梔子藥材的薄層鑒別方法研究*

楊立國，張英杰，謝佳穎，夏偉軍，張海元，梅雙喜

(云南省藥物研究所，云南白藥集團創新研發中心，云南省中藥和民族藥新藥創制企業重點實驗室，云南昆明 650111)

梔子藥材的薄層鑒別方法研究*

楊立國，張英杰，謝佳穎，夏偉軍，張海元，梅雙喜△

(云南省藥物研究所，云南白藥集團創新研發中心，云南省中藥和民族藥新藥創制企業重點實驗室，云南昆明 650111)

目的 建立梔子藥材的薄層鑒別方法。方法 以梔子苷、異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ為對照品，對梔子藥材進行薄層鑒別，并考察了不同展開系統、不同顯色方法、不同廠家薄層板、不同展距、不同點樣量、不同預飽和時間、不同溫度和不同濕度對梔子藥材薄層色譜的影響。結果 以梔子苷、異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ為對照品，三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)為展開系統，所得薄層色譜斑點清晰，專屬性強。結論 該鑒別方法簡單可行，重復性好，可作為梔子藥材的薄層鑒別方法。

梔子；梔子苷；異梔子苷；京尼平龍膽雙糖苷；西紅花苷-Ⅰ；薄層鑒別

梔子(Gardenia jasminoides Ellis)為梔子屬植物梔子的干燥成熟果實，是我國衛生部頒布的第一批藥食兩用資源，始載于《神農本草經》，列為中品，中國歷版藥典和其它本草均有記載。其性苦、寒，歸心、肺、三焦經，具有泄火除煩，清熱利尿，涼血解毒之功效，臨床廣泛用于熱病心煩、黃疸尿赤、血淋澀痛、血熱吐衄、目赤腫痛、火毒瘡瘍等證[1]。

梔子是云南省藥物研究所研制的“金品”痛舒膠囊、腫痛氣霧劑等產品的重要原料之一[2]，為了有效的控制其質量，我們對其薄層鑒別方法進行了研究。據相關文獻[3]報道，梔子中含有多種化學成分，包括環烯醚萜苷類、西紅花苷類、黃酮類、奎寧酸類等。其中，環烯醚萜苷類和西紅花苷類成分是梔子中兩類主要有效成分[4]。而在上述兩類有效成分中，含量較高的四個成分為梔子苷、異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ[5]。但當前多數研究[6-9]主要通過梔子苷對梔子藥材進行鑒別，忽略了其余幾個有效成分(異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ)，無法全面而準確的評價梔子藥材的質量。本研究以梔子苷、異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ為對照品，對梔子藥材的薄層鑒別方法進行了完善。

1 儀器與材料

SK8200HP超聲波清洗器(上海科導超聲儀器有限公司)；ZF-90多功能暗箱式紫外投射儀(上海寶山顧村電光儀器廠)；瑞士Mettler Toledo AG285電子天平；薄層色譜展開缸(上海信誼儀器廠)；默克薄層層析硅膠G板(默克化工技術上海有限公司)；青島海洋高效G板和普通G板(青島海洋化工廠分廠)；梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和梔子對照藥材購自中國食品藥品檢定研究院；異梔子苷和京尼平龍膽雙糖苷購自成都普菲德生物技術有限公司；梔子藥材購自江西撫州，經云南省藥物研究所邱斌高級工程師鑒定，標本保存于云南省藥物研究所標本室；試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 薄層色譜條件的考察

2.1.1 對照藥材及藥材供試品溶液的制備 取對照藥材或梔子藥材粉末1 g，加甲醇10 mL，超聲處理20 min，放冷至室溫，過濾，取濾液作為供試品溶液。

2.1.2 混合對照品溶液的制備 分別取梔子苷、異梔子苷、西紅花苷-Ⅰ和京尼平龍膽雙糖苷各0.5 mg，加甲醇2 mL溶解，作為混合對照品溶液。

2.1.3 展開系統的考察 分別吸取混標溶液、對照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點于同一薄層板上，以(1)乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水(5：5：1：1)，(2)三氯甲烷-甲醇-冰醋酸(3：1：0.05)，(3)三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)三種不同展開系統展開，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105℃加熱至斑點清晰，可見光下檢視，結果見圖1。綜合比較圖中斑點數目、分離度等情況，可確定系統(3)三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)為最佳展開系統。

1-混標；2-對照藥材；3-梔子藥材；A-系統(1)；B-系統(2)；C-系統(3)

圖1 展開系統的考察

2.1.4 檢視方法的選擇 分別吸取混標溶液、對照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點于同一薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展開，取出，晾干，經日光、10%硫酸-乙醇及365nm紫外燈下三種檢視方式檢視，結果見圖2。綜合比較圖中斑點數目及清晰情況，可確定(B)10%硫酸-乙醇顯色為最佳檢視方式。

