薏苡莖、葉提取液對腫瘤細胞增殖的抑制作用

朱曉瑩，林瑤，黃鎖義，余珊

（右江民族醫學院，廣西百色533000）

薏苡（Coix lacroyma-jobi L.var.ma-yuen Stapf）為禾本科薏苡屬，一年生或多年生草本植物。壯藥薏苡入藥歷史悠久，《后漢書·馬援傳》載：“出征交趾，土多瘴氣”，因常服薏苡仁而能防治瘴疾，后帶回中原。《神農本草經》記載：“薏苡仁味甘，微寒。主筋急，拘攣不可屈伸，風濕痹，下氣，久服輕身益氣”[1]。2010年版中國藥典記載薏苡仁可健脾滲濕，除痹止瀉，清熱排膿[2]。薏苡作為食用兼藥用的栽培作物，薏苡具備了較全面的營養保健功能，薏苡仁油具有抗腫瘤、免疫調節、抗病毒等方面的活性，薏苡莖可防治麻疹、濕疹等；薏苡葉中所含的生物堿，有清熱利濕、健脾殺蟲、暖胃益氣、舒盤活血等作用[3]。

在前期試驗研究中，發現薏苡莖、葉水提取液及乙醇提取液對宮頸癌細胞增殖抑制作用顯著。本文以運用薏苡莖、葉的水提取液及乙醇提取液作用于人宮頸癌（hela）、胃癌（SGC-7901）和肝癌（HepG2）細胞，觀察薏苡4種提取液對3種腫瘤細胞增殖活性的影響，探討薏苡莖、葉提取液抗腫瘤的活性。

1 材料與方法

1.1 細胞株

宮頸癌細胞Hela購于中國科學院典型培養物保藏中心昆明細胞庫，2 d～3 d換液一次，4 d～5 d傳代；胃癌（SGC-7901）、肝癌（HepG2）由廣西醫科大學黎丹絨教授惠贈，2 d～3 d換液一次，4 d～5 d傳代。

1.2 儀器

RE-3000A旋轉蒸發儀：上海亞榮生化儀器廠；ALPHA1-2/LD-Puls冷凍干燥機：德國 CHRIST；ME104電子天平：美國梅特勒-托利多；CO2培養箱：上海力康HF90；多功能酶標儀：德國伯托TriStar LB941。

1.3 試劑與藥材

RPMI-1640培養基：賽默飛世爾科技公司；胎牛血清：Hyclone公司；四甲基偶氮唑鹽（MTT）、二甲基亞楓（DMSO）：Sigma公司；0.25%EDTA-胰酶：北京索來寶公司；薏苡：購自廣西百色市西林縣足別瑤族苗族鄉（經右江民族醫學院民族醫藥教研室覃道光副教授鑒定為禾本科薏苡屬薏苡藥材）。

1.4 薏苡莖、葉活性部位的提取

將新鮮的薏苡莖、葉分別用清水洗凈，陰干，莖、葉分別粉碎保存。稱取薏苡莖、葉干粉各100 g，按料液比1∶10分別加入蒸餾水、無水乙醇，按下法進行提取。65℃恒溫水浴加熱回流兩次，每次2 h，抽濾，合并濾液，用旋轉蒸發儀減壓濃縮，最后將濃縮液制成凍干粉。將上述提取液凍干粉各取0.5 g，用1%DMSO溶液溶解，0.22 μm過濾，分裝存儲。臨用前加入含10%胎牛血清的1640培養基中，調整到相應的濃度。

1.5 薏苡莖葉不同提取液對Hela、SGC-7901、HepG2細胞增殖的影響

取對數生長期的細胞，分別調整細胞濃度為1×105個/mL，接種于 96 孔培養板，每孔 100 μL，試驗設定調零組（僅加培養液）、空白組（含細胞液及培養液）和給藥組（含細胞液、培養液及藥物）孔。給藥組設有：薏苡莖葉水提取液、薏苡莖葉乙醇提取液。每種藥物設5個濃度，每個濃度設5個復孔，加藥培養48 h。48 h后傾去上清液，加新鮮配制的MTT溶液（5 mg/mL）20 μL，補充 1640 培養基至 200 μL，混勻再培養 4 h。傾去上清液，每孔加DMSO 150 μL，搖勻溶解甲臜，490 nm下測定各孔的吸光度（OD值）。

1.6 細胞增殖抑制率及IC50的計算

抑制率/%=[1-（給藥組OD值-調零組OD值）/（空白組OD值-調零組OD值）]×100。將試驗數據輸入SPSS17.0求出各種提取液的IC50。

2 結果

薏苡莖葉提取液對Hela、SGC-7901、HepG2細胞增殖抑制的結果（OD值）見表1，抑制率計算結果見圖1，IC50計算結果見表 2。

表1 薏苡莖葉提取液對Hela、SGC-7901、HepG2細胞增殖的影響（±s，n=5）Table 1 Extracts from stalks and leaves of adlay of Hela，SGC-7901，HepG2 cells after treatmen（tx±s，n=5）mg/mL

