大蕁麻根的質量標準研究及不同采收期的考察

邱洪，代兵，潘永雪（.解放軍第44醫院藥劑科，貴陽 550009；.解放軍第73醫院藥械科，新疆 庫爾勒 84000）

大蕁麻根為蕁麻科植物大蝎子草Girardinia suborbiculata C.J.Chen sub sp.triloba.的新鮮或干燥根。目前對大蝎子草的研究主要集中于其植物生態學[1]、藥效學及臨床等方面[2-7]，對其質量的研究內容較少。大蝎子草含有總黃酮、東莨菪內酯、芹菜素等[8-9]。陶玲等對大蝎子草進行了全草的研究，在草根中分離鑒定出32個成分；草莖中分離鑒定出31個成分；草葉中分離鑒定出32個成分[10-13]。為了提高大蕁麻根質量的可控性，筆者用薄層色譜（TLC）和浸出物的檢測方法對不同時期采收的大蕁麻根進行了相關對比研究。

1 材料

1.1 儀器

QY-20型三用紫外分析儀（上海澳瑞德精密儀器有限公司）；AUW-220D型電子天平（日本島津公司）；CH-250型超聲波清洗器（北京創新德超聲電子研究所）；HH-4型數顯恒溫水浴鍋（常州國華電器有限公司）；101A-1型電熱恒溫干燥箱（上海浦鴻儀器廠）；TU-1901型雙光束紫外可見分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）。

1.2 試劑

東莨菪內酯對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號:110768-200504）；石油醚、甲酸、甲醇、磷酸、二氯甲烷、乙醇、乙酸乙酯、三氯甲烷和環己烷均為分析純，水為娃哈哈純化水。

1.3 藥材

大蕁麻根采集于貴陽藥用植物園、貴州省龍里縣龍山鎮貴州同濟堂中藥材種植公司基地、貴陽烏當區，經貴陽中醫學院何順志教授鑒定為蕁麻科蝎子草屬植物大蝎子草Girardinia suborbiculata C.J.Chen sub sp.triloba.的根。

2 方法與結果

2.1 大蕁麻根中東莨菪內酯的TLC鑒別試驗

分別取3批樣品粉末約4 g，置于索氏提取器中，加二氯甲烷加熱回流提取3 h，提取液蒸干，殘渣加無水乙醇1ml溶解，作為供試品溶液。取東莨菪內酯對照品適量，加無水乙醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。按TLC法[14]試驗，吸取上述4種溶液各5～10μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶10∶7∶1.2，V/V/V/V）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365nm）下檢視。結果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，詳見圖1。經3批樣品驗證結果表明，此方法專屬性強、重現性好，故將此TLC鑒別方法收入質量標準草案正文。

2.2 浸出物測定

2.2.1 水溶性浸出物測定 測定用的供試品需粉碎，使能通過二號篩，并混合均勻。（1）冷浸法。取供試品約4 g，精密稱定，置于250ml錐形瓶中，精密加水100ml，密塞，冷浸，前6h內時時振搖，再靜置18h，用干燥濾器迅速濾過；精密量取續濾液20ml，置于干燥至恒質量的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定質量。以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量，結果詳見表1。（2）熱浸法。取供試品約2 g，精密稱定，置于100ml錐形瓶中，精密加水50ml，塞緊，稱定質量，靜置1 h后，連接回流冷凝管，加熱至沸騰，并保持微沸1 h。放冷后，取下錐形瓶，密塞，再稱定質量，用水補足減失的質量，搖勻，用干燥濾器濾過；精密量取濾液25ml，置于干燥至恒質量的蒸發皿中，在水浴上蒸干后，于105℃干燥3 h，置干燥器中冷卻30min，迅速精密稱定質量，以干燥品計算供試品中水溶性浸出物的含量，結果詳見表1。

2.2.2 醇溶性浸出物測定 按水溶性浸出物測定法測定，以乙醇作溶劑，結果詳見表2。（1）冷浸法。取供試品約4 g，精密稱定，置于250ml錐形瓶中，精密加乙醇100ml，密塞，按“2.2.1”項下冷浸法試驗，結果詳見表2。（2）熱浸法。取供試品約2 g，精密稱定，置于100ml錐形瓶中，精密加入乙醇50ml，塞緊，按“2.2.1”項下熱浸法試驗，結果詳見表2。

