胸腺瘤組織中c-myc和PTEN基因的表達

石鋒

胸腺瘤是常見的縱隔腫瘤，一般位于前上縱隔，被認為是胸腺上皮腫瘤。胸腺瘤具有局部浸潤、遠處轉移等特性，但其屬于低度惡性或者潛在惡性腫瘤[1]。由于其發病率低且經常伴隨自身免疫疾病以及其他系統病變，發病機制復雜，故在其病因、病理分類、臨床分期、治療方案等諸多方面一直存在爭議。本研究應用免疫組織化學SP法探討癌基因c-myc及抑癌基因PTEN在胸腺瘤組織中的表達，結合Masaoka分期以及WHO分型，研究其在胸腺瘤發生發展過程中的作用、其與胸腺瘤臨床病理學特征的關系以及二者在胸腺瘤組織中表達的相關性，期望為臨床診斷和治療胸腺瘤提供理論依據，現具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2001年1月-2012年1月本院45例患者的胸腺瘤切除標本存檔蠟塊作為研究材料，所選患者中男26例，女l9例，年齡20~72歲，平均43.4歲。非侵襲性胸腺瘤（I期）17例（非侵襲性組）；侵襲性胸腺瘤28例（侵襲性組），其中Ⅱ期11例，Ⅲ期14例，Ⅳ期3例。良性或低度惡性胸腺瘤14例（良性組），其中A型5例，AB型9例；惡性胸腺瘤31例（惡性組），其中B1型8例，B2型11例，B3型12例。取同期16例非腫瘤胸腺組織作為對照組。

1.2 分期及分型標準 按Masaoka臨床分期標準[2]，非侵襲性胸腺瘤為Masaoka臨床分期I期，侵襲性胸腺瘤為Masaoka臨床分期Ⅱ~Ⅳ期。按世界衛生組織（WHO）病歷分型標準[3]，A型、AB型為WHO分型之良性或低度惡性胸腺瘤，B1~B3為WHO分型之惡性胸腺瘤。

1.3 方法 全部標本均經10%中性甲醛固定，常規石蠟包埋，所有蠟塊制成4 μm厚的連續切片3張，2張行免疫組化染色，1張行HE染色復核診斷。試驗用鼠抗人c-myc單克隆抗體、SP試劑盒均購買于福州邁新公司。鼠抗人PTEN單克隆抗體購買于北京中山公司。應用免疫組織化學SP法，檢測c-myc及PTEN基因在胸腺瘤中的表達。

1.4 結果判斷標準

1.4.1 c-myc基因 光鏡分析，在排除非特異性染色等干擾的前提下，細胞核或細胞漿中出現棕褐色、棕黃色、黃色顆粒的標記為陽性。在400倍視野下連續選擇10個視野，每個視野計數100個細胞，腫瘤細胞無陽性反應為（-），陽性細胞數占1%~25%為（+），26%~50%為（++），>50%為（+++）。

1.4.2 PTEN基因 陽性染色指在排除非特異性染色等干擾的前提下，光鏡下觀察細胞核或細胞漿內出現棕褐色、棕黃色、黃色顆粒，而且背景清晰。PTEN蛋白定位于細胞核或細胞漿。每張切片在400倍視野下連續選擇10個視野，每個視野計數100個細胞。根據Wang等[4]和Simmons等[5]的方法，規定無明確陽性細胞或陽性細胞百分比<10%為陰性（-），陽性細胞百分比在10%~25%為弱陽性（+），陽性細胞百分比在26%~50%為陽性（++），陽性細胞百分比>50%為強陽性（+++）。

1.5 統計學處理 所得數據應用SPSS 13.0軟件進行統計學處理，計數資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗，相關性分析采用Pearson相關分析，以P<0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胸腺瘤組與對照組c-myc及PTEN基因表達比較 胸腺瘤組c-myc基因陽性表達率高于對照組，PTEN基因陽性表達率低于對照組，比較差異均有統計學意義（P<0.01），見表1。

表1 胸腺瘤組與對照組c-myc及PTEN基因表達比較

2.2 不同惡性程度胸腺瘤c-myc及PTEN基因表達比較 惡性組c-myc基因陽性表達率高于良性組，PTEN基因陽性表達率低于良性組，比較差異均有統計學意義（P<0.05），見表2。

表2 不同惡性程度胸腺瘤c-myc及PTEN基因表達比較

2.3 不同侵襲性胸腺瘤c-myc及PTEN基因表達比較 侵襲性組c-myc基因陽性表達率高于非侵襲性組，PTEN基因陽性表達率低于非侵襲性組，比較差異均有統計學意義（P<0.01），見表3。

