HCV-c Ag和HCV-Ab聯合檢測對HCV感染診斷價值的研究

林俊填 ，余晉林 ，伍偉健 ，陳展澤 ，龔道元

(1、佛山市中心血站，廣東 佛山 528000；2、佛山市第一人民醫院；3、佛山科學技術學院醫學院)

丙型肝炎是由HCV病毒感染所致，據WHO統計，全球感染率高達3%，我國一般人群HCV-Ab陽性率為3.2%[1]。丙型肝炎癥狀較輕，發展慢，不易引起重視，但易可發展為慢性肝炎、肝硬化和肝癌，已成為嚴重的公共衛生安全問題。目前尚無有效疫苗預防，臨床上也尚無特效的藥物和治療措施[2]。HCV能通過輸血傳播，因此，對獻血者嚴格篩查和臨床上早期檢出HCV感染是防止丙型肝炎傳播的有效措施。目前，絕大多數血站是通過檢測HCV-Ab來對血液進行篩查，醫院尤其中小醫院也主要通過檢測HCV-Ab來進行診斷，但對早期感染者HCV-Ab檢測容易漏診[3]。本文對門診和住院患者血液標本進行HCV-cAg、HCV-Ab及HCV-RNA聯合檢測，探討其對HCV感染的臨床價值。

1 材料與方法

1.1 實驗對象

1.1.1 丙型肝炎患者 選取佛山市第一人民醫院2013年9月至2014年9月間門診及住院患者121例，所有患者均通過HCV-RNA檢測確診，并排除其他病毒型肝炎病毒感染，符合中華醫學會肝病學會、中華醫學會傳染病學與寄生蟲學會制定的《丙型肝炎防治指南》確診標準[4]。

1.1.2 對照組 隨機選擇2014年5-7月HCV-RNA檢測陰性的120例體檢者作為對照組，且在半年后隨訪，HCV-RNA檢測均為陰性。

1.2主要儀器與試劑

1.2.1 儀器 全自動酶標分析儀型號為MLFAME24/20（瑞士哈美頓公司）；PCR熒光定量分析儀型號為ABI-7500（美國ABI公司）。

1.2.2 試劑 ⑴HCV-Ab檢測試劑：采用上海科華公司的ELISA檢測試劑盒；⑵HCV-cAg檢測試劑：采用山東萊博生物科技有限公司生產試劑盒；⑶HCV-RNA檢測試劑：中山大學達安基因股份有限公司。

1.3 方法

1.3.1 標本采集及處理 靜脈采血、離心分離血清，-70℃冰凍保存。

1.3.2 HCV-RNA檢測 采用實時熒光定量法檢測，所有操作嚴格按說明書進行。以HCV-RNA為金標準，確診患者121例血清用于后續實驗。

1.3.3 HCV-cAg檢測 設空白對照1孔，陰性、陽性對照各2孔。空白對照加入200μl樣本稀釋液，其他各孔加入100μl樣本稀釋液，陰性、陽性對照及待測標本 100μl，37℃孵育 90min，洗板 6 次，加酶結合物 200μl，37℃孵育 30min。再洗板 6次，加顯色劑200μl。 37℃避光 10min，加終止液 50μl終止顯色，10min內450nm(參考波長630nm)讀板，Cut off=NCx（陰性均值）+0.06。

1.3.4 HCV-Ab檢測 ELISA法，嚴格按試劑說明書操作。

1.3.5 統計學分析 應用SPSS統計軟件對數據進行分析，配對資料采用χ2檢驗，P＜0.05差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HCV標志物檢測結果 對121例HCV陽性患者和對照組120例體檢者分別進行HCV-Ab、HCV-cAg檢測，結果如表1、表2。

2.2 HCV-Ab和HCV-cAg的相關檢測參數計算和兩者間的檢測一致性檢驗 經計算HCV-Ab和HCV-cAg的檢測特異度分別為99.17%和100%，均具有良好的檢測特異度；HCV-Ab的檢測靈敏度為90.91%，而HCV-cAg的靈敏度為70.25%，但聯合檢測可使靈敏度得以提高 （具體見表3）；HCV-Ab和HCV-cAg的檢測敏感度存在顯著性差異（表4），而特異性兩者間無顯著性差異。另外，HCV-Ab和HCV-cAg兩指標間檢驗結果一致性經統計分析，其Kappa系數為-0.013，說明兩者之間的檢測結果無一致性。

