慢病毒載體介導(dǎo)CGRP基因體外轉(zhuǎn)染及對MSC生物學(xué)特性的影響

陳攀科，石 蓓，許官學(xué)，劉志江，龍仙萍，張 巍，馬 帥

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，貴州遵義 563000)

慢病毒載體介導(dǎo)CGRP基因體外轉(zhuǎn)染及對MSC生物學(xué)特性的影響

陳攀科，石 蓓△，許官學(xué)，劉志江，龍仙萍，張 巍，馬 帥

(遵義醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科，貴州遵義 563000)

目的 探討慢病毒載體介導(dǎo)降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)基因體外轉(zhuǎn)染間充質(zhì)干細胞(MSC)及其對MSC生物學(xué)特性的影響。方法 大鼠MSC進行分離、培養(yǎng)及鑒定。CGRP重組慢病毒轉(zhuǎn)染MSC后，采用熒光顯微鏡和流式細胞技術(shù)測定其轉(zhuǎn)染率。實時定量PCR、免疫熒光細胞化學(xué)及ELISA法檢測MSC中CGRP的表達。慢病毒轉(zhuǎn)染后通過MTT、β-半乳糖苷酶染色和誘導(dǎo)分化評價MSC的增殖、衰老及分化能力。結(jié)果 慢病毒載體介導(dǎo)CGRP基因轉(zhuǎn)染MSC后48 h可穩(wěn)定表達，MOI=30時，轉(zhuǎn)染率達80%以上。與MSC組和空載病毒轉(zhuǎn)染(MSC-EGFP組)比較，CGRP修飾的MSC(MSC-CGRP組)中CGRP的mRNA和蛋白表達水平增高(均P<0.01)。MTT、β-半乳糖苷酶染色和誘導(dǎo)分化結(jié)果顯示，病毒轉(zhuǎn)染后對MSC增殖、衰老及向內(nèi)皮分化基本沒有影響。結(jié)論 MSC是一種理想的基因載體細胞，可作為CGRP基因轉(zhuǎn)染的靶細胞用于基因治療，為后續(xù)體內(nèi)、體外實驗奠定基礎(chǔ)。

降鈣素基因相關(guān)肽；轉(zhuǎn)染；間充質(zhì)干細胞；生物學(xué)特性

本研究小組前期的研究顯示,骨髓間充質(zhì)干細胞(MSC)移植能在一定程度上促進損傷動脈內(nèi)皮的修復(fù)，但其對血管平滑肌細胞(VSMC)的影響較小[1-2]。降鈣素基因相關(guān)肽(CGRP)具有抑制VSMC增殖的作用，但CGRP在外周血的半衰期很短，需要通過合適的載體和靶細胞將其帶入體內(nèi)來持續(xù)發(fā)揮作用[3]。因此，本研究旨在研討慢病毒載體介導(dǎo)CGRP基因體外轉(zhuǎn)染MSC后，CGRP的表達及對MSC生物學(xué)特性的影響，為進一步在細胞和動物模型中的研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與材料 雄性SD大鼠購自重慶第三軍醫(yī)大學(xué)動物實驗中心。……