鮮馬奶粉的體內(nèi)抗氧化活性*

古麗巴哈爾·卡吾力，高曉黎，常占瑛，謝湘云，王玲

(新疆醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院，新疆烏魯木齊，830011)

馬奶含有的營(yíng)養(yǎng)素能迅速溶解在水中，呈均勻的乳膠狀，容易被人體消化吸收。目前馬奶的研究以酸馬奶對(duì)心血管疾病、神經(jīng)性疾病、消化系統(tǒng)疾病、肺結(jié)核及肺氣腫的治療為主。但鮮馬奶粉保健功能鮮見(jiàn)報(bào)道。近幾年人們保健意識(shí)的增強(qiáng)以及特色乳產(chǎn)品的上市使得人們逐漸認(rèn)識(shí)到馬奶的醫(yī)學(xué)價(jià)值。馬奶中含有的多種抗體具有增強(qiáng)人體對(duì)抗細(xì)菌和病毒的作用。在營(yíng)養(yǎng)結(jié)構(gòu)上，馬奶是與母乳最接近的天然飲品，天天喝能延年益壽。因而，經(jīng)常建議讓早產(chǎn)兒喝馬奶，以增強(qiáng)其免疫力。大約在20世紀(jì)90年代，我國(guó)逐步開展馬奶產(chǎn)品的開發(fā)與利用。

利用馬奶可開發(fā)馬奶酒、酸馬奶、馬奶啤酒、馬奶露、馬奶粉等產(chǎn)品，但一致認(rèn)為馬奶具有高乳糖的特點(diǎn)，適宜于生產(chǎn)發(fā)酵乳制品。因此產(chǎn)品僅以傳統(tǒng)發(fā)酵酸馬奶為主。通過(guò)噴霧干燥方法制備的鮮馬奶粉，其外觀良好、極易溶解、性質(zhì)穩(wěn)定、具有濃郁的奶香味、使用方便。解決了鮮馬奶易發(fā)酵酸敗，儲(chǔ)存時(shí)間短，獲取困難等問(wèn)題。

本研究通過(guò)采用皮下注射D-半乳糖建立小鼠氧化損傷模型，測(cè)定小鼠血清中超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)等抗氧化酶系統(tǒng)，研究鮮馬奶粉抗氧化作用。

1 材料與方法

1.1 材料與試劑

清潔級(jí)昆明小鼠72只，清潔級(jí)，18～22 g左右，雌雄各半，購(gòu)自新疆醫(yī)科大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心，許可證號(hào):SCXK(新)2003－001。

鮮馬奶粉，新疆特豐藥業(yè)有限公司提供;超氧化物歧化酶(SOD)、過(guò)氧化氫酶(CAT)、谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)、丙二醛(MDA)檢測(cè)試劑盒，南京建成生物工程有限公司生產(chǎn);D-半乳糖，Sigma公司;其他試劑均為分析純。

1.2 儀器與設(shè)備

UV-9100型紫外分光光度計(jì)，北京萊伯泰科儀器有限公司;實(shí)驗(yàn)室小型噴霧干燥機(jī)，日本東京理化器械株式會(huì)，F(xiàn)DU-2100;旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海愛(ài)朗儀器有限公司，EYELA SB-1000型。

1.3 實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1 動(dòng)物分組及給藥

小鼠飼養(yǎng)溫度18～26℃，相對(duì)濕度45% ～65%，自由采食，飼養(yǎng)一周后根據(jù)體重將小鼠隨機(jī)分為6組:空白對(duì)照組，模型對(duì)照組、陽(yáng)性對(duì)照組，鮮馬奶粉高劑量組、鮮馬奶粉中劑量、鮮馬奶粉低劑量組，每組12只。除了空白組外，其他組每日腹腔注射D-半乳糖80 mg/kg，空白組注射同劑量的生理鹽水，為期15 d。從第16天開始，注射D-半乳糖的同時(shí)，陽(yáng)性對(duì)照組每日灌胃1 g/kg的Vc，3個(gè)鮮馬奶粉組灌胃120、80、40 mg/kg的鮮馬奶粉進(jìn)行干預(yù)，45 d后處死動(dòng)物，測(cè)定生化指標(biāo)。干預(yù)期間每10 d稱重。

