參附桃紅承氣湯對多器官功能障礙綜合征模型大鼠肝腎功能及組織病理的影響

趙曉丹鄧 旻陳志明朱仕兵馬 偉張曉潔

參附桃紅承氣湯對多器官功能障礙綜合征模型大鼠肝腎功能及組織病理的影響

趙曉丹1鄧 旻2陳志明2朱仕兵2馬 偉2張曉潔2

目的 觀察參附桃紅承氣湯對多器官功能障礙綜合征（MODS）模型大鼠肝腎功能及組織病理的影響。方法 將50只健康Wistar大鼠隨機分成空白組，模型組，參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組，每組10只。參照文獻方法造模，自造模前3天至處死前，空白組和模型組給予生理鹽水1mL灌胃，1天2次參附桃紅承氣湯組分別給予2、4、8g/mL生藥灌胃，1天2次，觀察各組大鼠造模前后生命體征。造模24h后處死大鼠取血，檢測血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、總膽紅素（TB）、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST），摘取肝、腎組織行病理學檢查。結果 模型組大鼠血清BUN、Cr、TB、ALT、AST水平明顯高于空白組［（24.26±7.1）mmol/L、（80.02±26.27）μmol/L、（4.51±1.29）μmol/L、（259.90±199.81）U/L、（345.80±209.95）U/L比（6.82±0.62）mmol/L、（45.68±6.69）μmol/L、（0.42±0.14）μmol/L、（55.33±16.43）U/L、（108.44±15.89）U/L，P均＜0.05］；與模型組比較，參附桃紅承氣湯高劑量組BUN、Cr、TB、ALT、AST水平顯著降低［（12.53±3.80）mmol/L、（56.51±14.63）μmol/L、（2.41±0.89）μmol/L、（67.00±36.27）U/L、（135.78±27.03）U/L比（24.26±7.1）mmol/L、（80.02±26.27）μmol/L、（4.51±1.29）μmol/L、（259.90±199.81）U/L、（345.80±209.95）U/L，P均＜0.05］。光鏡下，參附桃紅承氣湯高劑量組肝腎組織較模型組炎性浸潤有明顯改善，出血、水腫及壞死明顯減輕。結論 高劑量參附桃紅承氣湯能降低MODS模型大鼠血清BUN、Cr、TB、ALT、AST水平，對脂多糖（LPS）介導的MODS模型大鼠肝腎組織病理有改善作用。

大鼠；多器官功能障礙綜合征；參附桃紅承氣湯；肝功能；腎功能；組織病理

多器官功能障礙綜合征（multiple organ dysfunction syndrome，MODS）是臨床常見的急危重癥之一，可發展為不可逆的多器官衰竭，預后極差。預防MODS的發生和發展是降低其病死率的最重要的方法。本研究采用脂多糖（LPS）建立大鼠MODS模型，觀察參附桃紅承氣湯對MODS模型大鼠血清BUN、Cr、TB、ALT、AST及肝腎器官病理影響。

1 實驗材料

1.1 動 物 清潔級雄性Wistar大鼠50只，委托浙江中醫藥大學動物實驗研究中心定購（生產許可證號：SCXK（滬）2012-0002），體質量（200±20）g，屏障環境中采用獨立通風籠具（IVC）適應性喂養1周。1.2 試 劑 脂多糖（LPS，美國Sigma公司，批號102M4017V）；中性福爾馬林（中國福建東康生物技術有限公司，批號20140401）；水合氯醛分析純（上海化學試劑采購供應五聯化工廠，批號20131106）。

1.3 藥 物 參附桃紅承氣湯:太子參20g，制附子、桃仁、生大黃、芒硝各10g，枳實、厚樸各15g，桂枝、甘草各10g；以上生藥水煎濃縮至濃度為8g/mL，冷藏保存。

2 實驗方法

2.1 MODS模型建立 按文獻[1]方法復制模型，具體診斷參照文獻報道MODS動物模型診斷標準[1]。造模前12h大鼠禁食不禁水。脂多糖用生理鹽水溶解，濃度1mg/mL。模型組、參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組大鼠分別經腹腔注射脂多糖（7mg/kg），注射后輕揉大鼠腹部，造模后每隔2h觀察大鼠的體征變化。空白組大鼠不進行任何處理。