表3 不同侵襲性胸腺瘤c-myc及PTEN基因表達比較

2.4 PTEN表達與c-myc表達的關系 c-myc與PTEN 關 聯 性 檢 驗 字2=8.562，P=0.003<0.01， 顯 示PTEN基因表達與c-myc表達呈負相關，Pearson列聯系數P=-0.436，見表4。

表4 PTEN表達與c-myc表達的關系 例

3 討論

c-myc于1982年首先被發現，是髓細胞性白血病病毒癌基因V-myc的細胞同系物，隨后被發現它的“癌基因化”在人類Burkit's淋巴瘤及多種動物和人類腫瘤中起著關鍵作用[6]。人類c-myc基因定位于染色體8q24（8號染色體長臂的2區4帶），由3個外顯子和2個內含子組成。c-myc是一個重要的癌基因，與細胞的持續增殖關系密切，在腫瘤發生過程中起重要作用，近來研究表明，c-myc基因作為一個經典的促癌蛋白參與細胞增殖、分化、衰老、凋亡和轉化[7]。胡茜等[8]研究發現c-myc蛋白在宮頸癌組織中的陽性率56.9%，而在正常宮頸組織中的陽性率為25.0%，兩者差異有統計學意義（P<0.05）；Hirano等[9]用鼠白血病病毒A8感染小鼠7周，發現小鼠被誘導形成胸腺瘤，采用DNA印跡的方法檢測出小鼠體內存在過表達的c-myc mRNA，說明上調的c-myc在胸腺瘤的形成中發揮重要作用。c-myc在人胸腺瘤中的表達國內已有報道：黃壯士等[10]研究顯示c-myc在胸腺瘤中表達的陽性率為63.4%，而在非瘤胸腺組織中的表達16.7%，二者比較差異有統計學意義（P<0.01）。本研究顯示，c-myc在胸腺瘤中的陽性表達率為68.9%（31/45），而在對照組中的表達率為18.8%（3/16），比較差異有統計學意義（P<0.01），結果表明過表達的c-myc基因參與了胸腺瘤的發生、發展。c-myc在Masaoka Ⅰ期胸腺瘤組織中的陽性表達率為41.2%（7/17），而在具有侵襲性的Ⅱ~Ⅳ期胸腺瘤組織中的表達率為85.7%（24/28），比較差異有統計學意義（P<0.01），表明c-myc的表達與胸腺瘤的侵襲性有關。c-myc在惡性胸腺瘤中陽性表達率為80.6%（25/31），在A型和AB型胸腺瘤中的陽性表達率為42.9%（6/14），比較差異有統計學意義（P<0.05），提示c-myc表達與胸腺瘤的惡性程度有關，檢測c-myc將有助于胸腺瘤良惡性及侵襲性的判斷。

PTEN基因位于染色體10q23.3（10號染色體長臂的2區3帶3亞帶），包括9個外顯子，8個內含子，全長200 kb，含1209個核苷酸。PTEN基因是迄今發現的第一個具有磷酸酶活性的抑癌基因，它對細胞內信號傳導通路的調控起關鍵作用，PTEN蛋白具有誘導細胞凋亡，抑制細胞周期進展，抑制細胞遷移、鋪展和局部粘附等多種生理功能。大量實驗資料證明PTEN與細胞增殖呈負相關，PTEN基因突變或缺失可導致細胞過度增殖，導致組織的惡變。國外已有研究表明，PTEN的缺失和突變與人類的許多腫瘤有關[11-13]。李冰[14]研究發現PTEN基因與肝癌的發生和發展以及進展有密切的聯系，且組織的分化程度越高，PTEN的表達率也就越高，提示肝癌的發生可能與PTEN基因失活有關；管建云等[15]在研究PTEN與膀胱尿路腫瘤關系時發現：PTEN在膀胱尿路上皮細胞癌組織和正常膀胱黏膜組織中的陽性表達率分別是46.77%和100%，比較差異有統計學意義（P<0.05）；且膀胱癌細胞分化程度越差，臨床分期越高，PTEN陽性表達率就越低，比較差異有顯著性（P<0.05）。提示膀胱尿路上皮細胞癌的發生、發展與PTEN的表達缺失有關。本研究顯示，PTEN在對照組（非瘤胸腺組織）中陽性表達率為93.8%（15/16），在胸腺瘤中的陽性表達率為53.3%（24/45），兩者比較差異有統計學意義（P<0.01）。說明PTEN的突變或缺失參與了胸腺瘤的發生。PTEN在惡性胸腺瘤中陽性表達率為41.9%，在良性胸腺瘤中的陽性表達率為78.6%，二者比較差異有統計學意義（P<0.05），提示PTEN表達與胸腺瘤的惡性程度有關。在具有侵襲性的Ⅱ~Ⅳ期胸腺瘤中PTEN陽性表達率為35.7%，而PTEN在非侵襲性胸腺瘤中的陽性表達率為82.4%，二者比較差異有統計學意義（P<0.01），提示PTEN表達與胸腺瘤的侵襲性有關。與國內相關研究結果一致[16-17]。Lilja等[18]研究發現，PTEN基因在鼠胚胎的成纖維細胞中能通過調節ras和c-myc基因從而抑制腫瘤的惡性行為。相關性分析顯示，c-myc與PTEN在胸腺瘤中的表達呈負相關（P<0.01），Pearson列聯系數為P=-0.436，提示癌基因c-myc及抑癌基因PTEN可能共同參與胸腺瘤的發生、發展，二者存在協同作用。

綜上所述，人類腫瘤的發生是多種癌基因、抑癌基因協同作用的結果，包括癌基因的激活和抑癌基因的失活或突變等；本組資料顯示，在胸腺瘤組織中存在c-myc基因過表達及PTEN基因失活，且c-myc基因與PTEN基因在胸腺瘤組織中的表達呈負相關。提示c-myc和PTEN基因在胸腺上皮細胞惡變過程中起協同作用，可能共同影響著胸腺瘤的發生、發展過程。二者的聯合檢測將有助于胸腺瘤良惡性及侵襲性的判斷，并將為開發新的抗瘤藥物和尋找新的基因治療的靶基因提供線索和思路。

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