表1 患者與對照組HCV標志物檢查結果

表2 確診患者HCV標志物檢查結果

表3 HCV-Ab、HCV-cAg單獨和聯合檢測對HCV感染的診斷價值

表4 HCV-Ab與HCV-c Ag的敏感度與特異度比較的統計學結果

3 討論

RNA是HCV感染的直接證據，RNA在HCV感染后的16～15d即可出現，RNA檢測可使窗口期大大縮短到13d，HCV-RNA檢測具有早期、敏感和特異等優點，但HCV感染后病毒血癥有持續、一過和間歇3種模式[5]，此時HCV-RNA檢測結果為陰性，一些晚期肝病患者的表達載量太少也無法檢出[6，7]；如患者曾用干擾素治療，干擾抑制HCV-RNA復制，HCV-RNA檢測結果陰性也不排除HCV感染的可能[8-10]，因此，HCV-RNA檢測也存在一定的漏診率[11，12]。還有，熒光定量PCR法檢測HCV-RNA，影響因素較多，如RNA酶污染或RNA降解等[13]，在樣品采集、儲存和檢測方面都有嚴格要求，技術上操作要求高，實驗條件嚴格，成本高、設備貴，所以，難以在常規實驗室或基層醫院推廣、普及和應用[14]。

目前，中心血站與中小醫院主要通過檢測HCV-Ab來對血液進行篩查[15-17]。HCV-Ab是HCV感染的間接依據，第3代試劑檢測HCV-Ab窗口期為66d，窗口期長，故HCV-Ab檢測時間需在感染大約70d后[18]，容易漏診早期感染患者，此外，如免疫缺陷患者、血液透析、免疫抑制劑以及其他嚴重疾病導致體內免疫低下患者，均可致體內HCV-Ab無法檢出，導致假陰性。還有，不同廠家包被的HCV抗原組成、來源和用量等不同，導致各廠家試劑靈敏度和特異度存在差異，導致檢查結果不一致，結果可能出現假陽性和假陰性，單憑HCV-Ab檢測容易漏檢。同時，HCV-Ab陽性也無法分清是既往感染還是新近感染，無法說明體內HCV病毒復制的情況，給疾病的診斷和病情判斷帶來一定的困難。因此，HCV-Ab單獨作為診斷指標還有較大的局限性。

HCV-cAg也是HCV早期感染或持續性感染的指標，一般情況下，患者HCV-cAg陽性僅比HCV-RNA在檢出時間上晚1~2d，且檢測方法易掌握，操作簡便，不需要特殊設備，可常規檢測。由于HCV-cAg檢測可明顯縮短窗口期，可為HCV早期診斷提供依據。在血站對獻血者進行HCV-cAg檢測，可增加HCV的陽性檢出率和減少HCV的傳播風險。

本文的研究結果顯示，單獨進行HCV-Ab和HCV-cAg檢測時，121例 HCV-RNA確診患者HCV-Ab和HCV-cAg兩指標的檢出陽性標本數分別為110例和85例，檢測靈敏性分別為90.91%和70.25%，HCV-cAg的靈敏性要低于HCV-Ab，兩者間存在顯著性差異；兩指標的檢測特異度分別為99.17%和100%，兩者的特異度相近，經統計學分析兩者間無顯著性統計學差異。HCV感染機體產生HCV-Ab后，發生相對應的抗原抗體結合，可使HCV-cAg檢出率降低，本文研究結果也說明HCV-cAg的檢出敏感度要低一些。因此，臨床上不可將HCV-cAg檢測完全取代HCV-Ab的檢測，將HCV-Ab和HCV-cAg兩種指標結合起來檢測，對臨床上提高HCV感染的篩查和診斷具有重要的價值。

本文的研究結果顯示HCV-Ab和HCV-cAg兩檢驗結果之間存在一定的交叉，說明兩種實驗方法之間無法相互替代。兩者聯合檢測時，敏感度和陰性預測值等指標較任一單項指標都有了一定程度的提升，而特異度無顯著性改變。

綜上所述，我們認為，對于患者進行HCV的篩查，最好是將HCV-Ab和HCV-cAg兩種指標結合起來檢測，這對臨床上診斷和預防HCV感染具有重要的價值。

[1]盧業成，江振友，鄺燕玲，等.游離丙型肝炎病毒核心抗原檢測的臨床價值探討[J].細胞與分子免疫雜志，2007，23(7)：635-637.

