異常黏液質證侯大鼠模型陰莖組織形態學改變的研究

買買提祖農·買蘇爾，朱彥劉瑩，劉鳳霞，阿地力江·伊明，張盼盼，毛吾蘭·買買提依明，阿卜杜熱伊木江·如則(新疆醫科大學基礎醫學院病理生理學教研室，人體解剖學教研室，生物學教研室，烏魯木齊800)

異常黏液質證侯大鼠模型陰莖組織形態學改變的研究

買買提祖農·買蘇爾1，朱彥劉瑩1，劉鳳霞2，阿地力江·伊明2，張盼盼2，毛吾蘭·買買提依明3，阿卜杜熱伊木江·如則2
(新疆醫科大學基礎醫學院1病理生理學教研室，2人體解剖學教研室，3生物學教研室，烏魯木齊830011)

目的研究維醫異常黏液質證侯大鼠模型陰莖組織形態學的改變，探尋異常黏液質體液對陰莖勃起功能影響的組織形態學依據。方法選用70只性功能正常的雄性SD大鼠，正常對照組10只，造模組60只，采用濕寒條件建立異常黏液質證侯模型，通過生物學表征驗證模型成功后從中隨機分為證侯模型組(16只)、證侯藥物反證組(15只)，反證3 w后，觀察陰莖組織形態學的變化。結果(1)HE染色顯示，正常對照組結構清楚完好。證侯模型組大鼠陰莖組織有明顯的水腫，同時伴有間質纖維化樣的表現。藥物反證組有明顯恢復。(2)Van Gieson (簡稱VG)染色結果顯示，證侯模型組大鼠陰莖組織平滑肌/膠原纖維低于正常對照組(P＜0.05)。藥物反證組大鼠陰莖組織平滑肌/膠原纖維高于證侯模型組(P＜0.05)，低于正常對照組(P＜0.05)。(3)Masson染色結果顯示，證侯模型組大鼠陰莖組織平滑肌/膠原纖維低于正常對照組(P＜0.05)。藥物反證組大鼠陰莖組織平滑肌/膠原纖維高于證侯模型組(P＜0.05)，低于正常對照組(P＜0.05)。結論維醫異常黏液證侯大鼠模型陰莖組織形態學發生改變，可能是影響其勃起功能及交配能力減退的病理學基礎。

異常黏液質;陰莖;形態學

維吾爾醫學作為祖國傳統醫學中不可分割的一部分，對陽痿、早泄等男科疾病有其獨特治療優勢。維吾爾醫學認為，異常黏液質的形成主要與長期食用濕寒性食物和處于濕寒性環境，包括食物污染、運動不足等有關，進而致使體內黏液質體液偏甚，破壞體液平衡，引發異常黏液質，致使體內熱能下降和代謝水平降低，導致各種病理性改變，并產生異常黏液質型相關疾病。本課題組前期研究工作中，以維醫理論為指導，采用濕寒環境和濕寒飼料方法成功建立了異常黏液質證侯大鼠模型，發現異常黏液質證大鼠模型出現明顯的勃起功能減退以及交配能力減弱［1-2］。為進一步探討異常黏液質體液對陰莖勃起功能影響的病理學依據，本研究初步研究了維醫異常黏液質證侯大鼠模型陰莖組織形態學的變化，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物70只性功能正常的雄性(SD)大鼠，雌性大鼠20只，體質量(200±20)g，由新疆醫科大學實驗動物中心提供。

1.2 主要儀器與試劑VG染色試劑盒(邁鑫生物MST-8001)，Masson病理特殊染色套組(珠海貝索生物技術有限公司)，造模所需儀器與試劑見文獻［3］。1.3動物分組和模型的建立異常黏液質證候大鼠模型建立見文獻［3］，將其隨機分為證侯模型組(16只)、證侯藥物反證組(15只)，反證時間為3 w，余29只模型大鼠用于其他研究。反證3 w后，1%戊巴比妥鈉腹腔注射(40 mg/kg)麻醉大鼠，從根部將陰莖剪斷，生理鹽水洗去血漬，以濾紙包裹后于10%甲醛溶液中固定。

1.4 觀察指標與方法陰莖組織進行石蠟包埋切片，行常規HE染色。同時，按照VG染色試劑盒及Masson病理特殊染色套組說明書操作，光鏡下觀察結果，每個樣本隨機選取10個視野，運用Image J圖像分析軟件分析海綿體平滑肌細胞與膠原纖維的比值。

