Xpert Mtb/RIF技術在結核病診斷及耐藥檢測中的應用

楊蘊華 韓中波

Xpert Mtb/RIF技術在結核病診斷及耐藥檢測中的應用

楊蘊華 韓中波

目的評價Xpert Mtb/RIF檢測技術在檢測臨床標本診斷結核病及利福平耐藥檢測中的應用價值。方法對1128例初診肺結核可疑患者痰標本進行涂片鏡檢， 改良羅氏培養和Xpert Mtb/RIF檢測， 評價各種方法結核桿菌檢測靈敏度、傳統藥敏方法和Xpert Mtb/RIF檢測利福平耐藥性的對比分析。結果臨床診斷結果作為最終標準， 涂片鏡檢的陽性率為24.0%、改良羅氏培養方法的陽性率為42.6%、Xpert Mtb/RIF技術的陽性率為49.4%；以傳統藥敏方法為標準， Xpert Mtb/RIF檢測利福平耐藥性的靈敏度為89.5%、特異性為97.6%。結論Xpert Mtb/RIF技術檢測結核桿菌有較高的靈敏度， 同時還可以檢測結核桿菌對利福平的藥敏結果， 方法簡單、操作便捷、安全， 在基層結核病防治機構具有較高的應用價值。

Xpert Mtb/RIF技術；結核病；耐藥檢測

結核病是嚴重危及全球的公共衛生問題之一。目前耐藥、流動人口和HIV感染已經成為當今結核病控制所面臨的三大難題， 其中結核桿菌耐藥性市我國結核病控制中起主要限制性作用的因素。結核病、耐藥結核病的實驗室診斷技術相對滯后。目前， 涂片鏡檢、改良羅氏培養、傳統比例法藥敏仍然是我國基層實驗室的主要診斷手段， 抗酸染色涂片鏡檢方法敏感性較低， 只有30%左右， 傳統固體培養及藥物敏感性檢測時間較長（需2～3個月）， 難以實現對結核病、耐藥結核病的早期診斷和及時治療。亟需引進新的實驗室技術輔助結核病、耐藥結核病的診斷。近年來隨著分子生物學診斷技術的發展， Xpert Mtb/RIF技術利用實時熒光定量核酸檢測技術檢測結核桿菌， 同時檢測利福平是否耐藥， 逐漸被廣泛關注。Xpert Mtb/RIF技術使用半定量巢氏熒光PCR， 該方法針對結核桿菌利福平耐藥決定區rpoB基因設定引物、探針， 進行擴增檢測， 根據其是否發生基因突變， 來檢測標本中是否含有結核桿菌及結核桿菌是否對利福平耐藥， 整個過程只需2～3 h。前處理后的實驗過程均在Xpert Mtb/RIF儀器中進行，反應結束自動給出實驗結果。

本文針對初診肺結核可疑患者痰標本進行涂片鏡檢， 改良羅氏培養和Xpert Mtb/RIF檢測， 評價各種方法結核桿菌檢測靈敏度、傳統藥敏方法和Xpert Mtb/RIF檢測利福平耐藥性的對比分析。對Xpert Mtb/RIF檢測技術應用價值進行分析。

1 材料與方法

1.1 材料 2012年10月～2014年8月期間吉林市結核病防治研究所及吉林市各縣區所收治的結核病患者或疑似結核病患者共1128份痰標本。

1.2 檢測方法 對1128份痰標本進行抗酸染色涂片檢測、改良羅氏培養基培養， 中性羅氏培養基比例法藥敏操作及結果判定。其操作均按《結核病診斷細菌學檢驗規程》進行。

Xpert Mtb/RIF檢測， 取1 ml痰標本置放到前處理管中，加入相當于痰標本2倍體積的痰標本處理液， 將前處理管劇烈搖動或者在渦旋振蕩器上震蕩20 s， 無可見塊狀痰標本， 靜置15 min。

使用專用無菌吸管， 將取2 ml處理后樣品由加樣孔緩慢加入Cartridge反應盒內。將Cartridge反應盒放入其中， 關上模塊， 檢測開始。反應結束后， 在Xpert Dx系統窗口查看結果。

1.3 檢測指標 MTB 檢出極低：CT值＜16， MTB 檢出低: CT值=16～22， MTB 檢出中等：CT值=22～28 ， MTB 檢出高: CT值＞28。

RIF resistance 檢出：利福平耐藥（R）RIF resistance 未檢出：利福平敏感（S）RIF resistance 不確定：利福平耐藥結果無法判讀。

2 結果

2.1 1128例初診肺結核可疑患者， 經X線、CT、實驗室檢查，臨床最終確診肺結核病413例， 確診率為36.6%。

2.2 Xpert Mtb/RIF檢測結核桿菌應用價值的評價 對1128例初診肺結核可疑患者痰標本進行涂片鏡檢， 改良羅氏培養和Xpert Mtb/RIF檢測陽性率分別為24.0%（99/413）、42.6%（176/413）、49.4%（204/413）。Xpert Mtb/RIF檢測陽性率高于涂片鏡檢， 改良羅氏培養法。

2.3 Xpert Mtb/RIF檢測利福平耐藥的應用價值 Xpert Mtb/ RIF檢測結果報告時間只需2～3 h， 遠遠低于培養（2個月）、培養藥敏（3個月）的報告時間。Xpert Mtb/RIF檢測利福平耐藥與傳統方法比較， 敏感度為89.5%、特異性為97.6%。見表1。

表1 Xpert Mtb/RIF檢測利福平耐藥與傳統方法比較（n）

3 討論

我國是結核病高發地區， 2010年結核病流調結果顯示，我國活動性肺結核患病率為459/10萬， 結核病耐藥情況嚴重，對結核病、耐藥結核病的早期診斷和及時治療尤為重要， 基層實驗室對結核病的主要診斷手段還主要是涂片、培養。涂片的低敏感性、培養及藥敏報告的時效性， 難以實現結核病的早期診斷和及時治療。近年來， Xpert Mtb/RIF檢測系統逐漸在基層推廣使用， 本文對Xpert Mtb/RIF檢測技術在檢測臨床標本診斷結核病及利福平耐藥檢測中的應用價值進行評價。

Xpert Mtb/RIF核酸檢測采用Cepheid公司GeneXpert檢測系統， 是一種半巢式實時熒光定量PCR體外診斷技術， 針對rpoB基因81bp利福平耐藥核心區間（RRDR）設計引物、探針， 檢測其是否發生突變， 診斷患者是否結核以及是否對利福平耐藥。本研究Xpert Mtb/RIF檢測陽性率為49.4%， 高于涂片鏡檢、改良羅氏培養法的陽性檢出率， 且時間遠遠小于培養（6～8周）。Xpert Mtb/RIF檢測利福平耐藥與傳統方法比較， 敏感度為89.5%、特異性為97.6%。表明Xpert Mtb/ RIF技術的臨床應用價值較高， 可以對肺結核的早期診斷及合理規范治療起到很好作用。

Xpert Mtb/RIF檢測技術是世衛組織認可的一種全新的結核病快速檢測新方法， 具有簡單， 僅需1個步驟的準備工作；快捷， 只需2 h可得出報告；生物安全要求低， 具備生物安全柜就可操作。同時具有較高的陽性檢出率， Xpert Mtb/RIF檢測利福平耐藥與傳統方法比較， 有較高的敏感性和特異性，在基層結核病防治機構具有較高的應用價值。

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.07.139

2014-11-05］

132011 吉林市結核病防治研究所