玉樹冬蟲夏草原草中主要化學成分分析*

白飛榮，李輝，姚粟，劉洋，張露，扎西才吉，程池

1(中國食品發酵工業研究院中國工業微生物菌種保藏管理中心，北京，100015)

2(玉樹藏族自治州三江源藥業有限公司，四川玉樹，810003)

冬蟲夏草［Ophiocordyceps sinensis(Berk.)G.H.Sung，J.M.Sung，Hywel-Jones ＆ Spatafora］［1］是冬蟲夏草菌寄生在蝙蝠蛾科昆蟲幼蟲上形成的子座及僵蟲(幼蟲尸體、菌核)的復合體，主要生長于我國的四川、青海、云南、西藏和甘肅等省區海拔3 500～5 000 m的高山灌叢和草甸中。

青海省蟲草資源非常豐富，數量和質量均居全國之冠。其中處于三江源核心區的玉樹冬蟲夏草產量占青海省總產量的60%以上，所產的冬蟲夏草個頭大、質量好，是我國最重要的冬蟲夏草來源地。本研究對玉樹產地冬蟲夏草主要化學成分進行較全面的分析。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品收集

新鮮冬蟲夏草于2013年5月采自青海玉樹藏族自治州的郭欽(海拔5 100 m)和哈秀鄉(海拔4 800 m)。

1.1.2 樣品處理

新鮮冬蟲夏草在室內陰干，利用組織研磨器研碎過60目篩，過篩粉末用于成分研究的提取與測定，所有試驗均設置重復組，取平均值。

1.1.3 主要試劑與儀器

腺苷、蟲草酸、蟲草素標準品(色譜純，中國食品藥品檢定研究院)，葡萄糖標準品(分析純，Sigma公司)，無水乙醇、苯酚、濃H2SO4(均為分析純)，甲醇(色譜純)，自制雙蒸水。

高溫電爐(SXZ-8-10)，上海一恒科技有限公司;電子分析天平(FA-B)，上海精密儀器有限公司;分光光度計(DU-800)，島津LC-20A高效液相色譜儀(SHIMADZU);SE812J氮吹儀，北京帥恩科技有限責任公司;原子吸收光譜儀(AA-240S)，美國VARIAN;組織研磨儀(TL-2010)，北京艾科塞恩斯有限公司;超聲波振蕩器(JY92-IIN)，寧波新芝生物科技有限公司。

1.2 測定方法及原理

1.2.1 水分、灰分和蛋白質測定方法

水分采用GB 5009.3-2010進行測定;灰分采用GB5009.4-2010進行測定;蛋白質采用GB 5009.5-2010進行測定。

1.2.2 氨基酸測定方法

采用GB 5009.124-2003進行測定。

1.2.3 無機元素測定方法

Fe、Mg、Mn:GB/T5009.90-2003;K、Na:GB/T5009.91-2003;Zn:GB/T5009.14-2003;Ca:GB/T5009.92-2003;Cu:GB/T5009.13-2003;Pb:GB 5009.12-2010。

1.2.4 粗多糖測定方法［2］

采用苯酚-硫酸分光光度測定法，乙醇沉淀得到多糖組分，在濃H2SO4作用下脫水生成的糠醛衍生物能與苯酚縮合成橙紅色化合物，其呈色強度與溶液中多糖濃度成正比，在485 nm處有最大吸收峰，故可在此波長下進行比色定量。

1.2.5 蟲草素(C10H13N5O3)和腺苷(CC10H13N5O4)的測定方法

采用高效液相方法測定，色譜柱:Shim-pack VPODS 250 mm × 4.6 mm，5 μm;檢測器:VWD-3000RS，檢測波長254 nm;流動相:V(水)∶V(甲醇)=88∶12;流速:1.0 mL/min;柱溫:室溫;進樣量:10 μL，用紫外檢測器來測定蟲草素和腺苷的含量。具體實驗步驟參照文獻［3-4］。

1.2.6 蟲草酸(D-甘露醇)的測定方法

采用高效液相方法測定，色譜柱:糖類和有機酸分析柱300 mm ×7.8 mm(8%)，8 μm;檢測器:RID 40℃;流動相:0.002 5 mol/L H2SO4;流速:1.0 mL/min;柱溫:80℃;進樣量:20 μL，根據保留時間定性，用示差檢測器來測定蟲草酸的含量。具體實驗步驟參照文獻［4］。

2 結果與分析

2.1 水分、灰分、蛋白質測定結果

根據1.2.1方法進行測定，具體結果見表1。測定結果顯示2個樣品中水分、灰分、蛋白質含量大致相同。

表1 冬蟲草夏草原草基礎成分測定結果Table 1 The results of basic ingredient from nature O.sinensis

2.2 氨基酸測定結果

通過1.2.2方法對18種氨基酸進行測定(結果見表2)。由結果可知，2個樣品中氨基酸總量基本一致，且同一種氨基酸含量均沒有較大的差異，所有氨基酸中谷氨酸含量最高(達到3.68%)，蛋氨酸含量最低。