表1 薏苡莖葉提取液對Hela、SGC-7901、HepG2細胞增殖的影響（±s，n=5）Table 1 Extracts from stalks and leaves of adlay of Hela，SGC-7901，HepG2 cells after treatmen（tx±s，n=5）mg/mL

注：表中“-”為不加干預因素。

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圖1 薏苡莖葉提取液對 HepG2（A）、SGC-7901（B）、Hela（C）細胞增殖抑制率Fig.1 Antiprolifeactive of adlay extracts towards HepG2（A），SGC-7901（B），Hela（C）cells注：A圖以薏苡葉乙醇提取液對HepG2細胞增殖抑制作用最顯著；B圖以薏苡莖乙醇提取液對SC-7901細胞增殖抑制作用最顯著；C圖以薏苡莖乙醇提取液對Hela細胞增殖抑制作用最顯著。

從上述圖表中可見，薏苡莖葉水、乙醇提取液對人肝癌細胞HepG2、人胃癌細胞SGC-7901和人宮頸癌Hela細胞均有抑制作用，其抑制率隨提取液濃度的增加而增加。但各個細胞對各提取液的敏感程度不同。HepG2細胞對薏苡葉乙醇提取液較敏感，而SC-7901、Hela對薏苡莖乙醇提取液較敏感，運用spss軟件計算它們的IC50，其中以薏苡葉乙醇提取液對HepG2、SGC-7901、Hela 的 IC50值 48.52、54.72、139.35較低。

3 討論

薏苡的化學成分研究始于20世紀60年代，從薏苡中分到的化合物類型包括：脂類、甾醇類、benzoxazinones、benzoxazolinone、indene、木脂素類、酚類、腺苷等近30個化合物以及蛋白質、氨基酸和維生素等營養成分[4]。研究[5-7]表明薏苡具有一定的抗腫瘤活性，目前國內外對于薏苡抗腫瘤的研究主要集中于薏苡仁，對薏苡治療腫瘤等疾病的有效部位及作用機理等方面均未見有詳細深入的研究。本課題組前期以水、乙醇、甲醇、丙酮及氯仿為溶劑分別提取薏苡莖、葉，觀察他們對Hela增殖的抑制作用。結果顯示，薏苡莖、葉各提取液均顯示出一定的抑制Hela增殖作用，其中以薏苡水提及乙醇提取液作用較強。本文以前期研究為基礎，進一步研究薏苡的抗腫瘤活性及其作用譜，選擇人肝癌細胞HepG2、人胃癌細胞SGC-7901和人宮頸癌Hela細胞3種細胞為試驗對象，觀察薏苡莖、葉的水、乙醇提取液對它們增殖的抑制作用。試驗結果顯示薏苡莖葉水、乙醇提取液對人肝癌細胞HepG2、人胃癌細胞SGC-7901和人宮頸癌Hela細胞均有抑制作用，其抑制作用隨藥物濃度的增加而增加，呈現劑量依賴效應。運用spss計算它們的IC50，其中以薏苡葉乙醇提取液對HepG2、SGC-7901、Hela的IC50值 48.52、54.72、139.35 較低。因此，認為薏苡葉提取液具有較好的抑制腫瘤細胞生長的作用。此外，對比薏苡莖葉IC50抑制率時，發現薏苡葉提取液優于莖提取液，提示薏苡抗癌活性物質在葉中的分布大于莖，這為下一步薏苡提取液在體內抗腫瘤作用研提供參考。

表2 薏苡莖葉提取液對Hela、SGC-7901、HepG2的IC50值Table 2 IC50values extracts from stalks and leaves of adlay of Hela，SGC-7901，HepG2 cellsmg/mL

[1] 國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].8版.上海:上海科學技術出版社,1999:329

[2] 中華人民共和國衛生部藥典委員會.中國藥典,I部[M].北京:化學工業出版社,2010:353

[3] 黃鎖義,李容,潘勇,等.薏苡研究的新進展[J].食品研究與開發,2012,33(11):223

[4] 楊爽,王李梅,王姝麒,等.薏苡化學成分及其活性綜述[J].中藥材,2011,34(8):1306

[5] Ming-Yi Lee,Huan-You Lin,Faiwen Cheng,et al.Isolation and characterization of new lactam compounds that inhibit lung and colon cancer cells from adlay(Adlay lachryma-jobi L.var.ma-yuen Stapf)bran[J].Food and Chemical Toxicology,2008,46(6):1933

[6]Cheng-Pei Chung,Chih-Ying Hsu,Jing-Hui Lin,et al.Antiproliferative Lactams and Spiroenone from Adlay Bran in Human Breast Cancer Cell Lines[J].J Agric Food Chem,2011,59(4):1185

[7]Cheng-Pei Chung,Hsin-Yi Hsu,Din-Wen Huang,et al.Ethyl Acetate Fraction of Adlay Bran Ethanolic Extract Inhibits Oncogene Expression and Suppresses DMH-Induced Preneoplastic Lesions of the Colon in F344 Rats through an Anti-inflammatory Pathway[J].J Agric Food Chem,2010,58(13):7616