中期因子在子宮頸癌中的表達及其臨床意義

司馬學琴 劉馴驊 李敏才 寧志豐▲

1.湖北科技學院基礎醫學院，湖北咸寧 437100；2.廣東省人民醫院病理科，廣州 510000

近年來，子宮頸癌發病率及年輕化趨勢己成為全球性公共衛生問題。據世界衛生組織報道，全世界每年有約50萬例新發子宮頸癌病例，而我國每年新增該病患者達10萬例，占全世界新發病例的1/5。子宮頸癌的治療方法較多，有手術、放療和化療等綜合治療，我國每年仍有（2~3）萬女性死于子宮頸癌。惡性腫瘤的發生、發展是多種因素相互作用的結果，隨著生物化學及分子生物學理論與技術的進步，人們正在探索影響宮頸癌發生、發展的相關因子及對子宮頸癌更有效的治療手段，從而改善宮頸癌患者的預后，降低該病的復發率和死亡率[1-2]。本文主要探討中期因子（midkine，MK）在子宮頸癌中的表達與臨床病理關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月~2015年1月就診于本院經宮頸活檢組織病理證實且未經任何治療的子宮頸癌存檔石蠟包埋標本90例，包括鱗癌67例，腺癌23例。患者年齡45（21～66）歲，其中子宮頸癌Ⅰ期28例、ⅡA期25例、ⅡB期19例、Ⅲ期18例[按國際婦產科聯合會宮頸癌的臨床分期（FI-Go，2004標準）][3]；組織分化程度：高分化 28例，中分化35例，低分化27例；伴淋巴結轉移40例，無淋巴結轉移50例。另取慢性宮頸炎45例，患者年齡44.3（20～65）歲和宮頸上皮內瘤樣病變（CIN）45 例為對照組[年齡 45.7（31～70）歲，CINⅠ12例，CINⅡ14例，CIN Ⅲ19例]。3組患者的一般資料差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 研究方法

應用二步法免疫檢測法，用10%甲醛固定組織標本，石蠟包埋，將標本連續切厚度為4.0μm的片，每例患者保留2張切片，分別進行HE染色、MK染色。山羊抗人MK多克隆抗體和兔抗人瘦素多克隆抗體均購于美國Santa Cruz公司，SP免疫組織化學試劑盒購自福州邁新生物有限公司。通過染色、顯色、封片后鏡檢將組織切片脫蠟并脫水，參照說明書步驟染色，標本檢驗過程均無差異。將實驗結果與已知陽性圖片作對照。

1.3 結果判定[4]

在高倍鏡觀察選取有代表性的視野，每次約10個左右，每個視野計數50個細胞。若視野中有20%的細胞出現棕黃色染色，包括細胞質和（或）細胞膜，結果即為陽性。

1.4 統計學處理

采用SPSS 13.0軟件處理數據，計量資料以x±s表示，采用t檢驗，計數資料以%表示，采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 MK的鏡下表達

慢性宮頸炎和宮頸上皮內瘤樣病變組織的染色呈淺黃色，MK中期因子未見表達或表達微弱；位于宮頸組織邊緣癌組織病變嚴重的胞質和胞膜染色較重，成棕黃色，主要見于圖1、圖2。血管密集部位的癌細胞間質纖維組織和小血管內皮細胞染色也呈弱陽性。

圖1 宮頸癌細胞MK蛋白陽性表達（×400）

圖2 宮頸癌細胞MK蛋白陽性表達（×100）

2.2 MK在不同宮頸疾病中陽性表達率的比較

MK在子宮頸癌、慢性宮頸炎、宮頸上皮瘤樣組織中的陽性表達率為 78.9%（71/90）、8.9%（4/45）和11.1%（5/45），3 組比較，差異有統計學意義（χ2＝41.33，P＜0.05）。

2.3 MK在子宮頸癌各相關因素中表達情況的比較[5]

不同臨床分期、組織分化程度和有無淋巴結轉移宮頸癌的MK陽性率比較，差異有統計學意義（P＜0.05）。宮頸鱗癌與宮頸腺癌的MK陽性率比較，差異無統計學意義（χ2=16．52，P＞0.05）（表 1）。

表1 MK在宮頸癌各相關因素中表達情況的比較[n（%）]

3 討論

MK是體內內分泌系統的產物，能與肝素結合生長的低分子量蛋白質。在妊娠中期的胚胎組織中分布最廣的MK成年后僅表達在某些特定組織中。MK因子具有多種生物學活性，在人類腫瘤細胞中表達明顯，不僅能促進腫瘤細胞的生長，還可促進細胞分化、促有絲分裂、增強纖維溶酶活性等。近年已有研究發現，其在多種腫瘤組織中有異常表達，參與腫瘤的血管生成、抗細胞凋亡，并可影響腫瘤細胞的存活增殖與分化，還可能直接參與腫瘤的生長、轉移過程，其在良惡性組織病變中有明顯的表達差異。

