甘肅不同產地板藍根中多糖含量分析*

李成義，楊苗苗，張櫻山，陸國弟

1甘肅中醫學院，甘肅蘭州730000；2甘肅奇正藏藥有限公司

甘肅不同產地板藍根中多糖含量分析*

李成義1，楊苗苗1，張櫻山2，陸國弟1

1甘肅中醫學院，甘肅蘭州730000；2甘肅奇正藏藥有限公司

目的：建立板藍根中多糖的含量測定方法，分析比較甘肅省內不同種植區域的板藍根多糖含量差異。方法：采用水提醇沉法提取板藍根中多糖，利用苯酚-硫酸法測定板藍根中多糖的含量。結果：甘肅不同產地板藍根中多糖含量相差較大，最高為16.22%，最低為10.59%，平均回收率為99.42%，相對標準偏差(RSD)為1.15%（n=6）。結論：該測定方法簡單、準確、真實，可用于測定板藍根中多糖含量。整體看甘肅地區板藍根中多糖含量相對較低，且不同市縣及鄉鎮其多糖含量存在較大差異，有必要對其種植區域進行科學合理規劃。

板藍根；多糖；含量測定

板藍根為十字花科植物菘藍Isatis indigotica For t.的干燥根，性寒味苦，具有清熱解毒，涼血利咽之功效，常用于溫毒發斑、舌絳紫暗、大頭瘟疫、痄腮、爛喉丹痧、丹毒、癇腫等癥［1］。全國各地均有分布，現主要產于安徽、河北、甘肅、黑龍江等地。板藍根中含有較豐富的化學成分［2-3］，其中多糖具有調節免疫、抗腫瘤、抗炎、抗氧化、降血糖，護肝等多重功效。近年來隨著板藍根藥材種植區域的逐年擴增，一些地區不合理開發板藍根種植區域的行為比比皆是，使得人們對板藍根藥材的質量與療效提出了質疑。為此，筆者采集甘肅省內20個不同種植區域的板藍根藥材，采用苯酚-硫酸法對其多糖含量進行分析比較研究，為甘肅地區優選板藍根藥材種植區域提供科學合理的依據。

1 儀器與試藥

1.1 儀器及主要設備 XS205DU型梅特勒-托利多分析天平 (梅特勒-托利多上海有限公司提供)；ACY-2001-U型艾科薄超低元素型超純水機(重慶伊洋企業發展有限公司提供)；HSY2-SP電熱恒溫水浴鍋(北京市永光明醫療儀器廠提供)；WFH-201B紫外分析儀(上海精科實業有限公司提供)。

1.2 試藥 D-無水葡萄糖標準品(中國食品藥品檢定研究院提供，批號：110833-201205，供含量測定用)；苯酚，濃硫酸、無水乙醇、丙酮、乙醚、氯仿、三氯乙酸均為分析純，水為超純水。所有板藍根(序號與來源見表2)藥材樣品均經甘肅中醫學院李成義教授鑒定，為十字花科植物菘藍Isatis indigotica For t.的干燥根。

2 方法與結果

2.1 粗多糖的提取和精制多糖的制備 取經破碎的板藍根生藥200 g，置1 000mL的圓底燒瓶中加80%乙醇過夜，次日取出回流2小時，冷卻后濾過，濾液棄去，濾渣揮干溶劑加適量水，回流提取2次，2 h/次，合并兩次提取液并濃縮至150mL，給濃縮液中加無水乙醇直至溶液含醇量達80%，充分攪拌后于4℃冰箱中靜止過夜，次日濾過并將濾渣除醇后冷凍干燥至恒重，即得板藍根粗多糖。準確稱取以上制得的板藍根粗多糖，加蒸餾水200mL，再加氯仿多次萃取，隨后加5.0%三氯乙酸適量除去蛋白質［4］，并采用透析袋除去無機鹽離子，以活性炭脫色，濾過，濾液加無水乙醇使含醇量達80%，4℃冰箱中靜止過夜，離心，沉淀分別用無水乙醇、丙酮、乙醚洗滌，低溫烘干至恒重，制得精制板藍根多糖。

