單體納米銀溶液直接療法用于鼠壓瘡治療的實驗研究

曹 娟，李秀云，隋曉娜，李春蘭，唐 靜

世界人口老齡化程度加劇及護理人力資源短缺使壓瘡、潰瘍等慢性傷口的護理日益受到關注。對于老年、神經損傷、長期住院、脊髓損傷的病人，壓瘡及其護理是最具挑戰性的臨床問題之一［1］。在治療上壓瘡病人的住院時間長，費用高，特別是脊髓損傷的病人部分會因此二次入院。目前傳統敷料不具備治療、修復作用，醫療應用前景不樂觀。用于促進壓瘡等慢性傷口愈合的新型醫用納米銀產品備受青睞。但是現在常用的納米銀敷料費用高昂，載體負載納米銀的劑量等安全性問題尚存在眾多爭議，許多醫療機構使用后仍未將其作為創面常規護理標準用品。因此，開展了納米銀敷料的核心成分單體納米銀直接與創面接觸實驗研究，為臨床壓瘡治療提供新方案?，F報道如下。

1 材料和方法

1.1 主要的試劑

1.1.1 單體納米銀溶液配制 50 000mg／L單體納米銀溶液（上海滬正納米科技有限公司）用滅菌雙蒸水稀釋到330mg／L備用。經本院實驗診斷科證實330 mg／L濃度對細胞生長無損害且在正常抗菌范圍內。

1.1.2 壓瘡模型的建立及創面護理 選取15只Wistar大鼠（山東大學動物實驗中心提供，體重280g～300g，實驗過程中的動物處置符合本院動物倫理學標準）。在脛骨隆突內側采用自行研制的加壓模具及建模方法建立壓瘡模型［2］，單籠飼養。創面的納入標準：①按照美國國家壓瘡專家咨詢組（NPUAP）和歐洲壓瘡專家咨詢組（EPUAP）的壓瘡分級標準入選符合Ⅱ期 壓瘡的創面；②創面面積范圍0.4cm2～0.5cm2；③大鼠體重范圍290g～310g；④無異常行為學表現。從造模的15只大鼠中選取左右后肢壓瘡創面均符合標準的大鼠10只，利用Excel電子表格隨機分組功能將其分為兩組，每組分別為5只大鼠，10處創面，兩組體重比較差異無統計學意義（t＝0.791，P＝0.44），兩組創面面積比較差異無統計學意義（t＝0.496，P＝0.627）。治療前兩組大鼠均用10%水合氯醛（300 mL／kg）麻醉，對照組采用常規治療，即首先用生理鹽水清洗患處后，用無菌剪刀清除可疑壞死組織；如有水皰用注射器抽掉滲液，然后用0.5%碘伏棉球消毒創面及四周皮膚；觀察組在此基礎上，噴灑濃度為330 mg／L單體納米銀溶液。兩組每3天換藥1次，初次治療后的第9天實驗結束，處死大鼠截取創面及其周圍皮膚石蠟包埋，制備切片。治療過程中對照組1只大鼠因創面潰爛，自噬雙下肢，4d后死亡，創面減少為8處，即實驗結束時兩組標本量為對照組（n＝8），觀察組 （n＝10）。

1.2 創面愈合情況及相關指標的檢測

1.2.1 愈合率 用無菌透明膜貼附于創面，沿著創面描記出未愈合創面的面積，測算創面愈合率。愈合率＝（原始創面面積－未愈合創面面積）／原始創面面積。

1.2.2 創面愈合的定量評價 將取材后組織石蠟包埋、切片做HE染色，請病理專業醫師按照組織學標準定量評價［3］，即光鏡下觀察：①表皮各層結構；②真皮－表皮鄰接處；③膠原束和皮膚整體結構；④表皮再生狀況；⑤粒細胞數量。