MK是近年來新發現的基因，與多向因子共同組成肝素結合生長因子家族，最初在視磺酸誘導分化的早期胚胎瘤細胞中被發現。近年的研究表明，MK在腫瘤組織中有過度表達，與腫瘤的發生、發展和分化密切相關，并具有抗細胞凋亡的作用。MK在體內的分布隨著胚胎的發育而變化，妊娠中期是分泌高峰期，以后逐漸減少，成年后只在腎臟組織可檢測出。近年有研究發現，MK在肝癌、乳腺癌[6]等腫瘤組織中的表達，本研究主要是觀察MK在宮頸癌組織中的表達與臨床病理特征的關系。MK蛋白陽性表達主要位于宮頸癌腫瘤細胞的細胞質內，細胞核無染色情況，并且染色組織分布呈現出彌漫性，同時具有較為顯著的特異性，在組織邊緣部位表達增強。

本研究結果示，MK在子宮頸癌、慢性宮頸炎、宮頸上皮瘤樣組織中的陽性表達率分別為78.9%、8.9%、11.1%，差異有統計學意義（P＜0.05），提示MK在不同的宮頸病理中陽性率表達不同，在子宮頸癌中表達程度最高，故在以后的研究中考慮其可以作為宮頸癌病變的預兆及治療的研究入口[7-9]。子宮頸癌組織Ⅱ、Ⅲ期的MK陽性表達程度較Ⅰ期明顯，中、低分化和有淋巴結轉移的子宮頸癌組織的MK陽性表達率比高分化和無淋巴結轉移的子宮頸癌組織更高（P＜0.05），但宮頸鱗癌與宮頸腺癌的陽性表達率比較，差異無統計學意義，故MK隨著組織惡化程度的增高表達越明顯，在臨床可以為宮頸疾病，尤其是子宮頸癌的惡化程度提供參考。

本研究對比、分析了MK在子宮頸癌、慢性宮頸炎和宮頸上皮瘤樣組織中的不同分布，進一步說明MK在腫瘤細胞中表達明顯。王耀先等[10-11]認為，MK在子宮頸鱗癌陽性表達率顯著高于腺癌（P<0.01），與本研究結果不同，可能與研究過程中的標本人數或實驗方法有關，有待進一步探討。

綜上所述，MK在腫瘤組織中活性很高，但在正常組織中活性較低[12-16]，由于其在腫瘤組織中的特殊作用使其有望成為治療惡性腫瘤疾病的靶點，故對MK在子宮頸癌組織中的研究有一定的臨床意義，其可能成為子宮頸癌診斷和預后的重要指標。

[1]柳楊.淺談中期因子在宮頸癌組織中的表達及臨床意義[J].當代醫藥論叢，2014，12（18）：261-262．

[2]張健，鄭艾，柴丹，等.新輔助化療對宮頸癌組織中MK和MVD表達的影響[J].四川大學學報·醫學版，2008，39（6）：950-952.

[3]林仲秋．FIGO/IGCS婦科惡性腫瘤分期及臨床實踐指南之三：宮頸癌[J].國際婦產科學雜志，2008，35（3）：226-228．

[4]劉鈞，趙永年，譚榜憲，等.中期因子、一氧化氮合酶和VEGF在子宮頸癌的表達及臨床意義[J].診斷病理學雜志，2004，11（6）：415-417.

[5]高德紅，廖琪.轉移相關基因1在宮頸上皮內瘤變和宮頸癌組織中表達及意義[J].中國優生與遺傳雜志，2012，20（ 11 ）：31，73.

[6]張曙光，張林.Midkine基因在腫瘤治療中的研究進展[J].現代腫瘤醫學，2011，19（8）：1681-1684.

[7]Dai LC，Wang X，Yao X，et al.Antisense oligonucleotides targeting midkine inhibit tumor growth in an in situ human hepatocellular carcinoma model[J].Acta Pharnmcol Sin，2007，28（3）：453-458.

[8]傅瑤，梁冠盈，遲秋君，等.HPV感染及 MMP-2、MMP-7、MMP-9的表達與子宮頸癌相關性分析[J].哈爾濱醫科大學學報，2014，48（6）：444-448.

[9]Kadomatsu K，Muramatsu T.Midkine and pleiotrophin in neural development and cancer[J].Cancer Lett，2004，204（2）：127-143.

[10]王耀先，于暉，陳秀瑋，等.宮頸癌組織中中期因子表達與臨床病理特征的關系[J].哈爾濱醫科大學學報，2008，42（6）：622-624.

[11]楊越波，曾海濤，唐虹，等.影響子宮頸癌預后的高危因素分析[J].中國婦幼保健，2011，26（8）：1145-1148.

[12]高琨，丁麗，李力，等.中晚期子宮頸癌患者調強放療的療效及預后影響因素分析[J].中華婦產科雜志，2014，49（1）：30-35.

[13]高翔，張淑蘭.BMI-1基因和蛋白在子宮頸癌中的表達和臨床意義[J].中國醫科大學學報，2011，40（8）：719-721.

[14]王露穎，楊正才，楊竹，等.FOXC1蛋白在子宮頸癌及子宮內膜癌中的表達及意義[J].重慶醫科大學學報，2010，35（4）：497-500.

[15]申震，周穎，趙衛東，等.Vimentin及E-Cadherin在子宮頸癌中的表達及其與上皮細胞間質化的相關性[J].安徽醫科大學學報，2013，48（5）：505-508.

[16]宋恩霖，王茂梅，熊秀娟，等.子宮頸癌組織中AEG-1表達與微血管生成的關系[J].臨床與實驗病理學雜志，2014，30（7）：717-720.