辛伐他汀對膿毒癥并發(fā)ARDS患者CDCD調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響

戴新貴 付春來 蔡業(yè)平 張圣岸 黎艷暉

戴新貴 付春來 蔡業(yè)平 張圣岸 黎艷暉

目的研究辛伐他汀對膿毒癥并發(fā)急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）患者外周血CDCD調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（Treg）的影響。方法65例膿毒癥患者隨機分為辛伐他汀治療組（n=32）和對照組（n=33）。采集患者入選研究后的外周血行白細(xì)胞計數(shù)（WBC）， C反應(yīng)蛋白（CRP）， 降鈣素原（PCT）檢測來反映患者的感染程度， 同時記錄急性生理和慢性健康（APACHE Ⅱ）評分， 流式細(xì)胞術(shù)（FCM）檢測各組入選時、1、3、5、7、14 d的外周血CDCDTreg的水平。結(jié)果兩組間的一般資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。辛伐他汀治療組的CDCDTreg在T淋巴細(xì)胞中的百分比逐漸下降， 第14天兩組間比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義［（7.32±1.86）% VS （10.01±5.63）%， t=2.568， P=0.013）］。結(jié)論辛伐他汀能改善膿毒癥并發(fā)ARDS患者Treg過多的現(xiàn)象， 起到調(diào)節(jié)免疫紊亂的功能。

辛伐他汀；膿毒癥；急性呼吸窘迫綜合征；調(diào)節(jié)性T細(xì)胞；流式細(xì)胞術(shù)

膿毒癥（sepsis）是感染引起的全身炎癥反應(yīng)綜合征（SIRS），膿毒癥的進一步發(fā)展可導(dǎo)致膿毒性休克和多器官功能障礙綜合征（MODS）［1］， 有研究證明免疫紊亂狀態(tài)時是膿毒癥發(fā)展為MODS主要的機制之一［2］。CDCD調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（regulatory T cell， Treg）是目前研究最為深入的天然Treg， 膿毒癥體內(nèi)過多的Treg， 介導(dǎo)了膿毒癥的免疫抑制功能［3］， 被認(rèn)為和膿毒癥誘導(dǎo)MODS有關(guān)［4］。膿毒癥誘導(dǎo)的急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome， ARDS）是膿毒癥在肺部的臨床表現(xiàn)［5］。研究證明他汀類藥物可有效控制膿毒癥體內(nèi)炎癥水平， 降低病死率［6，7］， 但具體機制尚未闡明， 因此本研究探討辛伐他汀對膿毒癥并發(fā)ARDS患者CDCD調(diào)節(jié)性T細(xì)胞的影響， 為膿毒癥的免疫調(diào)節(jié)治療提供新的理論依據(jù)。現(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年8月～2014年8月本院重癥醫(yī)學(xué)科收治的65例膿毒癥并發(fā)ARDS患者， 男41例（63.08%）， 女24例（36.92%）， 年齡19～87歲， 平均年齡（59.52±19.31）歲；原發(fā)病構(gòu)成：下呼吸道感染19例（29.23%）， 腹腔感染16例（24.62%）， 外傷15例（23.08%）， 泌尿系統(tǒng)感染8例（12.31%），其他7例（10.77%）。膿毒癥診斷參考膿毒癥運動2012標(biāo)準(zhǔn)［8］，ARDS診斷標(biāo)準(zhǔn)參考柏林會議2012標(biāo)準(zhǔn)［9］。排除標(biāo)準(zhǔn)：①惡性腫瘤。②基礎(chǔ)疾病有嚴(yán)重臟器功能不全。③3個月內(nèi)服用過免疫抑制劑藥物和（或）激素。數(shù)字隨機法將65例患者分為辛伐他汀治療組（n=32）和對照組（n=33）。

1.2 研究方法 收集患者入院研究時的一般資料（包括年齡、性別、病因構(gòu)成、病原菌構(gòu)成、是否機械通氣等）， 采集外周血行WBC， CRP， PCT監(jiān)測來反映患者的感染程度， 同時記錄APACHE Ⅱ評分反映患者的疾病嚴(yán)重程度。對照組按照膿毒癥運動2012年指南給予治療， 包括液體復(fù)蘇， 抗生素治療， 器官支持等；治療組在對照組的基礎(chǔ)上胃腸道給予辛伐他汀10 mg， 1次/d。收集各組患者入選時、1、3、5、7、14 d的外周血送檢。

1.3 Treg分離及檢測 外周血標(biāo)本1500 r/min離心4 min，棄血清加入PBS混勻至3 ml， 加入6 ml 淋巴細(xì)胞分離液上層3000 r離心15 min后取中層白色細(xì)胞。再次離心后計數(shù)，加入PE標(biāo)記抗大鼠CD25單克隆抗體（5 μl/106）孵育15 min，1800 r/min離心10 min后加入抗PE磁珠（20 μl/107）， 進行磁珠分選， 陽性選擇獲得CDT細(xì)胞。解離試劑（20 μl/ml）解離10 min后再次磁珠分選， 陰選細(xì)胞后加入終止試劑（30 pl/ml），同時加入FITC標(biāo)記抗大鼠CD4（10 μl/ml）孵育15 min。再加入CD磁珠孵育15 min， 離心后磁珠分選， 陽選即得CDCD4Treg。FCM檢測雙陽性細(xì)胞的含量。PE-CD25抗體、FITCCD4抗體-CD4磁珠、大鼠抗PE試劑盒購自美國BD公司，F(xiàn)ACS流式細(xì)胞儀：美國Becton-Dickinsion公司。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學(xué)軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)分析。計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（ -x±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的一般資料比較 兩組患者在入選本研究時的性別、年齡、病因構(gòu)成比、病原菌構(gòu)成、機械通氣、WBC等比較， 差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。見表1。

