗癌作用效果。在MTT法檢測ORS對人乳腺癌細胞MDA-MB-231的細胞增殖抑制實驗中[6]，濃度≥25μg/mL的ORS顯示出明顯的細胞生長抑制作用，且呈現(xiàn)出劑量時間依賴性；其亦可誘發(fā)細胞發(fā)生凋亡，且凋亡率呈濃度依賴性，使得細胞周期明顯阻滯于G0/G1期。

在虎眼萬年青總皂苷干預對二乙基亞硝胺誘發(fā)的大鼠肝癌變實驗中[7]，研究人員運用免疫組化方法觀察并分析第12、14、18w肝組織標本中Ki67、Flt-1的表達。在肝的癌變過程中，12w模型組Ki67 LI表達最高，14w模型組Flt-1 LI表達最高，而ORS作用的12w預防組Ki67 LI表達較低，14w預防組，治療組Flt-1 LI表達較低，且都與模型組有統(tǒng)計學意義。此實驗研究表明在二乙基亞硝胺誘發(fā)的肝癌變過程中，虎眼萬年青總皂苷可以干預肝損傷，硬化階段的肝細胞增生，而在肝癌發(fā)生階段，干預Flt-1的表達。

虎眼萬年青中提取的水溶性多糖成分亦具有抗腫瘤效果[8]，采用EDAE-Sepharose Fast Flow離子交換柱色譜和Sephadex G-75凝膠過濾柱色譜分離純化，分離得到的四個多糖部位（OCAP-2-1，OCAP-2-2，OCAP-3-1和OCAP-3-3），其主要由葡萄糖（30%～42.5%），半乳糖（23%～29%），阿拉伯糖（6%～14%），甘露糖（2%～9%），木糖（4%～6%），葡萄糖醛酸（1.0%～7.5%），半乳糖醛酸（1%～6%）組成。其蛋白質(zhì)含量分別為2.13%，2.82%，3.45%，3.97%，分子量分別為102.1，62.3，46.4和22.8 KDa，該四種多糖組分在體內(nèi)抗腫瘤實驗中，對小鼠肉瘤S180抑制作用均顯示出較高的活性，而在體外細胞實驗中，OCAP-2-2，OCAP-3-1和OCAP-3-3對人類慢性髓性白血病細胞K562顯示出很高的抑制活性。

1.2肝損傷及肝硬化防治 在防治大鼠急性肝損傷實驗中[9，10]，研究人員對比吉林長白山中藥研究所的虎眼萬年青精制粉與甘草酸二胺防治組的防治作用，結(jié)果顯示，與CCl4急性肝損傷模型組相比，虎眼萬年青具有與甘草酸二胺相當?shù)慕档图毙愿螕p傷組大鼠血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）、谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）、并提高血清前白蛋白（PA）活性的作用，而在HE染色觀察肝組織病理變化，免疫組織化學法觀察肝組織溶菌酶蛋白（MOD）的表達、了解急性肝損傷大鼠肝臟枯否氏細胞（KC）的變化的實驗中，虎眼萬年青防治組顯示出其能夠顯著改善肝組織炎性反應，大鼠肝組織MOD表達較模型組顯著降低，且優(yōu)于甘草酸二胺防治對照組，說明虎眼萬年青抑制KC表達，可能是其防治急性肝損傷的作用機理之一。

在對乙酰氨基酚建立的急性肝損傷模型中[11]，體內(nèi)實驗結(jié)果表明，虎眼萬年青總皂苷在對乙酰氨基酚誘導肝損傷12h后具有較強的肝保護作用，抑制了血清中谷草轉(zhuǎn)氨酶和谷丙轉(zhuǎn)氨酶的活性，減少了脂質(zhì)過氧化物的生成，提高了過氧化氫酶、超氧化物歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶的活性，抑制了細胞凋亡蛋白酶caspase-3和缺氧誘導因子-1α的表達。體外實驗結(jié)果顯示虎眼萬年青總皂苷顯著減少了對乙酰氨基酚代謝過程中關(guān)鍵酶細胞色素P4502E1的活性及環(huán)氧化酶2的表達。