[2]許芳，李曉蘭，祝林.丙肝病毒核心抗原檢測對于丙型肝炎診斷的價值[J].中國實驗診斷學，2010，14(5)：713-715.

[3]陳開慧.探討三種檢測方法在丙型肝炎診斷中的價值[J].免疫學雜志，2011，27(4)：319-321.

[4]中華醫學會肝病學分會，中華醫學會傳染病與寄生蟲病學分會.丙型肝炎防治指南[J].中華傳染病雜志，2004，22(2)：131-136.

[5]譚春澤.丙型肝炎病毒核心抗原檢測應用于無償獻血者篩檢的評價[J].中國輸血雜志，2014，27(12)：1312-1314.

[6]Nothdurft FP，Motter PJ，Pospiech PR.Effect of surface treatment on the initial bond strength of different luting cements to zirconium oxide ceramic[J].Clin Oral Invest，2009，13(2)：229-235.

[7]Della Bona A，Anusavice KJ，Hood JA.Effect of ceramicsurface treatmenton tensilebond strength to a resin cement[J].Int J Prosthodont，2002，15(3)：248-253.

[8]Shimakami T，Lanford RE，Lemon SM.Hepatitis C：recent successes and continuing challenges in the development of improved treatment modalities[J].Curr Opin Pharmacol，2009，9(5)：537-544.

[9]Kurbanov F，Tanaka Y，Elkady A，et al.Tracing hepatitis C and Delta viruses to estimate their contribution in HCCrates in Mongolia[J].Viral Hepat，2007，14(9)：667-674.

[10]Fabrizi F，Donato F，Messa P.HepatitisC virus infection and glomerular disease[J].Minerva Urol Nefrol，2014，66(2)：139-149.

[11]Wu D，Liu F，Liu H，et al.Detection of serum HCV RNA in patients with chronic hepatitis Cby transcription mediated amplification and real-time reverse transcription polymerase chain reaction[J].Zhong Nan Da Xue Xue Bao Yi Xue Ban，2014，39(11)：664-672.

[12]Alidjinou EK，Moukassa D，Ebatetou-Ataboho E，et al.Higher levels of hepatitis Cvirus RNA found in blood donors co-infected with HIV as compared to HCV mono-infected donors[J].Infect Dev Ctries，2014，8(8)：1068-1071.

[13]Salado-Rasmussen K，Knudsen A，Krarup HB，et al.Undetectable hepatitis C virus RNA during syphilis infection in two HIV/HCV-co-infected patients[J].Scand JInfect Dis，2014，46(9)：617-623.

[14]趙龍友，紀勇平，譚曉霞．丙肝病毒核心抗原檢測的臨床應用價值探討[J]．中國輸血雜志，2013，26(9)：943-944．

[15]劉忠.婁底市無償獻血者抗-HCV血液檢測結果分析[J].實驗與檢驗醫學，2010，28(3)：321.

[16]彭澤軍.丙型肝炎患者血清中HCV抗體、HCV-RNA、ALT聯合檢測及臨床意義[J].實驗與檢驗醫學，2011，29(6)：635-636.

[17]歐陽玲，黃建國，謝秀華，等.無償獻血人群HCV感染的檢測和輸血殘余風險分析[J].實驗與檢驗醫學，2010，28(4)：344-348.

[18]Zeisel MB，Turek M，Baumert TF.Getting closer to the patient：Upgrade of hepatitis Cvirus infection in primary human hepatocytes[J].JHepatol，2010，53(2)：388-389.