圖1 兩組外周血的CDCDTreg比較

表1 兩組患者的一般資料比較［n， x-±s， n（%）］

3 討論

膿毒癥的發(fā)生發(fā)展涉及到復(fù)雜的機體全身炎癥網(wǎng)絡(luò)效應(yīng)、免疫功能障礙以及宿主對不同感染病原微生物及其毒素的異常反應(yīng)等多個方面。膿毒癥時機體過度的炎癥反應(yīng)， 形成 “瀑布效應(yīng)”， 進一步發(fā)展可誘發(fā)嚴(yán)重膿毒癥、膿毒性休克和MODS， 最終導(dǎo)致患者死亡［1］。免疫功能紊亂在膿毒癥發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用， 膿毒癥機體失控性全身炎癥和免疫機能紊亂密切相關(guān)， 目前認(rèn)為炎癥與免疫反應(yīng)障礙在膿毒癥中并不僅僅表現(xiàn)為“過度炎癥反應(yīng)”， 還同時呈現(xiàn)“免疫功能抑制”， 表現(xiàn)為“克隆無反應(yīng)狀態(tài)”， 最終可能發(fā)展為“免疫麻痹”［3］。ARDS是以肺毛細(xì)血管通透性升高、嚴(yán)重低氧血癥和雙肺彌漫性改變?yōu)樘卣鞯呐R床急重癥， 病情兇險， 病死率高［10］。ARDS的本質(zhì)是炎癥， 是全身炎癥反應(yīng)綜合征（SIRS）在肺部的表現(xiàn)， 其致病因子激活了炎癥體液因子， 從而導(dǎo)致了體內(nèi)過度的炎癥反應(yīng)， 進一步發(fā)展為MODS。膿毒癥體內(nèi)存在過多的CDCDTreg， 通過細(xì)胞直接接觸機制、誘導(dǎo)凋亡和釋放細(xì)胞因子作用于效應(yīng)T細(xì)胞三種途徑發(fā)生免疫抑制作用。CDCDTreg高表達叉頭框蛋白3（FOXP3）、細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞相關(guān)抗原-4（CTLA-4）和糖皮質(zhì)激素誘導(dǎo)的腫瘤壞死因子受體（GIFR）， 各自或共同通過不同途徑發(fā)揮抑制效應(yīng)T細(xì)胞功能［11］。

近年研究發(fā)現(xiàn)， 他汀類藥物除了傳統(tǒng)的調(diào)脂功能外， 還具有抗炎、調(diào)節(jié)免疫功能、抗氧化、穩(wěn)定血管內(nèi)皮細(xì)胞等作用［6，7，12］。本研究通過隨機對照的方法， 觀察辛伐他汀治療膿毒癥并發(fā)ARDS患者， 對外周血CDCDTreg在T淋巴細(xì)胞中的百分比， 結(jié)果表明辛伐他汀能改善膿毒癥并發(fā)ARDS患者2周后的體內(nèi)Treg過多的現(xiàn)象， 起到調(diào)節(jié)免疫紊亂的功能， 但本研究局限于Treg數(shù)量的研究， 對于Treg表明標(biāo)志物（如FOXP3、CTLA-4、GIFR）和分泌功能［白介素-10（IL-10）、轉(zhuǎn)化生長因子-β（TGF-β）］及對效應(yīng)T細(xì)胞免疫功能（細(xì)胞增殖、Th細(xì)胞極化、分泌功能）的影響還需進一步研究。

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Influence of simvastatin on CD4+CD25+regulatory T cell in patients of sepsis complicated with ARDS

DAI Xin-gui, FU Chun-lai, CAI Ye-ping, et al.
Department of Intensive Care Unit, Hunan Chenzhou City the First People’s Hospital, Chenzhou 423000, China

Objective To explore the influence of simvastatin on CD4+CDregulatory T cell （Treg） in patients of sepsis complicated with acute respiratory distress syndrome （ARDS）.MethodsA total of 65 sepsis patients were randomly divided into simvastatin treatment group （n=32） and control group （n=33）.Their peripheral blood white blood count （WBC）， C-reactive protein （CRP） and procalcitonin （PCT） were collected and detected to show their infection degree.Their acute physiology score （APACHE Ⅱ） were recorded， and their peripheral blood CDCD25+Treg levels were detected by flowcytometry （FCM） in admission time， and 1， 3， 5， 7， 14 d.ResultsThere was no statistically significant difference of general information between the two groups （P＞0.05）.The CDCDTreg levels had decreasing percentage in T lymphocyte in the simvastatin treatment group.On 14 d，the difference between the two groups had statistical significance ［（7.32±1.86）% VS （10.01±5.63）%， t=2.568，P=0.013）］.ConclusionSimvastatin can improve the Treg redundance in patients of sepsis complicated with ARDS， and it has regulation function for immunologic derangement.

Simvastatin; Sepsis; Acute respiratory distress syndrome; Regulatory T cell; Flowcytometry

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.07.003

2014-10-08］

423000 湖南郴州市第一人民醫(yī)院重癥醫(yī)學(xué)科-1