1-混標；2-對照藥材；3-梔子藥材；A-日光下檢視；B-10%硫酸乙醇顯色；C-10%硫酸乙醇顯色后，365nm下檢視

2.2 方法學驗證

2.2.1 重復性考察 按2.1.1供試品溶液制備方法制備供試品溶液6份，分別吸取混標溶液和上述6份供試品溶液2 μL，點于同一薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展開，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點清晰，可見光下檢視，結果見圖3。結果表明，供試品溶液制備方法的重復性良好。

1-混標；2、3、4、5、6、7-梔子藥材

2.2.2 耐用性考察

2.2.2.1 不同廠家薄層板的考察 分別吸取混標溶液、對照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點于三種不同薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展開，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點清晰，可見光下檢視，結果見圖4。結果表明，默克硅膠G板的分離效果優于青島海洋硅膠G板和青島海洋高效硅膠G板。

1-混標；2-對照藥材；3-梔子藥材；A-默克硅膠G板；B-青島海洋G板；C-青島高效G板

2.2.2.2 不同展距的考察 分別吸取混標溶液、對照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點于不同薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展開，展距分別為8 cm、10 cm、12 cm，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點清晰，可見光下檢視，結果見圖5。結果表明，展距為8 cm時，分離效果不佳；展距為12 cm時，斑點拖尾較嚴重，故選擇展距為10 cm。

1-混標；2-對照藥材；3、4-梔子藥材；A-展距8 cm；B-展距10 cm；C-展距12 cm

2.2.2.3 不同點樣量的考察 分別吸取梔子供試品溶液1、2、4 μL，混合標準品溶液2 μL，點于同一薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)展開，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點清晰，可見光下檢視，結果見圖6。結果表明，點樣量為2 μL時斑點較為清晰，故確定供試品的點樣量為2 μL。

1-混標；2、3-梔子藥材1μl；4、5-梔子藥材2μl；6、7-梔子藥材4μl

2.2.2.4 不同預飽和時間的考察 分別吸取混標溶液、對照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點于三塊不同薄層板上，分別以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)為展開系統，預飽和時間分別為0 min、15 min和30 min，展開，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點清晰，可見光下檢視，結果見圖7。結果表明，飽和15 min時，斑點較為清晰，且分離效果較好，故選擇預飽和15 min。

1-混標；2-對照藥材；3、4-梔子藥材；A-預飽和0min；B-預飽和15min；C-預飽和30min

2.2.2.5 不同展開溫度的考察 分別吸取混標溶液、對照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點于三塊不同薄層板上，分別以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)為展開系統，在4°C、21°C、32°C的條件下展開，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點清晰，可見光下檢視，結果見圖8。結果表明，展開溫度對展開效果影響不大，故選擇室溫下展開。

1-混標；2-對照藥材；3-梔子藥材；A-4°C；B-21°C；C-32°C

2.2.2.6 不同展開濕度的考察 分別吸取混標溶液、對照藥材溶液和供試品溶液2 μL，點于三塊不同薄層板上，分別以三氯甲烷-甲醇-冰醋酸-水(5：2：0.5：0.5)為展開系統，在相對濕度32%、58%、72%的條件下展開，取出，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點清晰，可見光下檢視，結果見圖9。結果表明，相對濕度對分離效果及斑點的清晰程度影響不大。

1-混標；2-對照藥材；3-梔子藥材；A-相對濕度32%；B-相對濕度58%；C-相對濕度72%

2.3 十批梔子藥材的薄層鑒別 按照2.1和2.2確定的色譜條件，將對照藥材及10批供試品藥材點于同一薄層板上，展開，晾干，10%硫酸-乙醇顯色，105°C加熱至斑點清晰，可見光下檢視，結果見圖10。結果表明，所建立的方法分離度高，重現性好，可用于梔子藥材的鑒別。

1-對照藥材；2-11十批梔子藥材

3 討論

3.1 梔子藥材是云南省藥物研究所研制的“金品”痛舒膠囊、腫痛氣霧劑等產品的重要原料之一，本研究所建立的梔子藥材的薄層鑒別方法，可用于梔子藥材的質量控制，為進一步實現“金品”痛舒膠囊、腫痛氣霧劑等產品質量的均一、穩定奠定了方法基礎。

3.2 先前相關文獻主要通過梔子苷對梔子藥材進行鑒別，忽略了其余幾個有效成分(異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ)，無法全面而準確的評價梔子藥材的質量。本研究以梔子苷、異梔子苷、京尼平龍膽雙糖苷和西紅花苷-Ⅰ為對照品，對梔子藥材的薄層鑒別方法進行了完善，為實現梔子藥材質量的有效控制奠定了基礎。

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[6]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版(一部)[S].北京：中國醫藥科技出版社，2010，231-232.

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[9]楊曄瓊，趙俊蘋.蘇格木樂-13的質量標準中梔子薄層色譜鑒別研究[J].北方藥學，2010，7(3)：16.

云南省科技領軍人才培養計劃項目(NO：2014HA001)。

楊立國(1985-)，男，河北，工程師，主要從事天然藥物化學方面的研究。

△通信作者：梅雙喜，E-mail：13211783158@126.com

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