丹紅注射液對大鼠單側睪丸扭轉復位后健側睪丸生精功能的影響

夏 康，吳麗琴

廣州中醫藥大學附屬重慶北碚中醫院泌尿外科，重慶400700

丹紅注射液對大鼠單側睪丸扭轉復位后健側睪丸生精功能的影響

夏 康，吳麗琴

廣州中醫藥大學附屬重慶北碚中醫院泌尿外科，重慶400700

目的：探討丹紅注射液對大鼠單側睪丸扭轉復位后健側睪丸的組織學以及附睪精子生成的影響。方法：將30只健康雄性Wistar大鼠隨機分為假手術組(A組)、睪丸扭轉復位組(B組)、丹紅注射液處理組(C組)，每組10只。按Turner法建立左側睪丸扭轉模型，A組大鼠切開左側陰囊，使左側睪丸充分游離暴露，不予以扭轉，模擬Turner法手術過程隨意搬動睪丸，隨后縫合關閉陰囊;B組大鼠按Turner法制作睪丸扭轉模型：左側睪丸順時針繞精索旋轉720°，肉膜白膜縫合固定以防止復位，陰囊縫合，扭轉6小時后復位固定;C組大鼠按上述相同方法制備睪丸扭轉模型，于睪丸扭轉復位前60分鐘腹腔注射丹紅注射液(2mL/kg)，同時在術后3天每天分別注射丹紅注射液(2mL/kg)。各組喂養至術后4周時處死，取右側睪丸標本行組織病理學觀察，同時取右側附睪尾部行精子計數及活動率檢測。檢測睪丸組織一氧化氮合酶 (NOS)、血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)水平。結果：C組與B組相比，生精上皮層數增多，平均曲細精管直徑(MSTD)增大，同時附睪精子計數與活動率明顯升高，其差異有統計學意義(P＜0.05)。C組大鼠睪丸組織SOD水平升高，NOS、MDA水平降低，差異有統計學意義(P＜0.05)。結論：丹紅注射液能夠減輕大鼠單側睪丸扭轉復位后健側睪丸組織損害，使附睪精子生成顯著增多，機制可能為減少大鼠睪丸組織內自由基生成，提高其抗自由基能力。

丹紅注射液；睪丸扭轉；超氧化物歧化酶；一氧化氮合酶；丙二醛

睪丸扭轉是泌尿外科常見病，治療不及時可導致睪丸壞死［1］。常發生于青少年，早期手術復位后仍有36%～39%患者出現精液異常［2］。因此如何通過藥物治療減少復位手術后對睪丸生精功能的影響是研究熱點之一。本實驗通過建立大鼠單側睪丸扭轉模型，探討丹紅注射液對大鼠單側睪丸扭轉復位后健側睪丸的組織學以及附睪精子生成的影響及相關作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 雄性Wistar大鼠，SPF級，6～7周齡，體質量120～150 g，購于重慶醫科大學大學動物實驗中心［動物實驗合格證號：SCXK(渝) 2012-0001］，丹紅注射液(步長倍通制藥有限公司生產，批號：70713)。

1.2 方法

1.2.1 動物分組、模型建立以及取材 30只雄性Wistar大鼠隨機分為假手術組(n=10，A組)；睪丸扭轉復位組(B組，n=10)；丹紅注射液治療組(C組，n=10)。模型建立參考Turner法［3］。以3%戊巴比妥鈉40 mg/kg對大鼠實施腹腔麻醉，取左下腹部小切口，顯露左側睪丸。A組將睪丸游離后縫合固定于陰囊壁。其余2組將睪丸順時針扭轉720°維持6小時后復位。C組于睪丸扭轉復位前60分鐘腹腔注射丹紅注射液(2mL/kg)，同時在術后3天每天分別注射丹紅注射液(10μ/kg)。3組均喂養至術后4周時處死，取右側睪丸標本行組織病理學觀察，同時取右側附睪尾部行精子計數及活動率檢測。檢測睪丸組織一氧化氮合酶(NOS)、血清超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)含量。