2.2 分組及給藥 按隨機區組法將50只大鼠隨機分成空白組10只，模型組10只，參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組各10只。自造模前3天至處死前，空白組和模型組給予生理鹽水1mL灌胃，1天2次；參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組按2、4、8g/mL生藥濃度給予參附桃紅承氣湯溶液1mL灌胃，1天2次。

2.3 標本采集及檢測 ①大鼠處死前12h禁食不禁水，手術前腹腔注射10%水合氯醛（3mg/kg）麻醉，將大鼠移入超凈臺上，經腹主動脈取血，分別置入相應離心管，3000轉分離血清10min，取血清后置于-80℃冰箱保存，用全自動生化分析儀檢測血清尿素氮（BUN）、肌酐（Cr）、總膽紅素（TB）、谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）。②大鼠放血至死后，立刻取大鼠肝腎組織放于中性福爾馬林中固定用于做病理切片。病理標本制備：將肝、腎組織用石蠟包埋，組織切片機切片固定，自動脫蠟機脫蠟、HE自動染色劑染色、自動封片機封片，光鏡下觀察并照相，留取病理圖片。

2.4 統計學方法 應用SPSS19.0軟件，實驗數據以均值±標準差（±s） 表示，采用單因素方差分析和t檢驗，各組大鼠死亡率采用卡方檢驗。

3 實驗結果

3.1 大體情況 空白組大鼠活動正常，生命體征穩定，無不適反應。模型組大鼠經腹腔注射LPS后1h內，大鼠煩躁不安，活動加劇，呼吸頻率加快；2～4h大鼠呼吸急促，體溫升高，活動減少同時所有大鼠開始扎堆；6～12h大鼠成群蜷縮扎堆，呼吸窘迫，不思飲食，糞便稀；18～24h大鼠開始慢慢恢復，有少許活動，個別大鼠開始飲食飲水。與模型組比較，參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組大鼠在同一時間段內上述癥狀相對較輕。

3.2 各組大鼠肝、腎功能指標比較 與空白組比較，模型組、參附桃紅承氣湯低、中劑量組BUN、Cr、TB、ALT和AST均顯著升高（P均＜0.05）；參附桃紅承氣湯高劑量組BUN、TB和AST明顯高于空白組（P均＜0.05），Cr、ALT與空白組比較差異無統計學意義（P＞0.05）；與模型組比較，參附桃紅承氣湯高劑量組BUN、Cr、TB、ALT、AST均不同程度降低（P均＜0.05）；參附桃紅承氣湯高劑量組BUN、Cr、TB、ALT、AST顯著低于低、中劑量組（P均＜0.05）。見表1。

表1 各組大鼠肝、腎功能指標比較（±s）

表1 各組大鼠肝、腎功能指標比較（±s）

注：與空白組比較，△P＜0.05；與模型組比較，*P＜0.05；與高劑量組比較，▲P＜0.05

組別空白組模型組參附桃紅高劑量組參附桃紅中劑量組參附桃紅低劑量組只數10 10 10 10 10 BUN（mmol/L）6.82±0.62 24.26±7.1△12.53±3.80△* 36.15±9.50△*▲22.09±5.97△▲Cr（μmol/L）45.68±6.69 80.02±26.27△56.51±14.63* 95.22±19.41△▲77.20±12.09△▲TB（μmol/L）0.42±0.14 4.51±1.29△2.41±0.89△* 4.84±1.32△▲3.22±0.67△*▲ALT（U/L）55.33±16.43 259.90±199.81△67.00±36.27* 195.00±76.73△▲412.22±303.73△▲AST（U/L）108.44±15.89 345.80±209.95△135.78±27.03△* 348.00±140.40△▲498.56±216.17△▲

