血清高爾基蛋白體73與異常凝血酶原聯合檢測在肝癌診斷中的應用

王文鼎，繆亞梅，金 梅，王正兵

(1.泰州市溱潼人民醫院檢驗科，江蘇 泰州 225508； 2.泰州市人民醫院檢驗科，江蘇 泰州 225300； 3.揚州大學臨床醫學院普外科，江蘇 揚州 225001)

血清高爾基蛋白體73與異常凝血酶原聯合檢測在肝癌診斷中的應用

王文鼎1，繆亞梅1，金 梅2，王正兵3

(1.泰州市溱潼人民醫院檢驗科，江蘇 泰州 225508； 2.泰州市人民醫院檢驗科，江蘇 泰州 225300； 3.揚州大學臨床醫學院普外科，江蘇 揚州 225001)

目的 探討高爾基體蛋白73(Golgi protein 73，GP73)及異常凝血酶原(des-gamm-carboxy-prothrombin，DCP)用于肝細胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)診斷的臨床價值。方法 采用酶聯免疫吸附法分別檢測56例HCC患者、34例肝硬化患者以及30例健康體檢者血清GP73以及DCP水平。結果 HCC組患者血清GP73含量為(201.9±92.9)μg·L-1，明顯高于肝硬化組的(76.4±25.5)μg·L-1以及對照組的(29.9±15.0)μg·L-1(均P<0.01)；HCC組患者血清DCP含量為(115.1±36.1)μg·L-1，明顯高于肝硬化組的(45.6±16.4)μg·L-1以及對照組的(23.2±11.4)μg·L-1(均P<0.01)。Spearman相關分析發現，HCC患者GP73與DCP含量之間具有一定相關性，r=0.573，P<0.01。血清GP73診斷HCC最佳臨界值為128.5 μg·L-1，其診斷靈敏度為80.4%，特異性為87.5%，曲線下面積為0.925 8；血清DCP診斷HCC最佳臨界值為73.2 μg·L-1，其診斷靈敏度為76.8%，特異性為81.3%，曲線下面積為0.885 3。與血清GP73及DCP單項檢測相比，二者聯合檢測能明顯提高HCC的診斷靈敏度、特異性、陽性預測值、陰性預測值以及總有效率均明顯高于(P<0.05)；而二者單項檢測各指標之間比較差異均無統計學意義(P>0.05)。 結論 HCC患者血清GP73及DCP含量顯著增加，并且2個指標的聯合檢測對HCC的臨床診療具有重要價值。

肝細胞肝癌； 肝硬化； 高爾基體蛋白73； 異常凝血酶原

肝細胞肝癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是一種臨床常見的惡性程度高且預后差的惡性腫瘤，多數HCC患者確診時已經處于中晚期，手術切除后復發率高、易轉移。因此早期發現、診斷及治療對改善患者存活率和生活質量顯得尤為重要。目前臨床上以血清甲胎蛋白(AFP)檢測作為HCC診斷的重要指標，但仍有30%～50%的HCC患者AFP為陰性，其敏感性與特異性仍差強人意[1-2]。因此，尋找更特異、敏感的血清腫瘤標志物對于HCC診斷顯得尤為必要。高爾基體蛋白73(Golgi protein 73,GP73)以及異常凝血酶原(des-gamm-carboxy-prothrombin，DCP)是近年來新發現的有望成為HCC早期診斷以及判斷預后的血清學診斷標志物[3-4]。本研究旨在聯合檢測HCC患者血清中GP73以及DCP水平，探討二者在HCC臨床診斷中潛在的應用價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象

研究對象為泰州市人民醫院2011年1月至2013年12月住院患者，其中：HCC組56例，男49例，女7例，平均年齡(53.5±10.5)歲，所有病例均經病理檢查明確診斷；肝硬化組34例，男26例，女8例，平均年齡(49.6±11.4)歲，診斷符合2000年全國(西安)會議修訂的《病毒性肝炎防治方案》[5]；另選擇同期本院健康體檢者(對照組)30例，男24例，女6例，平均年齡(48.1±7.9)歲，經檢查均排除肝臟良、惡性疾患。3組性別、年齡比較差異無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。

1.2 檢測方法

使用促凝管采集受試者清晨空腹肘靜脈血3 mL，離心分離血清，-70 ℃保存待檢。采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法定量檢測各組GP73以及DCP水平，試劑盒由美國R&D公司提供，嚴格按操作說明書進行，每次檢測均重新建立定標曲線。

