羊水細胞培養及熒光原位雜交技術在產前診斷中的應用

曾晉國

羊水細胞培養及熒光原位雜交技術在產前診斷中的應用

曾晉國

目的 探討羊水細胞培養及熒光原位雜交技術在產前診斷中的臨床價值。方法 120例孕婦為研究對象, 分別進行熒光原位雜交(FISH)檢測和細胞培養染色體。對比兩種方法的產前診斷結果。結果 FISH檢測為100.00%, 細胞培養染色體分析為83.33%。結論 FISH檢測結果更加正確可靠, 值得在臨床推廣使用。

羊水細胞培養；熒光原位雜交；產前診斷

染色體異常會引起新生兒先天殘疾或造成孕婦流產, 大大降低胎兒的出生質量。臨床上常運用FISH技術和細胞培養染色體分析來對孕婦做產前診斷, 且FISH技術檢測效果更好, 詳細報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年8月～2014年8月在梅州市人民醫院婦產科就診的120例孕婦為研究對象, 孕婦基本資料：年齡21～45歲, 平均年齡(26.9±12.5)歲, 孕周18～26周, 平均孕周(19.9±12.6)周, 產前診斷主要指征有：經孕中期血清學篩查發現高風險, 共65例；高齡產婦(35歲以上)20例；40例均有過染色體異?；純荷?；經超聲檢查的軟指標有異常的15例, 其中主要包括頸項透明層增厚、脈絡叢囊腫、單臍動脈、心室強回聲等；夫妻一方為染色體異?；颊呋蚴侨旧w異位攜帶者, 共8例；本次實驗需獲得孕婦及家屬的知情同意書, 并在孕婦知情的條件下將60例行FISH檢測。

1.2 方法 本次試驗用到的儀器有：微量加樣器、FISH分析系統、染色體核型分析系統、熒光顯微鏡、雜交儀、普通低速離心機、電熱恒溫水浴箱、二氧化碳恒溫培養箱等。先進行羊水細胞采集, 在B超的引導下, 常規消毒后, 經腹抽取孕婦羊水2～5 ml , 2000 rpm , 離心10 min, 去上清, 留沉淀0.2 ml, 分別給予常規羊水細胞培養染色體核型分析、FISH檢測。羊水細胞制片與培養：根據我國衛生部(現衛計委)產前診斷行業標準《胎兒常見染色體異常與開放性神經管缺陷的產前篩查與產前診斷技術標準》按照相關要求, 采用兩種不同的培養體系進行制片和培養。收集細胞時需在無菌條件下操作, 確保細胞不受到污染, 將細胞分2瓶, 接種在Am-mioMAX-Ⅱ將羊水細胞進行培養, 混勻后加入5%的二氧化碳；再滲入37℃水中, 離心10 min, 1000 rpm, 放入培養箱中進行培養, 1周后觀察細胞的生長情況, 常規制片G顯帶。雜交。

1.3 分析 對每例標本進行篩選, 選取顯帶清楚、形態適中且310條帶以上的至少有4個, 計數不得少于25個分裂相,在特殊情況下應增加分析計數的分裂相數。本組本實驗開始便對120例孕婦進行羊水接種和培養到核型分析, 結果顯示120例羊水染色體結果相一致。

1.4 羊水間期細胞FISH檢測 兩組均采用GLP13/GLP21D探針以及CSP18/CSP/CSPYDNA探針, 且均由金菩嘉公司提供。去掉蓋玻片, 0.4×SSC/0.3%NP-40, 在71℃中洗2.5 min。2×SSC/0.1%NP-40 , 在室溫下洗1 min?？諝庵懈稍铩＜? μl DAP Ⅱ復染。根據熒光顯微鏡的類型選擇合適的濾光片觀察熒光信號, 并攝圖、計數、對其做出分析結果進行保存。結果判斷：每組探針計數細胞不得少于40個, 且由2個同時計數, 若90%細胞核顯示為整倍體, 則為正常整體倍信號；若整體倍信號在60%以上則表示為非整倍體。以獨立熒光信號為兩信號點之間的距離要大于1個信號的點的直徑, 此過程中發生重疊的信號不作統計, 嚴格按照《人類染色體細胞遺傳學國際命名體制》對染色體核型和FISH檢測結果進行描述。