3.3 各組大鼠肝、腎病理鏡檢 光鏡下，空白組大鼠肝組織結構清楚，肝細胞排列正常；模型組較對照組損傷明顯加重，可見肝血竇擴張淤血，肝細胞呈放射狀排列，肝細胞內可見小空泡，少數見點狀壞死，部分匯管區可見炎癥細胞浸潤；參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組較空白組加重，尤其是低、中劑量組更明顯，高劑量組較模型組明顯減輕。空白組大鼠腎組織結構清楚，皮髓分界明顯，腎小球內毛細血管正常；模型組較對照組損傷明顯加重，可見腎小球內毛細血管擴張充血，髓質血管擴張充血，系膜細胞增生，基質增多，部分出現基底膜的增厚和內皮細胞的增生，可見纖維組織增生，有炎癥細胞浸潤，腎小管上皮細胞可見腫脹變性；參附桃紅承氣湯低、中、高劑量組較空白組加重，尤其是低、中劑量組更明顯，高劑量組較模型組明顯減輕（封二圖1～2）。

4 討 論

MODS發病機制復雜，目前認為其本質是機體遭受嚴重損害因素打擊后，防御反應過強，致大量細胞因子、炎性介質及其它病理產物釋放，損傷細胞組織，導致器官功能障礙[2-3]。中醫認為，MODS是臟腑氣血陰陽等多方面失調、紊亂。MODS發生和發展主要為毒、瘀、虛貫穿病程始終[3-6]，“毒”致MODS啟動，“瘀”致MODS加速發展，“虛”是MODS較難康復的本質。因此，中醫防治MODS，宜扶正、祛瘀、通下，三者兼顧。

參附桃紅承氣湯是在大承氣湯基礎上增加益氣補虛、祛瘀之品，方中大黃善于攻下、通臟腑、破留血、利水腫、清熱瀉火、解熱毒、活血、破痰實；芒硝善于攻積、清熱、消腫；厚樸善于燥濕、除脹滿、消積導滯、消痰、下氣、去留熱、厚腸胃；枳實善于破氣行滯、除痞、瀉熱、活血、安胃氣、利五臟。大黃、芒硝常相須為用以增強瀉下功效；厚樸、枳實相伍助大黃蕩積滯、攻下熱結。藥理研究顯示，大黃可增加腸蠕動，抗感染，抑制多種細菌（如革蘭陽性和陰性菌、葡萄球菌、鏈球菌等），利膽健胃等。芒硝主要成分硫酸鈉的硫酸根離子不易被吸收，留在腸內形成高滲溶液，從而阻止腸內水分吸收，促進腸蠕動，以達到瀉下的目的。厚樸能抗炎，抑制多種細菌（如肺炎球菌、金葡萄菌等）。枳實可增加胃腸收縮節律，增加腦、腎等血流量，降低腦、腎等的血管阻力[7]。桃仁善于去血滯、破血、行血，祛瘀力較強，是臨床上治療瘀血阻滯病的常用藥。藥理研究顯示，桃仁提取液可改善血流動力學，擴張血管，增加血流量，改善血液循環，促進病情轉歸[7]。太子參善于補陰益氣，健脾胃。附子善于回陽救逆、溫中、益氣補虛。桂枝善于溫經通脈、助陽化氣。藥理研究顯示，太子參對淋巴細胞有明顯的刺激作用；附子可抗炎，強心，抑制毛細血管通透性的亢進；桂枝可解熱、降溫，抑菌（如白葡菌、金葡菌等），健胃，強心，緩解胃腸痙攣[7]。

本研究結果顯示，高劑量參附桃紅承氣湯能顯著降低由LPS所致MODS大鼠血清BUN、Cr、TB、ALT、AST水平，減輕肝、腎組織病理損傷，有預防MODS大鼠臟器功能損傷作用。

［1］胡森，盛志勇，周寶桐.MODS動物模型研究進展［J］.中國危重病急救醫學，1999，11（8）：504-507.

［2］譚波，陳媛媛，王興勇，等.大鼠MODS發病機制探討［J］.重慶醫科大學學報，2007，32（10）：1041-1048.