肝硬化是臨床常見的慢性進行性肝病，由一種或多種病因長期或反復作用形成的彌漫性肝損害。肝纖維化是肝硬化的前期，是慢性肝病發(fā)展為肝硬變的必經(jīng)階段[12]。在探索虎眼萬年青總皂苷誘導活化肝星狀細胞（HSC）凋亡機制實驗中[13]，作者采用蛋白免疫印跡測定虎眼萬年青總皂苷對激活的t-HSC細胞總蛋白MMP-13、TIMP-1以及核蛋白中NF-kB p65表達的影響，實驗結(jié)果顯示，對于體外培養(yǎng)的t-HSC細胞，虎眼萬年青皂苷通過激活NF-kB p65誘導MMP-13蛋白表達，并抑制TIMP-1蛋白表達，從而誘導活化肝星狀細胞凋亡。

1.3免疫調(diào)節(jié)作用 在小鼠免疫調(diào)節(jié)實驗研究中[14-16]，研究人員通過機體非特異性免疫和體液免疫功能的實驗，證明了虎眼萬年青多糖能夠有效增強小鼠非特異性免疫及體液免疫功能，篩選出其有效組分為虎眼萬年青中性多糖活性組分S3，細胞和分子水平實驗表明，S3能夠增強小鼠T、B淋巴細胞的轉(zhuǎn)化、提高NK細胞的細胞毒活性、促進小鼠脾細胞中細胞因子IL-2的分泌，有利于增強細胞毒T細胞和NK細胞的殺瘤效應。研究人員隨后利用流式細胞術(shù)檢測S3對T淋巴細胞亞群的影響，并采用RT-PCR方法檢測IL-2mRNA的表達水平，進一步證實了S3對輔助性T細胞（Th）的增強作用及對抑制性T細胞（Ts）的抑制作用，并能夠促進IL-2的mRNA表達量，該實驗進一步從基因水平證實了S3有提高小鼠免疫功能的作用。

1.4鎮(zhèn)痛抗炎作用 在虎眼萬年青乙醇提取物鎮(zhèn)痛、抗炎的實驗研究中[17，18]，對于熱刺激（熱板法）所致小鼠疼痛以及醋酸所致小鼠疼痛（扭體法），虎眼萬年青能顯著提高小鼠痛閾值，對熱板刺激所致小鼠疼痛和醋酸刺激所致的疼痛反應均有一定的抑制作用。采用二甲苯致小鼠耳廓腫脹法和醋酸致小鼠毛細血管通透性增高法觀察其抗炎作用，結(jié)果顯示虎眼萬年青能顯著抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，抑制醋酸誘導的小鼠腹腔毛細血管通透性增加，說明虎眼萬年青能夠抑制毛細血管擴張、通透性增加、滲出性水腫為主的炎癥早期反應。

1.5抗氧化作用 在虎眼萬年青乙醇提取物抗氧化活性實驗中[19]，采用鄰二氮菲-Fe2+氧化法、鄰苯三酚自氧化法和DPPH法分別測定其清除羥基自由基的能力、清除超氧陰離子的能力和DPPH自由基的能力。結(jié)果表明，虎眼萬年青70%乙醇粗提取物總皂苷的含量最高，抗氧化活性也最強，且70%虎眼萬年青乙醇提取物的正丁醇相清除OH、O2和DPPH三種自由基的綜合能力最強。而在體內(nèi)抗氧化活性實驗中，通過測定小鼠血清和肝組織中的超氧化歧化酶（SOD）和丙二醛（MDA）數(shù)值的變化來研究虎眼萬年青乙醇提取物的抗氧化活性，結(jié)果顯示，70%虎眼萬年青乙醇提取物正丁醇相可以有效的提高體內(nèi)SOD數(shù)量，降低MDA數(shù)量，抗氧化效果顯著。

虎眼萬年青粗多糖亦體現(xiàn)出一定的抗氧化活性[20]，實驗顯示其對OH、O2和DPPH都有一定的清除活性，且呈現(xiàn)一定的量效關(guān)系。當粗多糖濃度達到7mg/mL時，對DPPH、O2和OH的清除率分別達到73%、60%和79%。

2 安全性研究

2.1細胞毒性作用研究 在細胞毒性實驗中，研究人員對比了OSW-1和幾種臨床應用的抗癌藥物對正常人體肺細胞的IC50值[2]，結(jié)果顯示，OSW-1的IC50值為1.5μg/mL，而絲裂霉素（MMC），阿霉素（ADM），順鉑（CDDP），喜樹堿（CPT）和紫杉醇（TAX）分別為2μg/ml，2μg/ml，10μg/ml，2μg/ml，2μg/ml，說明OSW-1對正常細胞毒性較小，且遠遠小于其對腫瘤細胞的毒性作用（OSW-1對人肺癌細胞（Lu-65）的IC50值為0.00020μg/mL，對人白血病細胞（CCRF-CEM）IC50值為0.00016μg/mL）。另有研究人員測試OSW-1對人體血液中正常淋巴細胞，卵巢纖維原細胞，大腦正常星形膠細胞的IC50值[4]，結(jié)果顯示，OSW-1對這三種正常細胞的IC50值分別為1.73nM，0.83nM，7.13nM，遠高于其對腫瘤細胞的IC50值。