1.5 統計學方法 采用SPSS18.0統計學軟件進行統計分析。計量資料采用均數±標準差表示, 行t檢驗；計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 羊水細胞染色體核型的分析 本次研究共對120例羊水標本進行了培養, 培養成功100例, 培養成功率為83.33%,其中為正常核型占85例, 異常核型占15例。見表1。

表1 染色體異常分類(n, %)

2.2 染色體核型異常與不同產前診斷指征的相關性 在15例染色體異常核型中, 一對夫妻至少有一方攜帶著異常染色體或染色體異常檢出率過高, 與高領、高風險、生育染色體異常患兒、超聲提示軟指標異常對比差異均無統計學意義(P＞0.05)。

3 討論

3.1 產前診斷與產前篩選能有效降低胎兒染色體病染色體病屬于遺傳疾病［1,2］, 其易發于新生兒, 發病率1.3‰～1.8‰, 在新生兒中發病率高, 其次為染色體異常, 發病率1.1‰～1.21‰。本次研究共分析了120例羊水細胞, 其顏色異常的為15例, 陽性檢查率14.29%, 其中18-三體陽性率為0.29%, 而21-三體陽性率為0.19%, 性染色體遠遠超出的常規發生率, 達到了0.09%；FISH檢測率為100%。產前篩選能有效降低唐氏綜合征的發生率, 因為它能對其風險進行評估, 并采取預防措施。這項操作簡單、便捷且迅速、安全, 在臨床上更易被大多數人所接受。但篩選受到條件限制,會出現一定的假陽性和假陰性, 風險確定不太明確, 必須要通過羊水細胞培養染色體核型分析來確診, 才能起到一定的臨床作用［3］。根據以往統計的結果分析來看, 占有比列最大的為因血清學篩查高風險來做羊水穿刺的孕婦, 其占到了56.76%, 其檢查出率也在2.00%以上。本次研究中共檢查出了15例異常核型, 其中18-三體和21-三體分別占3例、2例, 初此之外還見檢查出了1例三倍體和3例嵌合體以及性染色體X、XXX、XXY分別為1例、2例、1例。由此可見,血清學篩查不僅可以檢測出21-三體和18-三體, 還能檢測出其他機構異常的染色體, 此項結果與文獻報道一致。因此,也可以看出, 血清學篩查能有效提高人口出生素質, 對指標異常的孕婦進行檢測, 能有效避免臨床上檢測的盲目性, 在一定程度上減輕了孕婦家庭的經濟負擔。

3.2 染色體異常與產前診斷指征的相關性 本次共對120例孕婦進行了產前診斷, 經檢查不同產前診斷指征中夫妻雙方至少有一方攜帶異常染色體［4］, 或染色體檢出率超標。因此應根據孕婦的自身情況, 并結合臨床醫學對孕婦終止妊娠。如果不終止妊娠胎兒會出現畸形或殘疾, 因為同源染色體間會相互配對, 兩者產生影響, 其中一種異常的染色體與正常染色體配合, 由于具有遺傳因素, 因此胎兒會攜帶異常染色體出生, 影響出生質量。

3.3 熒光原位雜交技術在產前診斷中的應用 通過觀察熒光信號在染色體上反應出的染色體數目可以看出, FISH檢測只需要做細胞技術即可, 不需要進行顯帶分析及細胞培養。

綜上所述, FISH檢測易操作, 其特異性高, 結果直觀,檢測速度快, 能正確的分析出染色體的結構和數目, 而且檢測的結果正確性高 , 值得在臨床推廣。

［1］ 于麗, 付杰, 馬京梅, 等.1809份羊水細胞熒光原位雜交技術與核型檢測結果分析.中華檢驗醫學雜志, 2014, 8(5):342-346.［2］ 賀方華.熒光原位雜交在產前診斷中的作用探討.中國計劃生育學雜志, 2013, 21(2):113-116.

［3］ 宋婕萍, 王波, 徐淑琴, 等.熒光原位雜交技術在胎兒染色體非整倍體產前診斷中的應用.實用醫學雜志, 2012, 28(1):111-113.

［4］ 徐雪琴, 謝丙樂, 胡速, 等.熒光原位雜交技術快速診斷胎兒常見染色體數目異常.檢驗醫學, 2010, 25(12):921-924.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.12.079

2014-12-24］

514089 廣東梅州市人民醫院檢驗科