鹽酸曲美他嗪對(duì)腎間質(zhì)纖維化防治作用的研究

郝雷亮（潞安集團(tuán)總醫(yī)院，山西 長(zhǎng)治 046204）

臨床上慢性腎臟疾病繼續(xù)發(fā)展下去就會(huì)發(fā)生腎間質(zhì)纖維化，最后造成末期腎功能衰竭。腎間質(zhì)纖維化是受到各種致病因素的作用，增加了間質(zhì)細(xì)胞和細(xì)胞間質(zhì)，尤其是基質(zhì)蛋白質(zhì)合成增多，基質(zhì)降解減少，導(dǎo)致腎小管間質(zhì)堆積著大量的細(xì)胞外基質(zhì)，最后造成纖維組織增生，破壞了正常組織及結(jié)構(gòu)。若腎臟出現(xiàn)纖維化獨(dú)自向惡化發(fā)展，就非常有必要逆轉(zhuǎn)及阻止腎間質(zhì)纖維化。出現(xiàn)腎間質(zhì)纖維化是很多不良因素作用的結(jié)果，有細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化、TGF-β1表達(dá)的增多及氧化應(yīng)激等是最主要的因素[1]。本研究通過(guò)單側(cè)輸尿管梗阻（UUO）對(duì)大鼠腎間質(zhì)纖維化模型進(jìn)行誘導(dǎo)，觀察并分析鹽酸曲美他嗪對(duì)腎纖維化腎組織中TGF-β1表達(dá)、a-SMA表達(dá)和MDA、SOD含量的變化，對(duì)鹽酸曲美他嗪在抗腎纖維化防治作用進(jìn)行研究。

1 資料與方法

1.1 一般資料：抽取健康wistar大鼠28只，體重185～205 g，對(duì)其分開(kāi)飼養(yǎng)，使用顆粒飼料喂養(yǎng)，自由飲水。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法：將28只大鼠進(jìn)行隨機(jī)分組，分為觀察組與對(duì)照組，每組14只，操作方法如下：用2%戊巴比妥鈉30 mg/kg，通過(guò)腹腔注射進(jìn)行麻醉，去大鼠毛，備皮，按照順序打開(kāi)皮膚—皮下組織—腹膜，然后進(jìn)入腹腔，將腎門(mén)輸尿管充分暴露出來(lái)，采用無(wú)菌手術(shù)線在接近腎門(mén)輸尿管連接位置對(duì)輸尿管進(jìn)行結(jié)扎，為了避免發(fā)生感染，再使用8萬(wàn)U的硫酸慶大霉素對(duì)腹腔進(jìn)行沖洗，再逐層切口縫合。對(duì)照組使用生理鹽水灌胃，每天每只1.0 ml，觀察組使用鹽酸曲美他嗪溶液，每天每只1.0 ml。

1.3 采集、處理標(biāo)本：在術(shù)后1周、2周、3周使用心臟采血法將大鼠處死，立即將術(shù)側(cè)腎臟取出，對(duì)腎上腺、包膜、脂肪組織等進(jìn)行剝離，取100 mg分離出來(lái)的腎臟，將其制作為組織勻漿，留取作為檢測(cè)ELISA檢測(cè)使用，剩余的腎臟放置在10%福爾馬林里，作為病理檢查及免疫組織化學(xué)用，將血清提取出來(lái)，對(duì)血尿素氮及肌酐值進(jìn)行檢測(cè)。

1.4 檢測(cè)方法：采用化學(xué)法檢測(cè)血肌酐及血尿素氮；試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心酶標(biāo)免疫分析法測(cè)定標(biāo)本中TGF-β1水平、MDA水平，SOD含量測(cè)定采用改良黃嘌呤氧化酶法。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析：使用SPSS 13.0對(duì)各項(xiàng)資料進(jìn)行統(tǒng)計(jì)、分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 腎功能變化情況：觀察組和對(duì)照組血肌酐、尿素氮在術(shù)后第1周、第2周及第3周沒(méi)有出現(xiàn)明顯變化，兩組對(duì)比差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。

表1 兩組腎小管損傷程度評(píng)分情況（，分）

表1 兩組腎小管損傷程度評(píng)分情況（，分）

組別 第1周 第2周 第3周對(duì)照組 0.016±0.003 0.019±0.004 0.018±0.003觀察組 1.438±0.092 2.057±0.124 2.398±0.105

表2 兩組a-SMA的表達(dá)面積評(píng)分情況比較，分）

表2 兩組a-SMA的表達(dá)面積評(píng)分情況比較，分）

組別 第1周 第2周 第3周對(duì)照組 0.13±0.12 0.14±0.12 0.12±0.11觀察組 0.89±0.68 1.78±0.72 3.28±0.45

表3 兩組TGF-β1、MDA及SOD表達(dá)含量比較

表3 兩組TGF-β1、MDA及SOD表達(dá)含量比較

?