1.2.2 檢測方法 1)睪丸組織病理學檢查：睪丸組織10%甲醛固定后，常規石蠟包埋切片，行HE染色，對睪丸組織進行形態學觀察；2)精子計數及活動率測定：取附睪尾部制成精子懸液，37℃溫水孵育15分鐘用精子計數板檢測密度。高倍鏡下隨機記錄100個精子中活動精子百分率；3)SOD活性采用黃嘌呤氧化酶法測定，MDA含量采用硫代巴比妥酸法測定，NOS活性采用化學比色法測定。

1.3 統計學方法 數據統計采用SPSS 13.0軟件，計量資料用(±s)表示，多組比較用單因素方差分析。P＜0.05表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 睪丸組織病理學觀察 A組：生精細胞層次有序，精細小管結構完整。B組：生殖細胞結構松散，可見散在壞死細胞，精細小管結構連續性中斷。C組：生殖細胞結構松散，未見壞死細胞，精細小管結構較完整。

2.2 附睪精子計數分析 C組精子密度與活動率明顯高于B組(P＜0.05)，大鼠睪丸組織NOS、MDA水平水平顯著低于B組(P＜0.05)，睪丸組織SOD水平顯著高于B組(P＜0.05)。見表1。

表1 3組精子計數、活率、睪丸組織SOD、NOS、MDA含量檢測

3 討論

研究認為睪丸扭轉時組織缺血，復位后血流再次恢復后大量氧分子充滿再灌注組織，產生大量氧自由基，通過氧化反應以及應激炎癥反應導致睪丸組織細胞損傷［4-5］。單側睪丸扭轉后可引起對側睪丸的損害，并導致生精功能低下和生育機能障礙，其機制可能與自身免疫性的交感性睪丸炎癥有關，研究發現一側睪丸扭轉后復位可導致免疫激活引起腫瘤壞死因子、炎癥反應作用導致對側睪丸生殖細胞損傷［6］。因此，如何應用藥物保護復位手術后對健側睪丸生精功能有重要意義。

丹紅注射液為丹參、紅花等提取物的中藥制劑，其主要成分為多種丹參酮、紅花黃素、紅花酮苷、原兒茶醛等。研究表明，丹紅注射液具有抗氧化、防止血栓形成及擴張血管等作用，能顯著改善微循環，并對心、腦、腎臟缺血損傷有保護作用［7］。

本實驗發現，大鼠睪丸扭轉再復位模型健側睪丸生殖細胞結構松散，可見散在壞死細胞，精細小管結構連續性中斷。丹紅注射液組未見壞死細胞，精細小管結構較完整。實驗說明大鼠睪丸扭轉再復位后健側睪丸組織受到損害同既往研究一致［8］。丹紅注射液組生殖細胞損害程度較輕。扭轉復位組同丹紅注射液組精子計數及精子活動率較假手術組減少(P＜0.05)，說明大鼠睪丸扭轉后精子質量明顯降低。丹紅注射液治療組同扭轉復位組比較精子計數以及精子活動率更高。MDA是過氧化脂質的分解產物，通過測定MDA可反映體內自由基產生的程度；SOD是細胞中主要的抗氧化酶之一，它在機體清除氧自由基的過程中起著關鍵作用；NOS不僅是生物體內重要遞質，而且能對細胞產生毒性作用。精子質膜上含有豐富的不飽和脂肪酸，極易被氧化，可引起精子結構的改變，進而影響精子功能［9-10］。本實驗表明丹紅注射液治療組同扭轉復位組比較SOD升高，MDA、NOS水平降低。說明丹紅注射液能提高大鼠睪丸組織內SOD水平、降低MDA、NOS水平，減少NO合成，改善精子質量。

綜上所述，大鼠睪丸扭轉再復位后健側睪丸精子計數以及精子活動率降低，丹紅注射液能夠減輕健側睪丸組織損害，保護健側睪丸生精功能。這可能與其能提高大鼠睪丸組織內SOD水平，降低MDA、NOS水平有關。

［1］Quddus MB，Mahmuud SM.Testiculer torsion：a diagnosis not to be missed［J］.Pak Med Assoc，2011，61(4)：391-392.

［2］ 辛鋒，申吉泓，趙暉.睪丸扭轉的研究進展［J］.國際泌尿系統雜志，2009，29(4)：548-550.

