溶血對時間分辨免疫熒光分析法測定胰島素的影響

彭哲華

溶血對時間分辨免疫熒光分析法測定胰島素的影響

彭哲華

目的 分析不同程度溶血對時間分辨免疫熒光分析法檢測胰島素結果的影響。方法 選擇健康成年體檢者未發生溶血的300例血液標本, 利用低滲溶血法分別制備出不同程度溶血標本, 其中：輕度溶血100例、中度溶血100例、重度溶血標本100例；均采用時間分辨免疫熒光分析法對以上三組不同程度溶血標本分別檢測其溶血前后的血清胰島素水平；并進行組間對比分析。結果 各組未溶血前檢測結果與輕、中、重度溶血后比較, 差異具有統計學意義(P＜0.05)；且輕、中、重度溶血標本間血清胰島素水平檢測結果比較, 差異均具有統計學意義(P＜0.05)。結論 溶血對臨床測定血清胰島素水平具有較明顯的影響, 因此, 在進行臨床血清胰島素水平檢測時須盡量避免溶血現象發生。

血清胰島素；測定；溶血；時間分辨免疫熒光分析法

血液標本在其采集、儲藏、運送等一系列過程中常會造成紅細胞破裂, 使血紅蛋白(Hb)被釋放到血清之中, 導致血液標本發生溶血現象, 進而對血液檢驗結果的精準性造成極大的影響［1,2］。由于紅細胞內含有胰島素降解酶(IDE), 當血液標本出現溶血現象后, 則可直接促使紅細胞內的IDE被釋放至血清之中, 降解胰島素, 最終會對胰島素水平的檢測產生影響。本文研究不同程度的溶血標本對臨床血清胰島素檢測結果的影響, 現將結果報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇本院2014年1~12月健康成年體檢者未發生溶血的300例血液標本；所有體檢者均無用藥史, 且肝、腎功能各項指標正常, 無其他疾病史, 標本無高脂血、黃疸以及溶血現象。將300例血液標本采用低滲溶血法分別制備出不同程度溶血標本, 其中：輕度溶血組100例、中度溶血組100例、重度溶血組100例。三組患者一般資料比較差異無統計學意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 檢測儀器 本文采用日本Sysmex公司生產的XE-5000全自動血細胞分析儀；采用Auto Delfia1235時間分辨熒光免疫分析儀及相關配套的胰島素檢測試劑盒進行胰島素水平檢測。

1.3 檢測方法 ①選取相關血液標本, 以3000 r/min離心10 min進行血清分離。②常溫下, 嚴格按照時間分辨熒光免疫分析儀及相關配套試劑盒說明書對每一份溶血標本進行相關胰島素水平檢測。③采用真空注射器反復抽打血液標本,使之發生溶血, 然后將溶血血清與非溶血血清按不同比例予以充分混合, 得到不同輕、中、重度溶血標本。④采用時間分辨熒光免疫分析儀對三組不同程度溶血標本進行胰島素水平檢測。

1.4 溶血分級 本研究根據美國臨床及實驗室標準化協會相關文件, 將溶血程度分為三類：輕度溶血類, 血清Hb濃度為0~1 g/L；中度溶血類, 血清Hb濃度為1~5 g/L；重度溶血類, 血清Hb濃度>5 g/L。

1.5 統計學方法 采用SPSS19.0統計學軟件對數據進行處理與分析。計量資料以均數± 標準差表示, 采用t檢驗；計數資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗。P＜0.05為差異具有統計學意義。

2 結果

300例健康成人體檢者胰島素水平檢測結果提示, 三組未溶血前胰島素水平檢測結果與不同程度溶血標本的胰島素水平檢測結果比較, 差異具有統計學意義(P＜0.05)；且輕、中、重度溶血標本間血清胰島素水平檢測結果比較, 差異具有統計學意義(P＜0.05)。見表1。

表1 三組不同程度溶血標本血清胰島素檢測結果分析

表1 三組不同程度溶血標本血清胰島素檢測結果分析

注：與溶血前比較,aP＜0.05；與中、重度溶血組比較,bP＜0.05；與重度溶血組比較,cP＜0.05

組別例數溶血前Ins(mU/L)溶血后Ins(mU/L)輕度溶血組100218.65±28.65 102.35±21.25abc中度溶血組100220.84±29.21 96.25±19.65ac重度溶血組100222.91±27.64 60.37±20.16a

3 討論

血液標本在其采集、儲藏、運送等一系列過程中常會造成血紅細胞破裂, 使血紅蛋白被釋放到血清之中, 導致血液標本發生溶血現象, 進而對血液檢驗結果的精準性造成極大的影響。血液標本發生溶血后, 同樣也會直接影響到血清胰島素的檢測結果, 究其主要原因：紅細胞內含有胰島素降解酶, 該酶具有較強的催化胰島素降解作用；當血液標本出現溶血現象后, IDE從紅細胞內被釋放至血清之中, 并將血清之中的胰島素分子降解, 進而直接導致臨床胰島素水平檢測結果出現誤差［3,4］。

時間分辨免疫熒光分析(TRFIA)屬一種非放射免疫標記技術, 該技術可利用鑭系金屬離子作為示蹤物, 通過時間分辨熒光測定法對那些不屬于特異熒光進行有效排除；同時, 該金屬離子還可以對一些蛋白質進行有效標記。目前, TRFIA因具有檢測靈敏度高、成本低等優勢, 已經與電化學發光免疫法等成為臨床測定胰島素水平的常用手段之一［5,6］。

本文采用時間分辨免疫熒光分析法對不同程度溶血標本中的血清胰島素水平進行了對比性研究, 結果提示：三組未溶血前胰島素水平檢測結果與不同程度溶血標本的胰島素水平檢測結果比較, 差異具有統計學意義(P＜0.05)；且輕、中、重度溶血標本間血清胰島素水平檢測差異具有統計學意義(P＜0.05)。這也進一步說明, 隨著溶血程度的不斷加大, 血清胰島素濃度也會隨之不斷下降, 因此, 在進行血清胰島素水平檢測時, 必須避免血液標本溶血現象發生；若血液標本發生溶血現象, 則應盡量選擇重新采集血液標本, 以最大程度地保障血清胰島素檢測結果的精準性。由于時間分辨免疫熒光分析法進行胰島素水平檢測時, 手工操作環節較多, 用時相對較長, 進而影響的因素也相應較多, 這就需要檢測人員在進行相關操作時, 既要保證檢測環境的溫度、儀器的清潔；同時, 還要提高檢測操作手法的嫻熟度, 最大程度地避免或減少上述因素的影響；另外, 還應加強血液標本的采集、儲藏、運輸等環節的管理, 以進一步保證血液標本的質量, 進而全面保障血清胰島素檢測的精準度［7,8］。

綜上所述, 溶血對臨床測定血清胰島素水平具有較明顯的影響, 因此, 在進行臨床血清胰島素水平檢測既要全面加強檢驗室的環境、檢測操作的規范性, 同時, 還應加強血液標本采集、儲藏、運輸等環節的質量管理, 進而保障血清胰島素檢測的精準度。

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10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.17.041

2015-02-04］

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