2.2 對照品溶液的制備 取D-無水葡萄糖標準品約10mg，精密稱定，置于100mL棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，搖勻，得濃度為0.106 1mg/mL的葡萄糖對照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取板藍根藥材粉末各0.2 g，精密稱定，置于150mL具塞瓶中，加80%乙醇100mL，回流1小時，放冷，濾過，濾渣連同濾紙揮干溶劑一起放入具塞瓶中，再加蒸餾水60mL，加熱回流2小時，趁熱濾過，用蒸餾水洗滌濾器，合并濾液與洗液，放冷，移入100mL容量瓶中稀釋至刻度，搖勻即可。

2.4 精制板藍根多糖的配制 精密稱取105℃干燥至恒重的板藍根粗多糖10mg，置于50mL棕色容量瓶中，加蒸餾水溶解并稀釋至刻度，搖勻置于冰箱中備用。

2.5 苯酚試液的配制 取苯酚300 g，加碳酸氫鈉0.15 g和鋁片0.25 g，常壓蒸餾182℃餾分，精密稱取該餾分25 g，定溶于500mL棕色容量瓶中，得5%苯酚溶液，置于冰箱中備用。

2.6 最大吸收波長的選擇 分別精密移取上述對照品溶液和供試品溶液各0.5mL，均置于20mL的具塞刻度試管中，補水至1.5mL，各加5%苯酚溶液1.5mL，混勻，再分別小心滴加濃硫酸5mL，充分搖勻，至沸水浴中煮沸15分鐘后，迅速冷卻，同上操作制得空白溶液，以空白溶液作參比。用紫外-可見分光光度計在400～600 nm全波長掃描，結果對照品溶液和供試品溶液均在487 nm處有最大吸收峰，故選擇487 nm為測定波長。

2.7 標準曲線的制備 精密吸取葡萄糖對照品溶液0，0.2，0.5，0.8，1，1.2 mL，分別置于20 mL的具塞刻度試管中，補水至1.5mL，各加5%苯酚溶液1.5mL，混勻，再分別小心滴加濃硫酸5mL，充分搖勻，至沸水浴中煮沸15分鐘后，迅速冷卻，同上操作制得空白溶液，以空白溶液作參比。用紫外-可見分光光度計在487 nm波長處測定吸光度值，以葡萄糖濃度C為橫坐標，吸光度A為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程為Y=43.295X-0.004 3(R=0.999 5)，結果表明葡萄糖對照品溶液在0.002 7～0.015 9mg/mL內線性關系良好。見圖1。

圖1 葡萄糖對照品標準曲線

2.8 換算因子的測定 取“2.4”項下精制的多糖儲備液0.5mL，按“2.6”項下測定吸光度，平行3份，每份測定2次，由回歸方程求出板藍根精制多糖中葡萄糖的濃度，并按公式f=W/CD［公式中W為板藍根精制多糖的質量(mg)，C為多糖溶液中葡萄糖的濃度mg/mL，D為板藍根多糖的稀釋倍數］，計算換算因子f，求得f均值為1.05，RSD為1.81%。

2.9 精密度試驗 取“2.2”項下制得的葡萄糖對照品溶液0.5mL，按照“2.6”項下方法連續測定6次，吸光度均值為0.344，RSD為2.21%，結果表明儀器精密度良好。

2.10 穩定性試驗 取同一產地的板藍根藥材樣品溶液，按照“2.6”項下方法操作，每隔20分鐘測定1次，連續測定6次，RSD為1.66%，結果表明樣品溶液在2小時內顯色穩定。

2.11 重復性試驗 稱取同一產地板藍根藥材粉末6份，按“2.3”項下分別制備溶液，測定其吸光度，結果多糖含量均值為13.38%，RSD為2.96%，表明重復性良好。

2.12 加樣回收試驗 精密稱取已知含量同一產地板藍根藥材樣品約0.1 g，精密稱定，平行6份，分別加“2.2”項下制得的葡萄糖標準品溶液適量，按“2.3”項下制備供試品溶液，測定吸光度，結果見表1。

2.13 樣品測定 按“2.6”項下方法分別測定甘肅省20個不同產地板藍根藥材樣品吸光度，每個樣品平行測定3次，由回歸方程求出各供試品溶液中葡萄糖濃度，測定結果見表2(以干燥品計算)。