圖1 3批大蕁麻根中東莨菪內酯薄層色譜圖1、2.貴陽藥用植物園大蕁麻根；3、4.貴州省龍里縣龍山鎮貴州同濟堂中藥材種植公司基地大蕁麻根；5、6.貴陽烏當區大蕁麻根；7～9.東莨菪內酯對照品Fig 1 TLC diagrams of scopoletin in 3 batches of the root of U.dioica1，2.the root of U.dioica in Guiyang medicinal botanical garden；3，4.the root of U.dioica in Guizhou Tongjitang of Chinese herbal medicines planting base of Longshan Town，Longli County，Guizhou Province；5，6.the root of U.dioica in Wudang District，Guiyang City；7-9，reference substance of scopoletin

表1 3批大蕁麻根的水溶性浸出物含量（%）Tab 1 Contents of water-soluble extracts in 3 batches of theroot of U.dioica（%）

表2 3批大蕁麻根的醇溶性浸出物含量（%）Tab 2 Contents of alcohol-soluble extracts in 3 batches of the root of U.dioica（%）

比較表1、表2的測定結果，大蕁麻根藥材水溶性浸出物比醇溶性浸出物含量高，但參照相關文獻資料，大蕁麻根藥材中主要含有黃酮類、香豆素類等脂溶性成分，多數類似成分的水溶性差，易溶于甲醇或乙醇，所以選擇用醇溶性浸出物測定大蕁麻根藥材比較合理；而醇溶性浸出物中熱浸法測定結果比冷浸法含量高。因此，浸出物選擇用醇溶性熱浸法。

2.3 大蕁麻根采收期的考察

2.3.1 不同季節藥材的TLC鑒別對比試驗 采收初春、夏季、初秋、立冬四個季節的樣品各一批進行驗證。分別取藥材粉末約4 g，按“2.1”項下方法試驗。結果，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點，詳見圖2。經4批樣品驗證結果表明，初春和秋末采收的大蕁麻根含的東莨菪內酯高，夏季和初秋采收的大蕁麻根含東莨菪內酯較低，故將秋末至初春采挖作為大蕁麻根采收的最佳時節。

圖2 不同季節藥材TLC圖1.初春；2.夏季；3.東莨菪內酯對照品；4.初秋；5.立冬Fig 2 TLC identifications of samples in different seasons1.early spring；2.summer；3.reference substance of scopoletin；4.early autumn；5.beginning of winter

2.3.2 不同季節藥材的浸出物對比試驗 采收初春、夏季、初秋、立冬四個季節的樣品（采自貴陽藥用植物園）各一批，按浸出物測定法[14]項下方法測定。分別取供試品約2 g，精密稱定，置于100ml錐形瓶中，精密加入乙醇50ml，塞緊，按“2.2.2”項下熱浸法試驗，結果詳見表3。

表3 4批藥材醇溶性浸出物含量（%）Tab 3 Contents of 4 batches of alcohol soluble extracts（%）

表3結果表明，初春和立冬采收的大蕁麻根浸出物含量高，夏季和初秋采收的大蕁麻根浸出物含量較低，故將秋末至初春采挖作為大蕁麻根采收的最佳時節，即頭年11月至翌年3月間為適宜采挖期。結合實際情況，擬定本品的采收季節為秋末至初春。

3 討論

3.1 展開劑的選擇

筆者曾采用環己烷-三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶10∶7∶1.2，V/V/V/V）、甲苯-乙酸乙酯-丙酮-甲醇（5∶1∶1∶0.3，V/V/V/V）、三氯甲烷-甲醇-水（40∶10∶1，V/V/V）、石油醚（60～90 ℃）-乙酸乙酯（7∶3，V/V）、環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶10∶7∶1.2，V/V/V/V）為展開劑，結果只有環己烷-二氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶10∶7∶1.2，V/V/V/V）展開的熒光斑點明顯，干擾小，其他方法分離效果均不理想。

3.2 供試品溶液制備方法的選擇

提取溶劑分別采用70%乙醇、30%乙醇、三氯甲烷、二氯甲烷、甲醇等溶劑對樣品進行加熱回流提取。結果，二氯甲烷熒光斑點比較明顯，專屬性強，重現性好，干擾小。

3.3 提取時間的選擇

取樣品4份，分別加入二氯甲烷回流提取1、2、3、4 h。結果，提取3 h的樣品與提取4 h的含量相近，故選用提取3 h為提取時間。

3.4 含量測定方法的選擇

曾采用高效液相色譜法測定大蕁麻根中的東莨菪內酯、芹菜素、齊墩果酸和熊果酸等，但含量太低，以此作為指標成分意義不大。

綜上所述，本試驗所建立的用TLC定性鑒別東莨菪內酯的方法，專屬性強，重現性好，干擾小。用浸出物方法測定含量較為理想。不同采收期的考察有利于有效地控制大蕁麻根藥材的質量。

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