1.3.2 測(cè)試樣品的準(zhǔn)備

于末次造模給藥結(jié)束24 h后，稱量小鼠體重，眼眶取血，脫臼處死小鼠取脾臟、肝臟。血漿在40℃放置30 min、3 000 r/min進(jìn)行離心，分離血清，備用。脾臟、肝臟，稱取0.1 g，按照質(zhì)量與體積比1∶9比例加入0.9%生理鹽水，冰浴條件下，機(jī)械勻漿，制成10%的勻漿液，2 500～3 000 r/min，取上清液備用。按照南京建成測(cè)試試劑盒黃嘌呤氧化酶(XOD)、髓過(guò)氧化物酶(MPO)、蛋白質(zhì)(考馬斯亮藍(lán)染色法)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)、谷胱甘肽(GSH)、一氧化氮(NO)的說(shuō)明書要求分別測(cè)定血清和組織中的上述指標(biāo)活力和含量。

1.4 數(shù)據(jù)處理

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理組小鼠體重的影響

不同給藥組給藥在給藥期間測(cè)定小鼠體重，其變化見(jiàn)表1。表1顯示，在給藥45 d期間，前10 d體重變化不明顯，從第20天開始除了模型組小鼠體重有所減少，其余組小鼠體重有逐漸增加趨勢(shì)。模型組與其他5組小鼠體重對(duì)比有顯著性差異，但5組彼此之間無(wú)顯著性差異。說(shuō)明氧化損傷對(duì)小鼠體重變化有一定程度的影響，鮮馬奶粉灌胃有益于氧化損傷小鼠恢復(fù)。

表1 不同處理組小鼠體重的變化(±s，n=12)Table 1 In the different groups of mice weight(±s，n=12)

表1 不同處理組小鼠體重的變化(±s，n=12)Table 1 In the different groups of mice weight(±s，n=12)

注:“* ”，與模型組相比 P＜0.05。

組別 劑量體重變化/g 0天 10天 20天 30天 40天 45天空白對(duì)照組 0 19.92±0.23 21.11±1.23 24.62±0.70 27.12±1.06 33.22±1.46 39.22±0.76*模型組 0 20.71±0.24 19.91±1.03 19.12±0.99 18.81±1.08 18.18±1.06 17.92±1.23*陽(yáng)性對(duì)照組 1g/kg 19.56±0.68 22.94±1.31 23.74±1.06* 28.42±0.98* 33.57±1.58* 41.13±1.56*馬奶粉高劑量組 120mg/kg 20.84±0.63 23.56±1.26 26.23±1.03* 31.21±1.23* 36.19±1.47* 43.14±1.66*馬奶粉中劑量組 80mg/kg 20.63±0.75 23.03±0.98 24.94±1.06* 30.31±1.25* 34.65±0.79* 42.35±1.54*馬奶粉低劑量組 40mg/kg 20.21±0.86 23.15±0.96 24.57±1.35* 31.05±0.96* 36.14±1.69* 42.44±1.63*

2.2 不同處理組對(duì)小鼠血清中各抗氧化指標(biāo)的影響

不同處理組對(duì)小鼠血清抗氧化指標(biāo)的影響見(jiàn)表2。除了空白對(duì)照組外，其余5組皮下注射D-半乳糖后血清中 NO、MDA、NOS、MPO、XOD 量明顯增加，而GSH、SOD的量明顯減少，說(shuō)明造模成功。從表2可以看出，模型組與其他組相比具有顯著性差異(P＜0.05)，即陽(yáng)性組和各給藥組血清中 NO、MDA、NOS、MPO、XOD量減少，GSH、SOD的量明顯增加，并且各實(shí)驗(yàn)組之間也有顯著性差異，具有一定的濃度依賴性。僅空白對(duì)照組與鮮馬奶粉低劑量組之間無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，量較低時(shí)其抗氧化活性不明顯。說(shuō)明鮮馬奶粉在一定濃度范圍內(nèi)具有一定抗氧化活性。

