公共場所公共用品的微生物檢測分析

祝艷云，曹萍

吉林省敦化市疾病預防控制中心，吉林敦化 133700

公共用品的微生物檢驗對公共場所的衛生監督和傳染病的預防至關重要，能夠提供安全可靠的科學依據，有利于各種規章和制度的制訂和實施[1]。

1資料與方法

1.1一般資料

2015年對該市4類公共場所：洗浴場所、美容院、旅店、美發理發共435戶、946份公共衛生用品進行了微生物檢測。

1.1.1 采樣種類及檢測項目 毛巾、浴袍、床單（細菌總數、大腸菌群、、金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌）、拖鞋（真菌和酵母菌）。

1.2采樣方法

1.2.1一般要求 隨機抽取清洗消毒后準備使用的公共用品用具，無菌操作，使用滅菌干燥棉拭子，于10 mL滅菌生理鹽水內浸潤（吸取約1 mL溶液）后，在用品用具的適當部位來回均勻涂抹進行樣品采集，再用滅菌剪刀剪去棉簽手接觸的部分，將棉拭子放入剩余的9 mL生理鹽水內，4 h內送檢。

1.2.2采樣部位及采樣面積 ①在毛巾、枕巾、浴巾對折后兩面的中央5 cm×5 cm面積范圍內分別均勻涂抹5次，每25 cm2采樣面積為1份樣品，每件用品共采集2份樣品。

②在床單、被單的上下兩部即與頸部、腳部接觸部位5 cm×5 cm（25）面積范圍內分別均勻涂抹5次，每25 cm2采樣面積為1份樣品，每件用品共采集2份樣品。

③睡衣、睡褲隨機選擇 2個 5 cm×5 cm（25 cm2）面積范圍內均勻涂抹5次，每25 cm2采樣面積為1份樣品，每件用品共采集2份樣品。

④在每只鞋的鞋內與腳趾接觸處5 cm×5 cm面積范圍內均勻涂抹5次，1雙鞋為1份樣品，采樣總面積為50 cm2。

1.2.3試驗器材及培養基 高壓蒸汽滅菌器、干熱滅菌箱、恒溫培養箱：（36±1）℃、無菌（試管、平皿、刻度吸管、剪刀）等。生理鹽水、營養瓊脂、乳糖膽鹽發酵培養液、伊紅美蘭瓊脂、乳糖發酵管、胰酪胨大豆肉湯、氯化鈉肉湯（75 g/L）、BairdParker平板、血瓊脂培養基、孟加拉紅培養基、沙氏瓊脂培養基、葡萄糖肉浸液肉湯、匹克氏肉湯。

1.2.4 檢驗步驟 （1）樣品稀釋：將放有采樣后棉拭子的試管充分震蕩，此液為1∶10的樣品勻液。用1 mL無菌吸管或微量移液器吸取1∶10樣品勻液1 mL，沿管壁緩慢注入盛有9 mL生理鹽水稀釋液的無菌試管中，震搖試管或換用1支無菌吸管反復吹打使其混勻，制成1:100的樣品勻液。按同法制備10倍系列稀釋樣品勻液，每遞增稀釋1次，換用1次1 mL無菌吸管或吸頭。

（2）細菌總數的檢驗∶根據對樣品污染狀況的估計，選擇1～2個適宜稀釋度的樣品勻液，在進行10倍遞增稀釋時，每個稀釋度分別吸取1 mL樣品勻液于2個無菌平皿內，同時分別取1 mL稀釋液加入兩個無菌平皿作空白對照。將15～20 mL、冷卻置45～50℃的營養瓊脂傾注平皿，混合均勻，瓊脂凝固后翻轉平皿，置（36±1）℃培養箱培養（48±2） h。

（3）菌落計數：選取菌落數在 30～300 CFU 之間、無蔓延菌落生長的平板計數菌落總數；若所有稀釋度的菌落數均大于300 CFU，按稀釋度最高的平板進行計數；若所有稀釋度的菌落總數均小于30 CFU，按稀釋度最低的平板進行計數；若所有稀釋度(包括液體樣品原液)平板均無菌落生長，以小于1乘以最低稀釋倍數計算。若所有稀釋度的菌落數均不在30～300 CFU之間，以最接近30CFU或300CFU的平均菌落數乘以稀釋倍數計算。

（4）大腸菌群的檢測:①乳糖膽鹽發酵試驗：將檢樣倒入雙料乳糖膽鹽發酵培養液中，置（36±1）℃培養箱內培養（24±2）h，觀察是否產酸、產氣，如不產酸產氣為大腸菌群陰性，若變黃和氣體產生，要進行分離培養和證實試驗。

②分離培養：自產酸產氣發酵管中取一接種環培養液，轉接伊紅美蘭瓊脂平板上，置（36±1）℃培養箱培養18～24 h，取出，觀察菌落形態，革蘭氏染色鏡檢。（深紫黑色，具有金屬光澤的菌落;紫黑色、不帶或略帶金屬光澤的菌落;淡紫紅色、中心較深的菌落）。