1.5 統計學處理采用SPSS 17.0統計軟件對數據進行處理。計量資料用均數±標準差(-x±s)進行統計描述，多組數據間進行均衡性檢驗后，行方差齊性檢驗和正態性檢驗，如滿足方差分析要求，多組之間數據比較采用單因素方差分析，如不能滿足方差分析要求，則求出秩次后進行方差分析，檢驗水準α =0.05。

2 結果

2.1 陰莖組織HE染色結果在低倍鏡下，正常對照組大鼠陰莖自背側向腹側依次可見上端的陰莖背靜脈，周圍為兩側陰莖海綿體連接部位，伴有大量血竇間隙，下端為尿道海綿體，中央為尿道，周圍為致密的結締組織(圖1a)。高倍鏡下可見大量平滑肌及膠原纖維，血竇豐富，內皮細胞呈扁平狀附著血竇內壁表面。核質分界明顯，胞核深染，胞漿豐富，無水腫表現(圖1b)。證侯模型組大鼠陰莖組織中基質疏松，間質有纖維化改變，部分細胞核染色較淺并伴有空泡樣病變，提示出現水腫(圖1c)。證侯藥物反證組大鼠陰莖組織水腫明顯減輕，間質纖維化明顯改善，幾乎接近正常對照組，僅有個別細胞核著色較淺(圖1d)。

圖1 各組大鼠陰莖組織HE染色結果

2.2 陰莖組織VG染色結果VG染色后光鏡下觀察，大鼠陰莖組織膠原纖維染色為紅色，平滑肌組織染色為黃色，核為藍褐色，平滑肌多與膠原纖維交織(圖2a)。正常對照組大鼠陰莖組織中平滑肌與膠原纖維豐富，分布均勻，排列整齊、致密(圖2b)。證侯模型組膠原纖維明顯增多，平滑肌明顯減少(圖2c)。證侯藥物反證組膠原纖維明顯減少但仍稍多于正常對照組，平滑肌增多但仍稍少于正常對照組(圖2d)。

與正常對照組比較，證侯模型、證侯藥物反證組大鼠陰莖組織中平滑肌/膠原纖維比值降低了43.64%、12.73%，差異有統計學意義(P＜0.05)，說明維醫異常黏液質證侯模型大鼠陰莖組織中膠原纖維明顯增多，而平滑肌數量減少。經過伊木薩克片藥物反證3 w后，證侯藥物反證組大鼠陰莖組織中的平滑肌的數量明顯增加，膠原纖維的數量減少，平滑肌/膠原纖維與證侯模型組相比明顯升高，且差異具有統計學意義(P＜0.05)，見表1、圖3。

圖2 各組大鼠陰莖組織VG染色結果

表1 大鼠陰莖VG染色平滑肌/膠原纖維結果(s)

表1 大鼠陰莖VG染色平滑肌/膠原纖維結果(s)

注:與正常對照組比較，*P＜0.05;與證侯模型組比較，#P＜0.05。

樣本含量/n平滑肌/膠原纖維變化率/%正常對照組10 0.55±0.05-證侯模型組16 0.31±0.04*-43.64證侯藥物反證組15 0.48±0.05*#-12.73 F值57.97 P值0.000

圖3 各組大鼠陰莖組織VG染色結果柱狀圖

2.3 陰莖組織Masson染色結果Masson染色后光鏡下觀察，陰莖組織膠原纖維染色為藍色，平滑肌組織染色為紅色，核為藍褐色，平滑肌多與膠原纖維交織(圖4a)。正常對照組大鼠陰莖組織中平滑肌與膠原纖維豐富，分布均勻，排列整齊、致密(圖4b)。證侯模型組膠原纖維明顯增多，平滑肌明顯減少(圖4c)。而證侯藥物反證組膠原纖維明顯減少但仍稍多于正常對照組，平滑肌增多但仍稍少于正常對照組(圖4d)。

與正常對照組比較，證侯模型、證侯藥物反證組大鼠陰莖組織中平滑肌/膠原纖維比值降低了40.29%、8.56%，差異有統計學意義(P＜0.05)，說明維醫異常黏液質證侯模型大鼠陰莖組織中膠原纖維明顯增多，而平滑肌數量減少。經過伊木薩克片藥物反證3 w后，證侯藥物反證組大鼠陰莖組織中的平滑肌的數量明顯增加，膠原纖維的數量減少，平滑肌/膠原纖維與證侯模型組相比明顯升高，且差異具有統計學意義(P＜0.05)，見表2、圖5。

圖4 各組大鼠陰莖組織Masson染色結果

表2 大鼠陰莖Masson 染色平滑肌/膠原纖維結果( -x±s)

