CK19、TPO、Galectin-3與HBME-1蛋白表達對甲狀腺腫瘤病理診斷作用分析

郭健 張世豪 延麗雅 陳輝娥

CK19、TPO、Galectin-3與HBME-1蛋白表達對甲狀腺腫瘤病理診斷作用分析

郭健 張世豪 延麗雅 陳輝娥

目的 探討甲狀腺病變中的細胞角蛋白19(CK19)、甲狀腺過氧化物酶(TPO)、半乳糖凝集素-3(Galectin-3)與人骨髓內皮細胞標記物(HBME-1)表達及其對甲狀腺腫瘤病理診斷的價值。方法 收集134例甲狀腺癌(123例乳頭狀癌和11例濾泡癌)、34例甲狀腺腺瘤、20例結節性甲狀腺腺腫以及10例橋本甲狀腺炎患者的病理標本, 檢測其CK19、TPO、Galectin-3與HBME-1的表達情況。結果 CK19、TPO、Galectin-3與HBME-1在甲狀腺腫瘤良性組織和惡性組織中的陽性表達率比較, 差異有統計學意義(P＜0.05)；四項指標聯合檢測對于甲狀腺腫瘤良惡性診斷的敏感度和特異度分別為96.3%和100.0%。結論 甲狀腺惡性腫瘤中CK19、Galectin-3與HBME-1陽性表達增高, 而TPO表達缺失, 四項指標聯合檢測對于甲狀腺腫瘤良惡性的診斷具有重要價值。

甲狀腺腫瘤；病理診斷；細胞角蛋白19；半乳糖凝集素-3；甲狀腺過氧化物酶；人骨髓內皮細胞標記物

甲狀腺腫瘤是臨床常見的一種內分泌腫瘤, 由于良惡性腫瘤具有相似的組織學形態加之部分病例缺乏典型性, 在病理診斷中存在醫師主觀因素影響等, 病理診斷中也存在較大的誤診、漏診風險［1］。腫瘤標志物檢測對于內分泌良、惡性腫瘤的診斷鑒別具有重要意義。本研究分析了CK19、TPO、Galectin-3與HBME-1在甲狀腺病變中的表達及其單獨與聯合檢測對腫瘤良惡性的診斷價值, 現報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2010年1月～2013年12月, 東莞市大朗醫院和東莞市人民醫院經手術治療的甲狀腺腫瘤患者的病理標本198例, 根據WHO關于甲狀腺的組織學分型：134例甲狀腺癌(123例乳頭狀癌和11例濾泡癌), 男25例, 女109例, 年齡23～82歲, 平均年齡(45.26±13.48)歲；34例甲狀腺腺瘤, 男6例, 女28例, 年齡16～62歲, 平均年齡(44.11±6.02)歲；20例結節性甲狀腺腺腫, 男5例, 女15例, 年齡20～70歲,平均年齡(46.29±8.59)歲；10例橋本甲狀腺炎, 男2例, 女8例,年齡25～78歲, 平均年齡(47.11±10.29)歲。

1.2 方法 手術病理組織標本以10%的中性福爾馬林固定, 并常規石蠟包埋及3 μm厚連續病理切片, 并進行HE染色。以Power Vision二步法進行DAB染色以及蘇木精復染,測定CK19、TPO、Galectin-3與HBME-1表達情況, 以已知陽性切片作為陽性對照。常規預處理以后, 阻斷內源性過氧化物酶, 采用PBS進行3次沖洗, 滴加一抗, 在37℃下孵育1～2 h, 再以PBS沖洗3次, 然后滴加羊抗鼠多聚體, 置于室溫下孵育30 min, 再次采用PBS沖洗3次。最后采用DAB進行顯色, 并沖洗后以中性樹膠封片。CK19、TPO、Galectin-3與HBME-1單克隆抗體與辣根酶標記羊抗小鼠多聚體均選自福建省福州邁新公司。

1.3 結果判定 由2名高年資病理醫師進行雙盲閱片。表達均定位于細胞質內, 以細胞質中出現棕黃色顆粒并且具有明顯高于背景著色的判定為陽性, 其中, HBME-1可存在明顯細胞膜著色, Galectin-3可存在部分細胞核著色。切片均選擇5個高倍鏡視野(400×)計數, 統計每個視野中陽性細胞所占百分數平均值, 以此作為陽性細胞數。