［3］欒櫻譯，姚詠明.淺析老年多器官功能障礙綜合征發病機制［J］.中華老年多器官疾病雜志，2010，9（6）：485-487.

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［5］魯俊，陳明祺，耿艷霞，等.益氣通瘀法對多器官功能障礙綜合征全身炎癥反應和凝血功能影響［J］.中國中西醫結合雜志，2014，34（1）：35-38.

［6］周江，王醒，魯俊，等.益氣通瘀法對多器官功能障礙腸道屏障保護作用臨床研究［J］.中國中醫急癥，2012，21（9）：1384-1386.

［7］高學敏.中藥學［M］.北京：中國中醫藥出版社，2002：181-292，379-380，53-502.

（收稿：2015-01-29 修回：2015-04-14）

Effect of Shenfu Taohong Chengqi Decoction on Hepatic and Renal Function and Tissue Pathology of Ratsw ith M ultiple Organ Dysfunction Syndrome

ZHAO Xiaodan1，DENG Min2，CHEN Zhiming2，ZHU Shibing2，MA Wei2，ZHANG Xiaojie2.1Zhejiang Chinese Medical University,Hangzhou (310053),China;2Department of Emergency,Hangzhou City Red Cross Hospital,Hangzhou(310003),China.

Objective To investigate the influence of Shenfu Taohong Chengqi Decoction on hepatic and renal function and histopathology of rats with multiple organ dysfunction syndrome（MODS）.M ethods Fifty healthy Wistar rats were random ly divided into blank group,model group,and low-,medium-and high-dose Shenfu Taohong Chengqi Decoction groups,with 10 rats in each group.MODS model was established according to the literature methods.Shenfu Taohong Chengqi Decoction groups were intragastrically given 2,4,and 8g/mL crude drug from 3d before to 1d after modeling.Other 2 groups were given 1 mL normal saline twice a day for the same period.Vital signs of rats were observed before and after modeling.All rats were sacrificed 24h later after modeling and their blood samples were taken to determine serum urea nitrogen（BUN）,creatinine（Cr）,total bilirubin（TB）,alanine aminotransferase（ALT）,and aspertate aminotransferase（AST）and tissue samples from their liver and kidney were taken for histopathological examination.Results The levels of BUN,Cr,TB,ALT,and AST in model group were significantly higher than those in blank group（24.26±7.1mmol/L,80.02±26.27μmol/L,4.51±1.29μmol/L,259.90± 199.81U/L,345.80±209.95U/L vs 6.82±0.62mmol/L,45.68±6.69μmol/L,0.42±0.14μmol/L,55.33±16.43U/L,108.44± 15.89U/L;all P＜0.05）.Compared with model group,the levels of BUN,Cr,TB,ALT,and AST in high-doseShenfu Taohong Chengqi Decoction group were significantly decreased（12.53±3.80mmol/L,56.51±14.63μmol/L,2.41± 0.89μmol/L,67.00±36.27U/L,135.78±27.03U/L vs 24.26±7.1mmol/L,80.02±26.27μmol/L,4.51±1.29μmol/L,259.90± 199.81U/L,345.80±209.95U/L;all P＜0.05）.Under the microscope,inflammatory infiltrates in hepatic and renal tissues from high-dose Shenfu Taohong Chengqi Decoction group were milder than that in model group,hemorrhage, edema and necrosis were significantly reduced as well.Conclusion High dose of Shenfu Taohong Chengqi Decoction can reduce serum BUN,Cr,TB,ALT,and AST levels of MODS rats,and ameliorate their lipopolysaccharidemediated hepatic and renal histopathological changes.

rats;multiple organ dysfunction syndrome;Shenfu Taohong Chengqi Decoction;liver function; renal function;histopathology

浙江省中醫藥科技計劃項目（No.2010ZA100）

1浙江中醫藥大學（杭州 310053）；2杭州市紅十字會醫院急診科（鄧旻，陳志明，朱仕兵，馬偉，張曉潔）（杭州 310003）

鄧旻，Tel：15858295000；E-mail：dengmin136@126.com