1.3 統計學方法 采用SPSS20.0軟件進行數據統計處理，創面愈合率采用秩和檢驗，數據以中位數（M）表示；創面愈合定量評價得分采用t檢驗，數據以均數±標準差（±s）表示。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 宏觀觀察 對照組創面組織炎癥反應比觀察組嚴重，其中1例創面面積擴大，傷口床存在大量壞死組織或腐肉，逐漸發展為Ⅲ期壓瘡。觀察組第1次治療后滲出已減少，第3天創面開始干燥，6d后創面邊緣開始緊縮，未出現進一步惡變，大鼠均正常進食，無異常行為學表現。

2.2 兩組療效指標比較 兩組創面愈合率差異有統計學意義，觀察組優于對照組。創面組織學定量評價分數，觀察組明顯高于對照組，差異有統計學意義，鏡下組織修復觀察結果與創面愈合率變化相吻合。見表1。

表1 兩組組織學定量評價分數及創面愈合率比較

3 討論

3.1 單體納米銀溶液治療的優點 當皮膚組織破潰后，繼發的細菌感染在壓瘡的發展過程中占有重要地位。微生物的繁殖及感染會使慢性創面難以愈合，以納米技術為基礎的納米銀進入體內后不同于其他的銀敷料，其量子效應、小尺寸效應、極大地比表面積使其抗菌效果更為突出?？梢葬尫臕g0，從而發揮更強大的殺滅細菌和病毒的作用，備受科學界關注［4－7］。Roh等報道，納米銀的毒性比銀的毒性低很多，且納米銀用于創面時能迅速入血，停用后含量也會降至正常值范圍內，無累積效應，納米銀比傳統的銀抗菌敷料更安全，且不易產生耐藥，具有長效性［8］。本實驗中，將納米銀稀釋到330mg／L，此濃度有效抗菌且對細胞無損害，配制及使用方法簡單，分瓶保存備用，省去了敷料加工的成本，適用于壓瘡治療初期干預，防止壓瘡惡化及膿毒癥、菌血癥出現。

3.2 單體納米銀溶液直接療法的優點 壓瘡對病人困擾已經引起重視，新興方案不斷開展。目前含銀敷料廣泛應用于慢性創面治療，抑制微生物的繁殖，控制感染，且療效顯著［9，10］，大量含銀敷料商品化生產，價格之高使其在整個傷口治療費用中占有很大的比例，其臨床使用和成本效益都存在爭論，仍然沒有充分的證據推薦它成為慢性傷口治療標準敷料［11］。市場上銀敷料產品中濃聚了大量銀，銀是通過持續釋放的方式到創面中，因此銀濃度不好控制，不利于創面的愈合、對細胞有毒性，甚至嚴重者引起全身性疾病，銀敷料只能用于嚴重污染的傷口［12］。因此，昂貴的銀敷料并不適合壓瘡初期治療，其使用尚需要規范化。本研究將單體納米銀溶液直接與創面接觸，且實驗前經過MTT實驗驗證330mg／L納米銀在正?？咕秶鷥?，對細胞無毒性，且不存在含銀敷料濃度不好把握等爭議。實驗過程中觀察組大鼠未有任何系統疾病、意外死亡、異常行為學表現；且創面收縮率及顯微鏡下對組織學觀察結果均證實觀察組相比對照組的傳統治療效果好，直接將納米銀與創面接觸可減少炎癥期組織變性，有利于炎癥控制。目前創面愈合強調濕性愈合理論，但鑒于大鼠壓瘡位置不好固定，本實驗兩組均未運用濕性愈合護理措施，即僅可作為臨床壓瘡治療初始干預參照，相信在臨床實際濕性愈合的后期干預下促進傷口愈合的結果將更加明顯。

結合本實驗結果及目前納米銀的相關研究，不需要任何敷料，單體納米銀溶液直接療法在鼠壓瘡初期干預效果顯著，對組織無細胞毒性還可以殺菌促進組織愈合，對壓瘡治療具有重要意義。納米銀合理的臨床應用將會減少傷口感染，減少鎮痛藥和抗生素的使用，進一步減少細菌耐藥性的發生。但目前國內外對于納米銀使用后效果評價指標、如何評價等存在爭議，因此本實驗也需更進一步的拓展。

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