2.3 無機元素測定結果

根據國標GB/T5009方法對9種無機元素進行測定(結果見表3)，2個蟲草樣品間除Mn和Pb元素含量差別較大外，其他元素含量無明顯差異，2個樣品均以K元素含量最高(達到1.55×104mg/kg)。

表2 氨基酸測定結果 %Table 2 The determination results of amino acids

表3 無機元素的測定結果 mg/kgTable 3 The determination results of inorganic elements

2.4 多糖、腺苷、蟲草素、蟲草酸測定結果

根據1.2.4～1.2.6的方法對多糖、腺苷、蟲草素、蟲草酸進行測定(結果見表4)。多糖測定的標準回歸方程為y=4.188 3x+0.005 2(R2=0.998 0)，x代表多糖(mg)，y代表吸光度;腺苷檢測標準回歸方程為y=0.497 69x+0.034 85(R2=0.999 9)，x代表腺苷濃度(μg/mL)，y代表峰面積(mAU·min);蟲草酸檢測標準回歸方程y=5.199 23x-0.036 79(R2=0.999 8)，x代表蟲草酸濃度(mg/mL)，y代表峰面積(μRIU/min)。測定結果顯示2個樣品多糖含量無明顯差異，郭欽樣品的腺苷和蟲草酸含量相對較高(分別為0.33 mg/g，131.75 mg/g)，2樣品中均未有蟲草素檢出。

表4 功效成分測定結果Table 4 The determination results of functional components

3 討論

文中測定得到玉樹州2個產地冬蟲夏草的灰分為(4.6% ～4.7%)、粗蛋白為(31.57% ～33.75%)、總氨基酸為(23.12% ～23.73%)與文獻報道的基本一致，粗多糖含量(10.53% ～11.19%)略低于相關文獻中的測定結果(12% ～28%)［5-8］。

腺苷的測定結果(0.18～0.33 mg/g)與李紹平［9］毛細管電泳法分析四川、西藏冬蟲夏草樣品的結果(0.1～0.3 mg/g)相吻合，且符合《中國藥典》(2010)規定的冬蟲夏草腺苷含量不得低于0.01%的規定。蟲草酸測定結果(105.34～131.75 mg/g)，與周蘇等［10］青海蟲草的測定結果(115.99 mg/g)相吻合。無機元素測定結果中鐵的含量(1 220～1 350 mg/kg)高于周蘇［10］等的測定結果(云南 660 mg/kg，西藏791 mg/kg，青海734 mg/kg)近1倍，原因可能與蟲草采集地的土質情況有關聯，其他元素的測定結果與張曉峰［11］等《中國蟲草》內收集的各地蟲草樣品測定結果基本吻合。

本實驗的2個樣品中未檢測到蟲草素，此結果與周蘇等［10］的測定結果一致，其只在蛹蟲草中檢測到蟲草素，在西藏、云南、青海的冬蟲夏草樣品中均未檢測到，可能與提取方法有關或者是冬蟲夏草代謝產生的這種化合物原本含量就較低。

［1］ Sung G H，Hywel-Jones N L，Sung J M，et al.Phylogenetic classification of Cordyceps and the clavicipitaceous fungi［J］.Studies in Mycology，2007(01)，57:5-59.

［2］ NY/T 1676-2008.食用菌中粗多糖含量的測定［S］.北京:中國農業出版社出版，2008.

［3］ 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典(第一部)［S］.北京:化學工業出版社，2010:附錄36-37.

［4］ 顧振宇，吳雪美，張虹，等.高效液相色譜法測定冬蟲夏草中蟲草素和蟲草酸的含量［J］.中國食品學報，2007，7(3):144-147.

［5］ 李楠，宋健國，劉金云，等.蛹蟲草與冬蟲夏草的化學成分比較［J］.吉林農業大學學報，1995，17(增刊):80-83.

［6］ 彭國平，李紅陽，袁永泰.冬蟲夏草與人工蛹蟲草的成分比較［J］.南京中醫藥大學學報，1996，12(5):26-27.

［7］ 胡敏，皮惠敏，鄭元梅.冬蟲夏草的化學成分及藥理作用［J］.時珍國醫國藥，2008，19(11):2 804-2 806.

［8］ 嚴冬，梁舉春.冬蟲夏草化學成分研究綜述［J］.黑龍江科技信息科技論壇，2013(5):96.

［9］ 李紹平，李萍，季暉，等.毛細管電泳法測定冬蟲夏草中核苷類的含量［J］.藥物分析雜志，2001，21(2):77-79.

［10］ 周蘇，邢增濤.冬蟲夏草及蟲草制品中活性成分檢測方法的建立及含量測定［D］.上海:上海海洋大學，2013:7-60.

［11］ 張曉峰，劉海清，黃立成，等.中國蟲草［M］.西安:陜西科學技術出版社，2008.