1.4 統計學方法 采用統計學軟件SPSS18.0對數據進行統計分析。計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 四項標志物在甲狀腺病變組織中的表達 CK19、Galectin-3及HBME-1在甲狀腺腫瘤良、惡性間的陽性表達率比較, 差異有統計學意義(P＜0.05)；TPO在惡性病變中以陰性為主, 在良性中均呈陽性, 良惡性比較, 差異有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 四項標志物在甲狀腺病變中的陽性表達［n(%)］

2.2 四項標志物對甲狀腺腫瘤良惡性的診斷價值 以CK19、Galectin-3、HBME-1三項指標單獨為陽性、三項指標同時為陽性且TPO為陰性判定為聯合診斷惡性, 以TPO判定為陽性、三項指標均為陰性判定為良性。結果顯示, CK19的敏感度和特異度分別為93.3%、78.1%, TPO為11.2%、100.0%, Galectin-3為97.0%、87.5%, HBME-1為88.8%、87.5%, 四項指標聯合檢查的診斷敏感度與特異度提高至96.3%、100.0%。

3 討論

CK19是由上皮細胞所分泌的一種糖蛋白, 主要在正常上皮與上皮源性原發腫瘤以及其轉移腫瘤細胞中表達。諸多研究顯示, 其對于甲狀腺乳頭狀癌與濾泡癌、濾泡性腺瘤以及良性增生性濾泡的鑒別中具有重要價值。解麗梅［2］研究發現, 在甲狀腺乳頭狀癌中存在CK19彌漫、強烈表達, 且具有高度靈敏度, 達到100%。但CK19免疫反應還存在于癌周以及增生性結節周圍受到擠壓的正常甲狀腺組織以及淋巴細胞性甲狀腺炎中。故認為CK19對于甲狀腺癌的診斷特異度并不高, 但在良性或者正常組織中則多呈現彌漫性或者灶性表達, 且陽性較弱。本研究中, CK19在甲狀腺惡性腫瘤中的陽性表達率為93.3%, 且多呈強陽性, 而在良性病變中的陽性表達率僅為7.8%, 對于良惡性病變的診斷敏感度和特異度分別為93.3%和78.1%, 特異度相對而言并不非常理想, 與佟杰等［3］報道接近。但CK19陽性表達多提示病變存在惡性傾向, 這對于提高臨床診斷準確率具有重要意義。

Galectin-3是凝集素蛋白家族中的一員, 具有功能多樣性, 在炎癥、自身免疫性疾病以及腫瘤惡性轉化過程中具有重要作用, 在乳腺癌、結腸癌以及淋巴瘤等多種惡性腫瘤中具有表達升高現象。鄧敏等［4］臨床研究證實, Galectin-3對于甲狀腺腫瘤的良惡性診斷具有較高的敏感性。本研究結果顯示, Galectin-3在甲狀腺惡性腫瘤中的陽性表達率達97.0%, 而在良性腫瘤中僅為12.5%, 兩者比較, 差異具有統計學意義(P＜0.05), 靈敏度和特異度分別達97.0%、87.5%, 認為Galectin-3對于甲狀腺良惡性病變的診斷具有較高的參考價值, 可作為臨床鑒別診斷的敏感標記物。

HBME-1為酸性氨基酸多聚糖蛋白, 主要由透明質酸等成分組成。臨床研究顯示, HBME-1在甲狀腺乳頭狀癌中具有高表達特征, 對于甲狀腺癌具有較好的診斷價值。古麗那爾·阿布拉江等［5］研究發現, 在甲狀腺乳頭癌患者中普遍存在HBME-1陽性表達, 而在甲狀腺良性病變中的陽性表達極少。王丹等［6］研究中發現, HBME-1及Galectin-3在甲狀腺惡性結節中的表達顯著高于良性結節, 且其單獨或者共同表達對于甲狀腺結節良惡性的診斷敏感性以及特異性均顯著高于普通細胞涂片, 認為HBME-1可作為甲狀腺結節針刺細胞學標本檢測指標, 可提高甲狀腺腫瘤診斷的敏感性和特異性［6］。本研究結果顯示, 甲狀腺惡性腫瘤的HBME-1陽性表達率達88.8%, 相比于良性腫瘤的12.5%顯著提高, 對于腫瘤良惡性的診斷敏感度與特異度均超過87%, 診斷效能接近Galectin-3。表明HBME-1對于甲狀腺良惡性腫瘤的診斷具有較高的準確性, 可作為甲狀腺疾病的附加診斷指標。