1.3 統計學方法

2 結果

2.1 3組患者血清GP73和DCP檢測結果比較

HCC組患者血清GP73含量為(201.9±92.9)μg·L-1，明顯高于肝硬化組的(76.4±25.5)μg·L-1以及對照組的(29.9±15.0)μg·L-1(均P<0.01)；肝硬化組患者血清GP73也明顯高于對照組(P<0.01)，見圖1A。HCC組患者血清DCP含量為(115.1±36.1)μg·L-1，明顯高于肝硬化組的(45.6±16.4)μg·L-1以及對照組的(23.2±11.4)μg·L-1(均P<0.01)；肝硬化組患者血清DCP也明顯高于對照組(P<0.01)，見圖1B。Spearman相關分析發現，HCC患者GP73與DCP含量之間具有一定相關性，r=0.573，P<0.01，提示二者相關性較好，均可作為HCC血清學診斷標志物。

A：GP73；B：DCP。

2.2 ROC曲線分析血清GP73和DCP對HCC的診斷價值

通過ROC曲線確定臨界值，以診斷HCC的靈敏度與特異性之和的最高值進行界定，血清GP73診斷HCC最佳臨界值為128.5 μg·L-1，其診斷靈敏度為80.4%，特異性為87.5%，曲線下面積為0.925 8，95%置信區間為0.876 1～0.975 6，見圖2A。血清DCP診斷HCC最佳臨界值為73.2 μg·L-1，其診斷靈敏度為76.8%，特異性為81.3%，曲線下面積為0.885 3，95%置信區間為0.824 0～0.946 6，見圖2B。

100%-特異性% 100%-特異性%

2.3 GP73與DCP聯合檢測對HCC的診斷價值

與血清GP73及DCP單項檢測相比，二者聯合檢測能明顯提高HCC的診斷靈敏度、特異性、陽性預測值、陰性預測值以及總有效率(均P<0.05)；而血清GP73單項檢測與血清DCP單項檢測各指標之間比較差異均無統計學意義(均P>0.05)，見表1。提示GP73與DCP聯合檢測能明顯提高HCC的診斷價值。

表1 血清GP73與DCP聯合檢測對HCC的診斷價值 %(n/n)

*P<0.05與單項GP73及DCP檢測比較。

3 討論

由于HCC早期缺乏典型的臨床癥狀，多數患者發現時已到晚期，因此，HCC的早期診斷對患者的預后起著關鍵作用；而AFP在臨床應用有局限性，尋找新的、敏感度和特異度高的HCC血清學診斷標志物已成為各國學者研究的熱點[6]。

GP73是一種存在于高爾基體的跨膜蛋白，因其相對分子質量為73 000而得名，其編碼基因位于9號染色體，全長3 042 bp，在正常的人體肝組織中，主要在膽管上皮細胞表達，通過膜生成結構域錨定在順面高爾基體上[7]。有研究[8-9]發現，在HCC患者中GP73表達異常的活躍，其可能機制是：在疾病狀態下，GP73從高爾基體順面膜囊上游離并釋放到達細胞表面或細胞外，從而導致HCC患者血清GP73含量異常增加。

DCP又稱為維生素K缺乏或拮抗劑Ⅱ誘導蛋白(protein induced by vitamin K absence or antagonist-Ⅱ，PIVKA-Ⅱ)。肝臟合成的凝血酶原是無活性的凝血酶前體，通過維生素K作為輔助因子羧化后轉為活化的凝血酶形式。有研究[10-12]表明，HCC患者血清DCP含量異常增高，其可能原因是：肝癌細胞異常攝取維生素K致使局部維生素K缺乏；肝癌細胞過度產生凝血酶原前體，導致不完成羧化概率增加；肝癌細胞內γ-谷氨酸羧化酶活性降低；肝癌細胞內氧化還原循環異常致維生素K利用降低等，從而導致HCC患者DCP合成增加。

本研究顯示，HCC組患者血清GP73以及DCP含量均明顯高于肝硬化組以及對照組，與Zhou等[6]以及Matsubara等[10]的研究結果相類似，提示血清GP73以及DCP均可作為臨床HCC血清學診斷潛在標志物。本研究結果顯示，HCC患者GP73與DCP含量之間具有一定相關性(r=0.573，P<0.01)，提示在HCC患者中，血清GP73與DCP含量變化的趨勢一致，二者聯合檢測可互為補充，以降低漏診率。二者ROC曲線分析顯示，血清GP73診斷HCC靈敏度(80.4%)、特異性(87.5%)以及曲線下面積(0.925 8)均高于血清DCP診斷HCC相應的靈敏度(76.8%)、特異性(81.3%)以及曲線下面積(0.885 3)，但限于本研究所收集的病例數較少，二者各自的臨床診斷價值需進一步深入研究。

另外，本研究初步探討了GP73與DCP聯合檢測對HCC的診斷價值，血清GP73及DCP聯合檢測對HCC診斷靈敏度、特異性、陽性預測值、陰性預測值以及總有效率均明顯高于血清GP73及DCP單項檢測；而二者單項檢測各指標之間比較差異均無統計學意義，提示GP73與DCP聯合檢測能有效地提高HCC診斷的靈敏度，防止漏診以及誤診，有利于HCC早期診斷，從而提高HCC診斷效率，對HCC的鑒別診斷也有重要的臨床意義。對GP73與DCP聯合AFP、AFP-L3等其他HCC診斷標志物的臨床診斷價值，仍需進一步探討。