2.3 不同處理組對(duì)小鼠肝臟及脾臟中各抗氧化指標(biāo)的影響

不同處理組對(duì)小鼠肝臟及脾臟中抗氧化測(cè)定指標(biāo)的影響見(jiàn)表3、表4。從表3、表4可以看出，不同處理方法對(duì)氧化損傷小鼠的保護(hù)有不同程度的改善。不同劑量鮮馬奶粉對(duì)氧化損傷小鼠具有不同程度的保護(hù)作用，并且有一定濃度依賴性，與模型組、陽(yáng)性對(duì)照組及空白對(duì)照組對(duì)比具有顯著性差異(P＜0.01)。其中鮮馬奶粉高劑量組抗氧化活性大于陽(yáng)性對(duì)照組，差異具有顯著性(P＜0.01)。鮮馬奶粉低劑量組與陽(yáng)性組對(duì)比無(wú)顯著性差異(P＞0.05)，但與模型組有顯著性差異(P ＜0.05)。其中 NO、MDA、MPO、XOD、TNOS、INOS明顯減少，而GSH、SOD明顯增加，并差異顯著。

3 結(jié)論

機(jī)體處于缺氧狀態(tài)時(shí)，機(jī)體內(nèi)半乳糖濃度升高，在醛糖還原酶作用下，還原成半乳糖醇，破壞機(jī)體抗氧化防御系統(tǒng)，同時(shí)在半乳糖被還原成半乳糖醇的過(guò)程中也產(chǎn)生超氧陰離子，過(guò)氧化物脂質(zhì)增加，出現(xiàn)衰老。小鼠皮下注射D-半乳糖后血清及組織當(dāng)中NO、MDA、NOS、MPO、XOD 量明顯增加，而 GSH、SOD 的量明顯減少，說(shuō)明動(dòng)物氧化損傷模型成立。灌胃給予45天鮮馬奶粉后機(jī)體開始恢復(fù)，抗氧化測(cè)定指標(biāo)產(chǎn)生明顯變化［5－7］。

表2 不同處理組對(duì)小鼠血清抗氧化測(cè)定指標(biāo)的影響(，n=12)Table 2 Different treatment group effect on the determination of serum antioxidant indexes in mice(，n=12)

表2 不同處理組對(duì)小鼠血清抗氧化測(cè)定指標(biāo)的影響(，n=12)Table 2 Different treatment group effect on the determination of serum antioxidant indexes in mice(，n=12)

注:“＊＊”，與模型組對(duì)比P＜0.01;“▲”，與空白組對(duì)比P＜0.05。

組別血清超氧化物歧化酶(SOD)/(U·L －1)一氧化氮(NO)/(U·L －1)黃嘌呤氧化酶(XOD)/(U·L －1)髓過(guò)氧化物酶(MPO)/(U·L－1)一氧化氮合酶(INOS)/(U·mL－1)一氧化氮合酶(TNOS)/(U·mL－1)丙二醛(MDA)/(mol·mL －1)谷胱甘肽(GSH)/(mg·mL －1)空白對(duì)照組 73.33±0.134 61.31±2.58 29.76±1.12 30.36±1.71*21.34±0.93 11.40±1.57 21.14±0.44 3.35±0.46模型組 41.24±1.24 98.38±4.17 43.14±.1.33 42.78±1.16 36.45±5.12 26.38±2.49 39.94±1.20 1.69±0.88陽(yáng)性對(duì)照組 115.65±2.36＊＊▲＊ 18.84±3.52＊＊▲ 22.53±0.82＊＊▲ 20.56±1.72＊＊▲ 6.03±2.34＊＊▲ 4.64±1.63＊＊▲ 13.93±1.18＊＊▲ 12.31±1.34＊＊▲馬奶粉高劑量 126.99±3.24＊＊▲ 21.08±3.82＊＊▲ 20.36±0.78＊＊▲ 24.04±1.02＊＊▲ 13.34±1.30＊＊▲ 5.31±1.25＊＊▲ 4.16±1.58＊＊▲ 11.91±2.10＊＊▲馬奶粉中劑量 106.36±2.33＊＊▲ 40.52±6.84＊＊▲ 26.96±0.92＊＊▲ 27.55±1.48＊＊▲ 20.70±1.69＊▲＊ 11.28±1.76＊＊▲ 7.21±1.01＊＊▲ 7.08±0.33＊＊▲馬奶粉低劑量 89.66±1.65＊＊▲ 68.03±1.09＊＊▲ 25.41±0.36＊＊▲ 34.38±1.94＊＊▲ 25.97±0.85＊＊▲ 19.64±2.23＊＊▲ 20.53±6.35＊＊▲ 5.01±0.46＊＊▲