TPO是一種含糖蛋白的Ⅰ型跨膜亞鐵血紅素, 參與了甲狀腺素的合成過程［7］。臨床研究發現, TPO對于正常甲狀腺細胞以及良性病灶組織具有極強的親和力, 而其與乳頭狀癌等惡性癌細胞的結合力較弱, 故可出現陽性表達程度差異,這對于腫瘤異質性的評價具有一定價值。本研究中, TPO在惡性組織中的陽性表達率僅為11.2%, 而在良性中的表達為100.0%, 與林阿麗［7］報道相似。這種明顯的良惡性差異與高特異性非常有利于腫瘤良惡性的鑒別, 可作為甲狀腺病變的初篩指標, 以陰性患者作為惡性高危病例。

將四項指標聯合檢測, 結果顯示, 聯合檢測對于甲狀腺腫瘤良惡性的特異性達100.0%, 而敏感性也提高至96.3%。CK19、TPO、Galectin-3與HBME-1在甲狀腺腫瘤中具有特異性表達, 其中, CK19、Galectin-3與HBME-1表達升高,而TPO表達缺失, 這對于判定病變的良惡性具有重要價值,四項指標聯合檢測有利于提高特異度、敏感性與診斷準確率,可提高臨床病理診斷的可靠性。

［1］ 黃志偉.CK19、TPO、Galectin-3在甲狀腺乳頭狀癌中的表達及臨床意義.吉林醫學, 2014, 35(19):4253-4254.

［2］ 解麗梅.CK19、Galecin-3和TPO表達在甲狀腺良惡性腫瘤病理診斷中的價值.中國醫藥指南, 2012, 10(23):428-429.

［3］ 佟杰, 王巖, 笪冀平.CK19、HBME-1、Galectin-3等表達在甲狀腺乳頭狀微小癌與良性病變鑒別診斷中的意義.中華腫瘤雜志, 2011, 33(8):599-604.

［4］ 鄧敏, 葉顧萍, 馬建中, 等.甲狀腺乳頭狀癌中CK19、Galectin-3、HBME-1和TPO的表達及意義.臨床與實驗病理學雜志, 2011, 27(8):843-846.

［5］ 古麗那爾·阿布拉江, 桑偉, 劉霞, 等.CK19、Gal-3和 HBME-1在甲狀腺良惡性結節中的表達及其意義.新疆醫科大學學報, 2014, 37(2):147-150.

［6］ 王丹, 楊玉芝, 馮琨, 等.Galectin-3和HBME-1在甲狀腺結節細針穿刺標本中的表達.放射免疫學雜志, 2012, 25(3):271-273.

［7］ 林阿麗.CK19、HBME-1、Galectin-3、TPO及CD56聯合檢測在甲狀腺乳頭狀癌診斷中的意義.浙江臨床醫學, 2014, 16(2): 293-295.

Analysis of effects by CK19, TPO, galectin-3 and HBME-1 protein expression for pathological diagnosis of thyroid tumor

GUO Jian, ZHANG Shi-hao, YAN Li-ya, et al.Dongguan City Dalang Hospital, Dongguan 523770, China

Objective To investigate the expressions of cytokeratin 19 (CK19), thyroid peroxidase (TPO), Galectin-3, and human bone marrow endothelial cell markers (HBME-1) in thyroid lesions and their effects for pathological diagnosis of thyroid tumor.Methods Pathological samples were collected in 134 cases of thyroid cancer (123 cases of papillary carcinoma and 11 cases of follicular carcinoma), 34 cases of thyroid adenoma, 20 cases of nodositas goiter and 10 cases of Hashimoto thyroiditis.Their expressions of CK19, TPO, Galectin-3, and HBME-1 were detected.Results The difference of CK19, TPO, Galectin-3, and HBME-1 expressions between benign and malignant tissues in thyroid tumor had statistical significance (P＜0.05).Combined detection of four indicators had the sensitivity and specificity as 96.3% and 100.0% for diagnosis of benign and malignant thyroid tumor.Conclusion In malignant thyroid tumor, the positive expressions of CK19, Galectin-3, and HBME-1 were increased, while that of TPO was deficient.Combined detection of four indicators provides important diagnostic value for benign and malignant thyroid tumor.

Thyroid tumor; Pathological diagnosis; Cytokeratin 19; Galectin-3; Thyroid peroxidase; Human bone marrow endothelial cell markers

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.18.003

2015-01-20］

523770 東莞市大朗醫院(郭健 延麗雅 陳輝娥)；東莞市人民醫院(張世豪)