2.2致突變作用研究 有學者依據(jù)GB15193-2003《食品安全性毒理學評價程序和檢驗方法》對虎眼萬年青乙醇提取物進行了小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗、小鼠精子畸形試驗、鼠傷寒沙門氏菌/哺乳動物微粒體酶試驗（Ames試驗）對其可能引起的致突變性進行研究[21]。微核試驗結(jié)果顯示在2.5～10g/kg的給藥劑量范圍內(nèi)，各劑量組微核率與陰性對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），且各組動物PCE/RBC值差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明小鼠骨髓嗜多染紅細胞微核試驗結(jié)果為陰性。精子畸形試驗結(jié)果顯示在2.5g～10g/kg的給藥劑量范圍內(nèi)，各劑量組精子畸形率與陰性對照組比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），說明小鼠精子畸形試驗結(jié)果為陰性。Ames試驗結(jié)果顯示在虎眼萬年青0.313、0.625、1.250、2.500、5.000mg/皿5個劑量組中，在加S9和不加S9活化的情況下，對鼠傷寒沙門氏菌突變型菌株TA97、TA98、TA100、TA102菌株的回變菌落數(shù)與陰性對照組比較均無明顯變化，說明虎眼萬年青在<5.000mg/皿的劑量內(nèi)不能使鼠傷寒沙門氏組氨酸缺營養(yǎng)陷型發(fā)生移碼突變或堿基置換突變。該三項試驗未見至突變作用。

2.3致畸作用研究 在虎眼萬年青乙醇提取物的致畸實驗中[22]，研究人員將虎眼萬年青乙醇提取物以成人攝入量（0.033g/kg體重）的125、100、75倍設(shè)置高中低三個劑量組，依次為4.1、3.3和2.5g/kg體重，實驗結(jié)果顯示，各劑量組的孕鼠增重、窩重、著床數(shù)、活胎數(shù)、吸收胎數(shù)、遲死胎數(shù)、死胎數(shù)、骨骼檢查、胎鼠囟門、矢狀縫寬度、胎鼠身長、體重、胎鼠內(nèi)臟、外觀畸形比較等項指標與陰性對照組比較，均為差異無統(tǒng)計學意義，這表明受試物劑量在2.5～4.1g/kg體重范圍內(nèi)未見母體毒性、胚胎毒性和致畸性。

2.4急性毒性作用研究 為了觀察虎眼萬年青總皂苷對Wistar幼鼠的急性毒性作用[23]，研究人員在預實驗中，按序貫法找出0%估計致死量（Dn）和100%估計致死量（Dm），結(jié)果顯示Dm為5g/kg，Dn為1.5g/kg。隨后，按Bliss法設(shè)計，將虎眼萬年青組分為5.0、4.0、3.2、2.56、2.05這5個劑量組，一次性灌胃后，逐日觀察小鼠7d，并記錄動物毒性反應、死亡數(shù)，計算半數(shù)致死量（LD50）和平均致死量95%平均可信限（SLD50），按寇氏改良法計算LD50為3.2g/kg；SLD50約為（3.2±0.196）g/kg。且最大灌胃劑量組（5g/kg）死亡率為80%。由此可見虎眼萬年青總皂苷在大劑量灌服情況下仍具有較大毒性和致死率，說明其在應用中仍須嚴格把握一次性劑量。

3 結(jié)語與展望

虎眼萬年青在我國各地廣泛栽培，資源豐富，現(xiàn)代藥理學研究表明其在抗腫瘤，免疫調(diào)節(jié)，鎮(zhèn)痛抗炎，防治肝損傷，抗氧化等方面的應用非常有前景。在藥理作用機制方面，深入探討其作用機制，作用靶點，將進一步促進其藥物開發(fā)的研究。另外，在取得大量動物實驗數(shù)據(jù)的基礎(chǔ)上，也需要廣泛并謹慎的開展臨床試驗，積累臨床實驗數(shù)據(jù)，從而推進其新藥研發(fā)進程。

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編輯/哈濤