表3 不同處理對(duì)小鼠肝臟抗氧化測(cè)定指標(biāo)的影響(，n=12)Table 3 Different treatment effects on mice liver antioxidant measurement indicators(，n=12)

表3 不同處理對(duì)小鼠肝臟抗氧化測(cè)定指標(biāo)的影響(，n=12)Table 3 Different treatment effects on mice liver antioxidant measurement indicators(，n=12)

注:“＊＊”，與模型組對(duì)比P＜0.01;“*”與模型組對(duì)比P＜0.05;“▲”，與空白組對(duì)比P＜0.05。

組別肝臟超氧化物歧化酶(SOD)/(U·mg－1蛋白)一氧化氮(NO)/(U·mg－1蛋白)黃嘌呤氧化酶(XOD)/(U·mg－1蛋白)髓過(guò)氧化物酶(MPO)/(U·g－1濕重)一氧化氮合酶(INOS)/(U·g－1濕重)一氧化氮合酶(TNOS)/(U·g－1濕重)丙二醛(MDA)/(n mol·mg－1蛋白)谷胱甘肽(GSH)/(mg·g－1蛋白)空白對(duì)照組 43.34±1.22* 7.74±0.56* 6.48±0.21* 2.42±0.092* 0.13±0.029* 0.16±0.039 5* 16.36±0.48* 2.91±0.05*模型組 21.12±3.64 20.31±4.17 10.33±0.36 1.98±0.23 0.49±0.040 0.53±0.035 1 22.24±1.25 1.86±0.36陽(yáng)性對(duì)照組 65.56±2.65＊＊▲ 1.52±0.86＊＊▲ 5.01±0.22＊＊▲ 0.47±0.07＊＊▲ 0.033±0.001＊＊▲ 0.056±0.035 1＊＊▲ 5.67±0.66＊＊▲ 4.04±0.16＊＊▲馬奶粉高劑量 86.33±1.44＊＊▲ 2.28±0.48＊＊▲ 6.16±0.42＊＊▲ 1.64±0.24＊＊▲ 0.072±0.021＊＊▲ 0.11±0.015 1＊＊▲ 8.46±1.14＊＊▲ 3.53±0.21＊＊▲馬奶粉中劑量 66.27±1.28＊＊▲ 6.53±1.18＊＊▲ 7.43±0.32＊＊▲ 2.43±0.076＊＊▲ 0.13±0.044＊＊▲ 0.16±0.030 6＊＊▲ 13.26±2.06＊＊▲ 2.98±0.15＊＊▲馬奶粉低劑量 49.36±1.87* 11.14±0.67* 8.08±0.28* 2.56±0.03* 0.26±0.023* 0.25±0.032 2* 15.68±0.18* 2.40±0.25*

表4 不同處理對(duì)小鼠脾臟抗氧化測(cè)定指標(biāo)的影響(，n=12)Table 4 Different treatments on the spleen of mice antioxidant measurement indicators(，n=12)

表4 不同處理對(duì)小鼠脾臟抗氧化測(cè)定指標(biāo)的影響(，n=12)Table 4 Different treatments on the spleen of mice antioxidant measurement indicators(，n=12)