3 討論

多糖作為板藍根藥材中增強免疫力的主要成分，其本身結構復雜，種類繁多，在分離純化以及結構測定上難度很大。本試驗結合前人研究成果，比較了回流提取法與超聲法提取板藍根多糖的提取效果，結果回流提取法效率高于超聲法提取法。另外，采用苯酚-硫酸法測定板藍根中多糖［5-6］，依次對水的用量，苯酚溶液用量，硫酸溶液用量，加熱時間及加熱溫度作了優化，得出了測定板藍根多糖最佳顯色條件為：板藍根多糖在水1mL，苯酚溶液1.5mL，硫酸溶液5mL，100℃水浴中加熱15分鐘顯色效果相對明顯。

表1 板藍根藥材加樣回收試驗結果(n=6)

表2 板藍根藥材樣品中多糖含量測定結果(n=3)

目前，板藍根多糖雖還未列入2010版《中國藥典》必測成分中，但基于多糖本身所具有的特殊性，無論是在醫藥還是保健品方面都有其不可代替的地位，因此研究板藍根中多糖具有一定的現實意義。本試驗比較了甘肅不同產地板藍根中多糖含量，結果發現不同產地多糖含量差異較大，其中以張掖市山丹縣位奇鎮十里堡村產的板藍根多糖含量最高，民樂縣三堡鎮韓莊村產的多糖含量最低，出現這種含量差異可能與兩地土壤類型、光照時間、氣溫高低及海拔高低等多條件方面有關。此外，也有文獻報道［7］不同產地菘藍種質內在品質差異除與遺傳因素有關外，很大程度與其所處環境密切相關。這進一步說明生長環境對板藍根藥材內在質量影響甚大。因此，合理規劃藥材種植區域將成為藥材品質優劣的關鍵，本試驗將為甘肅地區合理規劃板藍根種植區域和保證藥材質量方面提供借鑒性的資料。

［1］ 國家藥典委員會.中國藥典：一部［M］.北京：中國醫藥科技出版社，2010：191.

［2］ 黃家娣.板藍根化學成分和藥理作用綜述［J］.中國現代藥物應用，2009，3(15)：197-198.

［3］ 雷黎明.板藍根化學、藥理、質量及提取方法的研究進展［J］.時珍國醫國藥，2007，18(10)：2578-2580.

［4] 孔凡例，張名位，于淑娟，等.荔枝粗多糖脫蛋白方法的研究［J］.食品科技，2008，10(20)：142-145.

［5］ 朱婷，尹溽紋.張貴強，等.板藍根多糖提取工藝及對活性成分影響的研究［J］.中國新藥雜志，2013，22(12)：1390-1395.

［6]蘇玉順，李艷君，趙方振，等.紫外-可見分光光度法在植物多糖含量測定中的應用［J］.光譜實驗室，2011，28(3)：1101-1105.

［7］ 陳宇航，郭巧生，鄧喬華，等.菘藍不同種質活性成分動態積累及其藥材品質比較［J］.中國中藥雜志，2012，37(11)：1541-1544.

Determ ination of Polysaccharides in BanLanGen from DifferentHabitatsof Gansu Province

LIChengyi1,YANGMiaomiao1,ZHANG Yingshan2,LU Guodi1
1 Gansu University of Chinesemedicine,Lanzhou 730000,China; 2 Gansu Qizheng Tibetan Pharmaceutical Joint Stock Co.,Ltd

Objective:To distinguish the contentdifferencesof polysaccharides in BanLanGen(isatis tinctoria) from differenthabitats of Gansu Province by establishing a determ inationmethod.Methods:The polysaccharides in the Banlangen were extracted by water-extraction and alcohol-precipitationmethod and the polysaccharide contents were determ ined by phenol-sulfuric acid method.Results:The differences in different regions in Gansu province were great;the highestwas 16.22%,the lowest10.59%,the average recovery rate 99.42%and RSD 1.15%(n=6). Conclusion:The determiningmethod adopted,whichwas simple,accurate and practical,can be used tomeasure the contentof polysaccharides in Banlangen.Wholly,the polysaccharide contents of Banlangen in Gansu province are relatively low;because there exists great differences in the polysaccharide contents of Banlangen from different cities,countiesand towns,a scientific and rationalplanning for Banlangen′s planting division isnecessary.

BanLanGen;polysaccharides;contentdeterm ination

R259

A

1004-6852(2015)02-0005-03

2014-05-05

2013年甘肅省自然科學基金項目(編號1308RJZA176)。

李成義(1964—)，男，博士研究生導師，教授。研究方向：中藥品種與質量研究。