2.2 對(duì)腎臟病理的影響：用肉眼觀察可見(jiàn)對(duì)照組大鼠腎臟呈現(xiàn)暗紅色，大小形態(tài)沒(méi)有發(fā)生異常，而觀察組大鼠結(jié)扎側(cè)腎臟顏色比較淡，有出現(xiàn)明顯腫大，有黃褐色混濁液體存在，腎盂擴(kuò)張比較明顯，腎乳頭變平，將腎臟剖開(kāi)可以看到腎實(shí)質(zhì)變薄。兩組腎小管損傷程度評(píng)分情況比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見(jiàn)表1。兩組a-SMA的表達(dá)面積評(píng)分情況比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），詳見(jiàn)表2。

2.3 兩組TGF-β1、MDA及SOD表達(dá)含量比較：見(jiàn)表3。兩組TGF-β1、MDA及SOD表達(dá)含量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

3 討論

造成末期腎功能衰竭的主要病理基礎(chǔ)就是腎間質(zhì)纖維化，具有非常復(fù)雜的發(fā)生及發(fā)展過(guò)程，主要表現(xiàn)為以下幾方面。

3.1 細(xì)胞轉(zhuǎn)型的轉(zhuǎn)化：①成纖維細(xì)胞轉(zhuǎn)型的轉(zhuǎn)化，研究實(shí)踐證明，在細(xì)胞外基質(zhì)增多過(guò)程中，腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞增殖活化起到非常關(guān)鍵的作用，在正常狀態(tài)下，成纖維細(xì)胞還處在靜息狀態(tài)，在受到刺激情況下，成纖維細(xì)胞由靜息狀態(tài)轉(zhuǎn)化成了增殖活化狀態(tài)，從而產(chǎn)生過(guò)量基質(zhì)。由于活化成纖維細(xì)胞所產(chǎn)生的表型及功能發(fā)生改變，轉(zhuǎn)化為表達(dá)a-SMA的MFB，MFB的主要來(lái)源是成纖維細(xì)胞。②腎小管上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化，很多研究證明，腎小管上皮細(xì)胞在受到損傷、炎性反應(yīng)、缺血、變性及壞死的情況下，可發(fā)生腎間質(zhì)細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化[2]。

3.2 炎性反應(yīng)細(xì)胞浸潤(rùn)：在腎間質(zhì)纖維化發(fā)生及發(fā)展中，腎間質(zhì)炎性反應(yīng)細(xì)胞的浸潤(rùn)起著很關(guān)鍵的作用：①單核巨噬細(xì)胞，巨噬細(xì)胞可釋放出致纖維化因子，細(xì)胞數(shù)量和纖維化程度成正比關(guān)系。②肥大細(xì)胞，從實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，此種細(xì)胞可通過(guò)促進(jìn)TGF-β1等多種細(xì)胞因子的表達(dá)，誘導(dǎo)間質(zhì)成纖維細(xì)胞增殖及ECM生成，加快腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生及發(fā)展。

3.3 TGF-β1和腎臟纖維化：它是一種多肽，具有調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)及分化的作用，最主要的三種形式為T(mén)GF-β1、TGF-β2及TGF-β3，而TGF-β1是腎纖維化治療的靶點(diǎn)[3]。

3.4 氧化應(yīng)激及腎臟纖維化：造成細(xì)胞衰老、損傷及死亡的重要原因就是氧化應(yīng)激，它在腎間質(zhì)纖維化中具有很重要的作用。腎組織在進(jìn)行水、電解質(zhì)轉(zhuǎn)運(yùn)及重吸收時(shí)，需要較高的氧耗，因此，在氧化應(yīng)激下，腎小管容易發(fā)生損傷。

當(dāng)前在現(xiàn)代醫(yī)學(xué)上，對(duì)腎間質(zhì)纖維化還沒(méi)有特異性藥物，本研究采取單側(cè)輸尿管結(jié)扎法制作大鼠腎間質(zhì)纖維化模型，分析單側(cè)輸尿管結(jié)扎對(duì)大鼠腎組織損壞的主要病理表現(xiàn)，和有關(guān)細(xì)胞因子的表達(dá)變化，從研究結(jié)果可以看出，兩組血尿素氮及肌酐數(shù)值差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），染色顯示對(duì)照組間質(zhì)有大量藍(lán)染膠原纖維增生，腎小球病變不明顯，而觀察組腎間質(zhì)膠原纖維陽(yáng)性染色面積下降比對(duì)照組低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，鹽酸曲美他嗪大鼠梗阻側(cè)腎臟病理?yè)p害程度比較輕，Masson，s染色的膠原纖維面積減少，從而說(shuō)明鹽酸曲美他嗪可減輕腎間質(zhì)纖維化的作用。

[1] 楚 非,鄒萬(wàn)忠,孫鎖柱,等.大鼠腎小管間質(zhì)纖維化中腎小管上皮細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化的研究[J].中華腎臟病雜志,2011,16(1):1.

[2] 張 峰,曾秋棠,李書(shū)國(guó).曲美他嗪對(duì)糖尿病大鼠心室重塑的影響[J].中華老年醫(yī)學(xué)雜志,2011,15(1):1.

[3] 郭 敏,劉海燕,陳孝文.腎間質(zhì)纖維化的發(fā)生機(jī)制及三七總苷的防治作用[J].中國(guó)中西醫(yī)結(jié)合腎病雜志,2012,28(1):2.