注:“＊＊”，與模型組對(duì)比P＜0.01;“*”與模型組對(duì)比P＜0.05;“▲”，與空白組對(duì)比P＜0.05。

組別脾臟超氧化物歧化酶(SOD)/(U·mg－1蛋白)一氧化氮(NO)/(U·g－1蛋白)黃嘌呤氧化酶(XOD)/(U·g－1濕重)髓過(guò)氧化物酶(MPO)/(U·g－1濕重)一氧化氮合酶(INOS)/(U·g－1濕重)一氧化氮合酶(TNOS)/(U·g－1濕重)丙二醛(MDA)/(n mol·mg－1蛋白)谷胱甘肽(GSH)/(mg·g－1蛋白)空白對(duì)照組 23.22±0.66* 6.13±0.36* 11.86±0.88* 2.42±0.092* 2.63±0.051* 0.250±0.033* 11.05±0.48* 1.97±0.22*模型組 11.36±1.87 9.06±0.54 25.26±1.72 1.98±0.23 3.55±0.057 0.55±0.069 13.76±0.66 0.78±0.40陽(yáng)性對(duì)照組 35.57±1.66＊＊▲ 0.22±0.097＊＊▲ 9.10±0.39＊＊▲ 0.47±0.066＊＊▲ 2.045±0.12＊＊▲ 0.031±0.022＊＊▲ 4.65±0.49＊＊▲ 4.46±0.51＊＊▲馬奶粉高劑量 66.69±2.33＊＊▲ 0.62±0.15＊＊▲ 10.10±0.30＊＊▲ 1.64±0.24＊＊▲ 2.29±0.046＊＊▲ 0.056±0.012＊＊▲ 4.82±0.33＊＊▲ 4.02±0.29＊＊▲馬奶粉中劑量 46.63±1.56＊＊▲ 3.09±0.32＊＊▲ 10.73±0.14＊＊▲ 2.43±0.076＊＊▲ 2.67±0.052＊＊▲ 0.14±0.024＊＊▲ 6.15±0.59＊＊▲ 1.89±0.099＊＊▲馬奶粉低劑量 29.55±1.57＊▲ 5.36±0.30＊▲ 16.08±1.20＊▲ 2.56±0.030＊▲ 2.79±0.20＊▲ 0.26±0.047＊▲ 9.32±0.62＊▲ 1.45±0.11＊▲

MDA是脂質(zhì)過(guò)氧化的產(chǎn)物，其高低間接反映了機(jī)體細(xì)胞受自由基攻擊的嚴(yán)重程度;GSH-Px是機(jī)體內(nèi)一種重要的催化過(guò)氧化氫分解的酶，其特異的催化還原型谷胱甘肽(GSH)對(duì)過(guò)氧化氫的還原反應(yīng)，可以保護(hù)細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)和功能完整的作用。SOD能夠清除超氧陰離子自由基，其變化能夠反映機(jī)體氧化損傷的程度。髓過(guò)氧化物酶(MPO)是一種氧化能力很強(qiáng)的自由基，其性質(zhì)很活潑，氧化各種有機(jī)物和無(wú)機(jī)物的反應(yīng)速率極快，是造成組織脂質(zhì)過(guò)氧化、核酸斷裂、蛋白質(zhì)和多糖分解的主要因素，與機(jī)體的衰老、腫瘤、輻射損傷和細(xì)胞吞噬能力有關(guān)。黃嘌呤氧化酶(XOD)屬于需氧脫氫酶類，是體內(nèi)核酸代謝的重要酶，在肝損傷時(shí)釋放于血清中，并且升高明顯，而且在缺氧過(guò)程中黃嘌呤脫氫酶很快形成黃嘌呤氧化酶，它再催化次黃嘌呤形成黃嘌呤，產(chǎn)生超氧陰離子自由基。如果機(jī)體處于缺氧狀態(tài)腦組織中NOS和NO含量異常升高，產(chǎn)生腦組織損傷［8－10］。

故本實(shí)驗(yàn)選測(cè)上述幾項(xiàng)指標(biāo)來(lái)考察鮮馬奶粉體內(nèi)抗氧化活性。按照不同濃度給予鮮馬奶粉45 d后，小鼠血清、肝臟及脾臟中GSH、SOD量明顯升高，而 NO、MDA、NOS、MPO、XOD 量明顯減少，并且在一定濃度范圍內(nèi)具有濃度依賴性。其中鮮馬奶粉高劑量組抗氧化活性高于陽(yáng)性對(duì)照組，并差異具有顯著性(P＜0.05)。鮮馬奶粉有一定抗氧化活性。這對(duì)于鮮馬奶粉以后保健功能研究提供一定的理論依據(jù)和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。

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