③證實試驗∶在上述平板上，挑取可疑大腸菌群菌落接種乳糖發酵管，置（36±1）℃培養箱培養（24±2） h。

（5）金黃色葡萄球菌的檢測：①將1 mL樣品放入9 mL氯化鈉肉湯或胰酪胨大豆肉湯培養基中，（36±1）℃培養24 h。從培養液中取1～2接種環劃線接種在，Baird Parker平板或用血瓊脂培養基，于（36±1）℃培養 24 h，在Baird Parker平板培養基上菌落為圓形、金黃色、凸起、表面光滑、周圍有溶血環。挑取典型菌落作涂片染色鏡檢，為革蘭氏陽性，成葡萄狀排列。

②血漿凝固酶試驗∶吸取1∶4新鮮血漿0.5 mL放入滅菌小試管中，再加入待檢菌24 h肉湯培養物0.5 mL。混勻，放（36±1）℃溫箱或水浴中，每30 min觀察1次，24 h之內如呈現凝塊即為陽性。同時以已知血漿凝固酶陽性和陰性菌株肉湯培養物及肉湯培養基各0.5 mL，分別加入滅菌小試管與1∶4血漿0.5 mL混勻，作為對照。

③報告：凡在上述選擇平板上有可疑菌落生長，經染色鏡檢，證明為革蘭氏陽性葡萄球菌，血漿凝固酶試驗陽性，可報告檢出金黃色葡萄球菌。

（6）溶血性鏈球菌的檢測：①取1 mL液體檢樣，加入9 mL葡萄糖肉浸液肉湯，或直接劃線接種于血平板，如檢樣污染嚴重，同時按上述量接種匹克氏肉湯，經（36±1）℃培養 24 h，接種血平板，置（36±1）℃培養 24 h，挑起有溶血圓形的細小菌落，在血平板上分純，然后觀察溶血情況及革蘭氏染色。鏈的長短常與細菌的種類及生長環境有關；液體培養中易呈長鏈；固體培養基中常呈短鏈，不形成芽孢，無鞭毛，不能運動。血平板上該菌為灰白色，半透明或不透明。

表2 公共用品的檢出情況

②報告：在血平板上為灰白色菌落，半透明或不透明，表面光滑有乳頭，鏡檢為革蘭氏陽性無芽孢球菌，圓形或卵圓形，呈鏈狀排列，菌落周圍有溶血環，可報告為樣品中檢出溶血性鏈球菌。

（7）真菌和酵母菌的檢測：①用滅菌吸管吸取1:10稀釋液2 mL，分別注入到2個滅菌平皿內，每皿1 mL。另取1 mL注入9 mL滅菌鹽水管中，換1支1 mL滅菌吸管吹吸5次，此液為1:100稀釋液。按上述操作順序作10倍遞增稀釋液，每稀釋1次，換1支1 mL滅菌吸管，根據樣品的污染情況，選擇3個合適的稀釋度。將溶化并冷卻至45℃左右的培養基注入平皿內，凝固后，倒置于25～28℃溫箱中，3 d后開始觀察，共培養觀察1周。

②菌落計數：通常選擇菌落數在5～50 CFU之間的平皿進行計數，同稀釋度的兩個平皿的菌落平均數乘以稀釋倍數，即為每毫升檢樣中所含菌落數。若兩個稀釋度的菌落數皆在規定范圍之間或3個稀釋度皆不在此范圍，按菌落總數方法計數。

2結果

該市公共場所的公共衛生用品的合格率為91%，致病菌檢出率較低，真菌和酵母菌的檢出率略高為8%。大型公共場所的合格率相對較高[2]。

3討論

通過該次調查發現，該市公共場所的公共衛生用品的合格率為91%，致病菌檢出率較低，真菌和酵母菌的檢出率略高為8%。大型公共場所的合格率相對較高，與大型公共場所的消毒意識強、基本上能按規定做到一客一換一消有關。小型浴池和小型理發店的合格率略低，與這些場所服務員流動大、缺乏消毒意識有關。為此，建議衛生監督部門，要以公共用品用具的清洗消毒為重點，特別是小型浴池拖鞋的清洗消毒，進行經常性的衛生監督，定期進行公共用品的微生物檢測，督促經營部門完善消毒設施建立健全消毒制度，指導消毒人員掌握簡便易行正確的消毒方法，確保消毒質量和效果，保證衛生質量符合國家要求[3]。同時，完善微生物檢驗室的設施，提高檢驗人員的技術水平，保證檢驗結果的科學性、準確性。

表1 該市公共場所的公共衛生用品的合格情況

[1]魏紅霞，穆永娟，元旭旻，等.新鄉市公共場所微生物檢測結果分析[J].中國消毒學雜志,2014,31(7):264-265.

[2]竇彩紅.公共場所公用物品監測分析 [J].中國當代醫藥,2014(6):131-133.

[3]祁硯平,沈一鳴.孝感市2008-2009年醫療衛生單位消毒效果監測結果分析[J].公共衛生與預防醫學,2010(5):107-108.