［3］Lin Xiaokun，Qin Le，Xie Tianchun，et a1.Efect of drug on testicular spermatogenetic function of the contralateral testicular af ter uni lateral testicular torsion in prepubertal rats［J］.Med Res，2013，42(1)：104-106.

［4］ 陳林，陳悅，詹維偉.單側睪丸扭轉致對側睪丸損傷的研究進展［J］.中國男科學雜志，2010，24(4)：66-68.

［5］Namazi H.Novel molecular mechanism to account for action of taurine against testicular ischemiareperfusion injury［J］.Urology，2011，72(2)：465-466.

［6］Romeo C，Antonuccio P，Esposito M，et a1.Raxofelast，a hydrophi lie vitamin E-l ike a ntioxidam，reduces testicular isehemia-reper fusion injuy［J］.Urol Res，2004，32(5)：367-371.

［7］ 王瑩，朱泉，虞成畢.丹紅注射液對2型糖尿病患者血脂、血流變學的影響［J］.中國醫學創新，2010，7(5)：80-90.

［8］Kamisawa H，Kojima Y，Mizuno K，et a1.Spermatogenesis af ter 1-stage fowlerstephens orchiopexy in experimental cryptorchid rat model［J］.J Urol，2010，183(6)：2380-2384.

［9］ 葛平玉，常青，許灌成.歸芪五子方對睪丸損傷模型大鼠精子凋亡以及SOD和MDA與NOS水平的影響［J］.醫藥導報，2013，32(8)：993-995.

［10］李樹綱，柴守華，高新艷，等.黃芪煎劑聯合丹紅注射液治療慢性腎炎臨床觀察［J］.西部中醫藥，2013，26(7):71-73.

Effcetsof DanHong Injection on the RatSperm atogenesis of the Healthy Testisafter Reduction of Testicular Torsion of the Affected Side

XIA Kang,WU Liqin
Urology Departmentof BeibeiHospital of Chinese Medicine Affiliated to Guangzhou University of Chinese Medicine,Chongqing 400700,China

Objective:To study theeffectof DanHong injection on thehistology of healthy testisand the sperm production of epididym ides of rats undergoing the reduction by testicular torsion on the affected side.Methods:The30maleWistar ratswere randomized into the sham-operated group(A),the reduction group(B)and the injection group (C)w ith 10 rats in each.Themodelsw ith testicular torsion established by Turnermethod,rats in group A were cut the leftscrotum to isolate and expose the testisw ithout torsion and rotate the testis by im itating the Turner operating process and lastly stitched the wound;as in the a group themodels established,the left testis of rats in group Bwere rotated 720°clockw ise round the varicosity to be fixed by stitching the sarcolemma and albuginea and the leftscrotum were closed,after fixation for6 hours the testiswere reduced and fixed;themodelsestablished as in the A and B group,the testis in the C group were injected DanHong injection 2m L/kg in the abdomen before the reduction of torsion for 60 m inutes and after the operation the rats were injected DanHong injection 2 m L/kg for 3 days.A fter feeding for 4 weeks,the rats of three groupswere killed,the right testiswere collected to be observed histopathologically,the sperm of the rightepididymideswere counted and their activity ratio were detected.Meanwhile,the levels of the nitricoxide synthase (NOS),serum superoxide dismutases(SOD)and malondialdehyde (MDA)were determ ined respectively.Results:In the comparison of the C and B group,the quantities of sem iniferous epithelium cellof the rats in group C were increased,the diameters of the seminiferous tubuleswere enlarged, sperm counts of epididym ides and activity ratios were raised significantly,and the differences between the two groupswere significant(P＜0.05).The SOD levelsof the rats'testes in group Cwere increased,while the NOSand MDA levelswere decreased,and the differences showed statisticalmeaning(P＜0.05).Conclusion:The DanHong injection can lighten impairmentof the healthy testis from the reduction of torsion of the affected side and significantly increase the sperm production of epididym ides,one of themechanismsmay be relevant to its reducing the production of the free radicalsand advancing itsability in fighting against the free radicals.

DanHong injection;testicular torsion;SOD;NOS;MDA

R285.5

A

1004-6852(2015)02-0015-03

2014-07-28

夏康(1979—)，男，碩士學位，主治醫師。研究方向：泌尿外科疾病的診治。