綜上所述， GP73與DCP作為新的血清學標志物可用于HCC診斷，且二者聯合檢測對HCC的早期診斷具有重要的臨床價值。但仍需擴大病例，對GP73和DCP在HCC鑒別診斷、病情評估、預后判斷、提示復發轉移以及抗腫瘤治療等方面發揮的作用進一步深入探討。

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[2] Bertino G,Ardiri A,Malaguarnera M A,et al.Hepatocellualar carcinoma serum markers[J].Semin Oncol,2012,39(4):410-433.

[3] Wang Y,Yang H,Xu H,et al.Golgi protein 73,not Glypican-3,May be a tumor marker complementary to alpha-fetoprotein for hepatocellular carcinoma diagnosis[J].J Gastroenterol Hepatol,2014,29(3):597-602.[4] Tanaka T,Taniguchi T,Sannomiya K,et al.Novel des-γ-carboxy prothrombin in serum for the diagnosis of hepatocellular carcinoma[J].J Gastroenterol Hepatol,2013,28(8):1348-1355.

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[6] Zhou L,Liu J,Luo F.Serum tumor markers for detection of hepatocellular carcinoma[J].World J Gastroenterol,2006,12(8):1175-1181.[7] Ba M C,Long H,Tang Y Q,et al.GP73 expression and its significance in the diagnosis of hepatocellular carcinoma:a review[J].Int J Clin Exp Pathol,2012,5(9):874-881.

[8] Zhou Y,Yin X,Ying J,et al.Golgi protein 73 versus alpha-fetoprotein as a biomarker for hepatocellular carcinoma:a diagnostic meta-analysis[J].BMC Cancer,2012,12:17.

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(責任編輯：鐘榮梅)

Application of Combined Detection of Serum Golgi Protein 73 and Des-Gamma-Carboxy-Prothrombin in Diagnosis of Hepatocellular Carcinoma

WANG Wen-ding1,MIAO Ya-mei1,JIN Mei2,WANG Zheng-bing3

(1.DepartmentofLaboratoryMedicine,QintongPeople’sHospitalofTaizhou,Taizhou225508,China; 2.DepartmentofLaboratoryMedicine,TaizhouPeople’sHospital,Taizhou225300,China； 3.DepartmentofGeneralSurgery，ClinicalMedicalCollegeofYangzhouUniversity,Yangzhou225001,China)

Objective To investigate the clinical value of combined detection of serum Golgi protein 73 (GP73) and des-gamma-carboxy-prothrombin (DCP) in the diagnosis of hepatocellular carcinoma (HCC).Methods Serum levels of GP73 and DCP were determined by ELISA in 56 patients with HCC (HCC group),34 patients with liver cirrhosis (cirrhosis group) and 30 healthy subjects (control group).Results The serum levels of GP73 and DCP were,respectively,(201.9±92.9)μg·L-1and (115.1±36.1)μg·L-1in HCC group,(76.4±25.5)μg·L-1and (45.6±16.4)μg·L-1in cirrhosis group,and (29.9±15.0)μg·L-1and (23.2±11.4)μg·L-1in control group.Compared with cirrhosis group or control group,serum GP73 and DCP levels significantly increased in HCC group(P<0.01).Spearman’s correlation analysis showed a correlation between GP73 and DCP levels in patients with HCC (r=0.573,P<0.01).The cut-off value,sensitivity,specificity and area under curve (AUC) were,respectively,128.5 μg·L-1,80.4%,87.5% and 0.925 8 for serum GP73 detection,and 73.2 μg·L-1,76.8%,81.3% and 0.885 3 for serum DCP detection.Compared with single detection,combined GP73 and DCP detection significantly increased the sensitivity,specificity,negative predictive value,positive predictive value and total efficiency for the diagnosis of HCC(P<0.05).However,no significant differences in these parameters were found between single GP73 detection and single DCP detection(P>0.05).Conclusion The serum levels of GP73 and DCP obviously increase in patients with HCC.The combined detection of these two markers has important value in the clinical diagnosis and treatment of HCC.

hepatocellular carcinoma; liver cirrhosis; Golgi protein 73; des-gamma-carboxy-prothrombin

2014-09-03

王文鼎(1971—)，男，學士，副主任技師，主要從事消化道腫瘤基礎與臨床的研究。

王正兵，副教授， E-mail:wzhb403@163.com。

R735.7

A

1009-8194(2015)02-0005-04

10.13764/j.cnki.lcsy.2015.02.002