注:與正常對照組比較，*P＜0.05;與證侯模型組比較，#P＜0.05。

圖5 各組大鼠陰莖組織Masson染色結果柱狀圖

3 討論

維吾爾醫學體液論認為，人體由血液質、膽液質、黏液質和黑膽質四種體液質組成。正常生理情況下，4種體液質處于動態平衡，人體發揮正常生理功能，機體保持內穩態。當今由于社會環境污染嚴重，食品安全存在隱患，同時社會工作節奏加快，使機體長期受到體內外不良因素的影響。當體液發生變化，超越自行調節能力，出現體液平衡紊亂，產生異常體液，即可導致相關疾病的發生［4］。

本課題組前期研究，依據維吾爾醫學體液論，以“證侯表征模型”為造模理念，選用濕寒屬性的菠菜實和芫荽實，制備了濕寒性飼料結合濕寒性環境，成功建立了異常黏液質證大鼠模型［5］。通過生物學表征觀察發現，該模型大鼠飲水量減少，尿量、飲食量和大便量明顯增多，尿清，大便軟而不成形，毛發亂無光澤，少動嗜睡，舌苔厚而白膩，其生物學表征的改變符合維吾爾醫學異常黏液質證侯的一般特征。同時，通過APO勃起實驗和交配實驗發現，該模型大鼠勃起功能顯著減退，交配能力顯著減弱。同時，還發現經對證維藥伊木薩克片反證后，大鼠的勃起功能與交配能力得到明顯提升，得到有效治療。

眾所周知，陰莖勃起是通過陰莖陰莖海綿體平滑肌舒張來實現的，陰莖海綿體平滑肌細胞數量上和形態上的改變，必然會引起陰莖海綿體平滑肌舒張和收縮功能上的改變［6-7］。李煜罡等［8］研究發現，糖尿病性勃起功能障礙大鼠陰莖組織內皮細胞、平滑肌細胞和細胞器有明顯損傷。Yang等［9］認為，海綿體平滑肌數量明顯減少可能導致海綿體神經損傷大鼠性功能減退。Ferrini等［10］研究發現陰莖海綿體纖維化和膠原纖維增加是糖尿病大鼠發生勃起功能障礙原因之一。Kovanecz等［11］研究發現，勃起功能障礙大鼠模型陰莖組織中平滑肌/膠原纖維的比值較正常組減少。國內有研究認為，海綿體神經損傷后勃起功能障礙［12］、糖尿病勃起功能障礙［13］、大鼠陰莖平滑肌/膠原纖維比值降低(P＜0.05)，與國外研究及本研究結果一致。本研究在前期工作基礎上對該證陰莖組織進行了形態學的研究，尋找其病理學依據。結果發現維醫異常黏液質證侯大鼠模型陰莖組織明顯水腫，并伴有間質纖維化增加。同時VG染色與Masson染色證實異常黏液質證侯大鼠模型陰莖組織海綿體平滑肌細胞與膠原纖維的比值顯著下降。說明該模型大鼠陰莖勃起功能和交配能力減退，不只是功能的改變，可能伴隨著陰莖組織病理學的改變，同時提示可能其勃起功能與交配能力減退與海綿體平滑肌細胞形態的破壞有直接關系，并發現上述病理變化，經對證維藥伊木薩克片治療性反證后，得到有效修復，提示該藥對其陰莖組織結構的修復作用可能是其重要的機制之一。

綜上所述，在維醫異常黏液質證產生以及向異常黏液質型陽痿的發生、發展過程當中，陰莖組織的組織病理學改變在對勃起功能和交配能力減退及產生陰莖勃起功能障礙方面是重要環節，更是其組織病理學基礎，但其具體機制還需要進一步研究。

［1］阿地力江·伊明，范強，潘建春，等.維醫異常黏液質證侯與陽痿病證大鼠性行為學改變的研究［J］.中國男科學雜志，2011，25(9):20-23.

［2］阿地力江·伊明，潘建春，哈木拉提·吾甫爾，等.維醫異常黏液質證侯與陽痿病證大鼠模型生殖激素的改變及其生物學意義［J］.新疆醫科大學學報，2012，35(11):1438-1444.

［3］阿地力江·伊明，范強，哈木拉提吾甫爾，等.維醫異常黏液質陽痿病證動物模型的建立與反證［J］.中國男科學雜志，2011，25(9):3-9.

［4］熱娜古麗·艾則孜，沙吉旦·阿不都熱衣，金偉，等.復雜性疾病維吾爾醫分型及其血栓前狀態研究［J］.中國中醫藥信息雜志，2009，16(2):23-25.

［5］阿不都熱依木·卡地爾.中華本草:維吾爾藥卷［M］.上海:上海科學技術出版社，2005:162-164.

［6］Ferrini MG，Kovanecz I，Sanchez S，et al.Fibrosis and loss of smooth muscle in the corpora cavemosa precede corporal veno-occlusive dysfunction(CVOD)induced by experimental cavernosal nerve damage in the rat［J］.JSex Med，2009，6(2):415-28.

［7］葉挺宇，韋安陽，萬波，等.糖尿病性勃起功能障礙大鼠陰莖海綿體平滑肌細胞體外培養模型的建立［J］.南方醫科大學學報，2010，30(2):351-354.

［8］李煜罡，潘恩山，朱曉光.益腎活血湯對糖尿病性ED大鼠陰莖海綿體平滑肌細胞calponin 1和OPN表達的影響［J］.中國男科學雜志，2013，27(6):13-18.

［9］Yang F，Zhao JF，Shou QY，et al.Phenotypic modulation of corpus cavernosum smoothmuscle cells in a ratmodel of cavernous neurectomy［J］.PLoSOne，2014，9(8):e105186.

［10］Ferrini MG，Moon J，Rivera S，et al.Amelioration of diabetes-induced cavernosal fibrosis by antioxidant and anti-transforming growth factor-β1 therapies in inducible nitric oxide synthase-deficientmice［J］.BJU Int，2012，109(4):586-593.

［11］Kovanecz I，Gelfand R，Masouminia M，et al.Oral Bisphenol A (BPA)given to ratsatmoderate doses isassociated with erectile dysfunction，cavernosal lipofibrosis and alterations of global gene transcription［J］.Int J Impot Res，2014，26(2):67-75.

［12］卞軍，劉存東，楊建昆，等.持續小劑量他達拉非改善海綿體神經損傷后陰莖海綿體纖維化的研究［J］.中華實驗外科雜志，2013，6:1189-1191.

［13］李小鑫，邱雪峰，余文，等.糖尿病大鼠陰莖海綿體線粒體氧化應激損傷與保護［J］.北京大學學報，2011，4:189-193.

The study of penile tissuemorphological changes of abnormal balgam syndrome ratsmodel induced by Uyghur medicine

Maimaitizunong Maisuer1，ZHU Yanliuying1，LIU Fengxia2，Adilijiang Yim ing2，ZHANG Panpan2，Maowulan Maimaitiyim ing3，Abudureyimujiang Ruze2
(1Department of Pathophysiolog，2Department of Human Anatomy，3Department of Biology，Collge of Basic Medicine，Xinjiang Medical University，Urumqi830011，China)

Ob jective To study penile tissue morphological changes of abnormal balgam syndrome ratsmodel induced by Uyghurmedicine.Methods 70 normalmaturemale SD ratswere selected in the study，10 of them were random ly chosen as the control group;other60 were treated in a cold and humid environmentuntil themodelofabnormal balgam syndrome was established.Ratbiological characterization was observed about22 weeks until the establishmentof abnormalbalgam syndromemodel，16 of them were random ly divided into abnormal balgam syndrome model group and 15 of them weremedication disproof group of abnormal balgam syndromemodel.After 3 weeks of disproof，we detected themorphological changes of penile tissue.Results(1)HE staining showed that structure of penile tissue was normal in normal control group.There was significant edema and interstitial fibrosis in penile tissue in abnormal balgam syndromemodel group of rats.Therewasminor repair inmedication disproof group of abnormal balgam syndrome model.(2)Van Gieson staining results showed，the ratio of smooth muscle/collagen fibers in penile tissue of abnormal balgam syndromemodel group of ratswas significantly lower than normal control group(P＜0.05).The ratio of smoothmuscle/collagen fibers in penile tissue ofmedication disproofgroup of abnormal balgam syndromemodelwas higher than abnormal balgam syndrome model group(P＜0.05)，lower than the normal control group(P＜0.05).(3)Masson staining resultswere the same with V.G staining results.ConclusionSignificantmorphological changes of penile tissue in abnormal balgam syndrome ratmodel induced by Uygurmedi-cinemay be the histopathology basis of erectile function decline.

abnormal balgam syndrome;penile;morphology

R33

A

1009-5551(2015)06-0687-05

10.3969/j.issn.1009-5551.2015.06.007

2015-04-10］

(本文編輯楊晨晨)

國家自然科學基金(81160470，81260581)

買買提祖農·買蘇爾(1964-)，男(維吾爾族)，教授，碩士生導師，研究方向:ED的血管舒張功能改變的病理生理學研究。

阿地力江·伊明，男(維吾爾族)，教授，博士生導師，研究方向:生殖健康的中維西醫結合研究，E-mail:adljym@163.com。