玫瑰花總多酚的藥效學初步研究

馬依努爾·拜克力，徐建軍，陳君，阿吉艾克拜爾·艾薩(中國科學院新疆理化技術研究所干旱區植物資源化學重點實驗室，省部共建新疆特有藥用資源利用國家重點實驗室培育基地，烏魯木齊800;中國科學院大學，北京00049)

玫瑰花總多酚的藥效學初步研究

馬依努爾·拜克力1，2，徐建軍3，陳君1，2，阿吉艾克拜爾·艾薩1，2
(1中國科學院新疆理化技術研究所干旱區植物資源化學重點實驗室，2省部共建新疆特有藥用資源利用國家重點實驗室培育基地，烏魯木齊830011;3中國科學院大學，北京100049)

目的探討對玫瑰花總多酚的初步藥效學。方法采用動物實驗研究了玫瑰花總多酚對小鼠自發活動、凝血時間、缺氧實驗、耳廓微循環、醋酸所致扭體反應的鎮痛作用以及大鼠離體子宮和陰虛內熱癥大鼠的影響。結果玫瑰花總多酚可降低小鼠自發活動、延長凝血時間、明顯延長耐缺氧存活時間，明顯增加微血管管徑、顯著降低醋酸所致小鼠扭體次數，可以興奮大鼠離體子宮平滑肌的自發活動以及有限度地改善陰虛大鼠體癥。結論玫瑰花總多酚具有很好的藥用和食用價值。

玫瑰花總多酚;凝血;耐缺氧;耳廓微循環;鎮痛;子宮

玫瑰花為薔薇科植物玫瑰(Rosa rugosa Thunb)的干燥花蕾，是維吾爾族重要的民間藥材，具有悠久的栽培和藥用歷史，至今臨床仍在使用，其具有行氣解郁、調中和血、強肝、強肺、平衡內分泌、緩和神經疲勞、養顏的功效，可治療月經不調、腫毒、宿醉、更年期障礙、便秘等［1-3］。玫瑰花性溫味甘微苦，無毒，入肝脾二經。玫瑰花除具有較高的藥用價值外，其食用價值也很高［4］。目前，對玫瑰花抗氧化［5-7］、降血糖［8］、抗衰老［9］的研究也在開展中，并有研究對其中的化學成分進行分離和鑒定［10-15］。

本研究針對玫瑰花總多酚的藥效進行研究，尋找其在自發活動、凝血、耐缺氧、耳廓微循環、鎮痛等方面的作用，并且研究其對小鼠離體子宮以及對陰虛內熱癥大鼠的影響，為研究玫瑰花的藥用和食用價值提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物昆明種小鼠，體質量18～22 g，雌雄各半;Sprague-Dawley(SD)大鼠，體質量160～220 g，雌雄各半或單一雌性(由新疆醫科大學和新疆疾控中心地方病研究所實驗動物中心提供)，小鼠和大鼠生產許可證號分別為新醫動字SCXK(新) 2003-0002和X2003-0001。［動物房采用12 h晝夜節律控制，有空氣凈化裝置，恒溫恒濕(室溫21℃～24℃，濕度40%～60%)，整體面積10 m×12 m，其中小動物室面積4 m×6 m］。每只鼠僅使用1次。采用雙盲實驗，觀察者未知實驗前每組動物所給藥物。實驗過程遵守歐盟實驗動物使用原則。

1.2 實驗藥材玫瑰花于2009年5月下旬采自新疆和田地區墨玉縣，由中科院新疆生態地理研究所沈冠冤研究員鑒定為薔薇科植物玫瑰(Rosa rugosa Thunb)的干燥花蕾。玫瑰花總多酚的制備:取玫瑰花藥材500 g，加50%乙醇回流提取(60℃)3次，每次3 h，合并提取液，回收乙醇至無醇味，靜置過夜，濾過，濾液放入烘箱內60℃烘干，得到玫瑰花總多酚紅色粉末25 g，易溶于水，有濃烈玫瑰花香氣。照紫外-可見分光光度法(《中華人民共和國藥典) 2005年版一部附錄VA)測定總多酚含量(62.3±0.5)%。

1.3 儀器與試劑GL-I光電計數儀(天津醫療器械修配廠生產)，C2000-2高性能血凝儀(深圳市航創醫療設備有限公司生產)，SV-4組織灌流裝置(成都泰盟科技有限公司生產)，BL-410生物機能實驗系統(成都泰盟科技有限公司生產)，722分光光度儀(上海第三分析儀器廠生產)，Sigma 3K30低溫高速離心機(德國Sigma公司生產)，TDL80-213臺式離心機(上海安亭科學儀器廠生產)，H.H.S 216恒溫水浴鍋(上海醫療器械三廠生產)。陽性對照藥為維吾爾藥玫瑰花糖膏(收載于《中華人民共和國衛生部藥品標準》)，紅褐色膏狀物，味甜質軟，購于新疆維吾爾藥業責任有限公司。烏拉坦購于上海山浦化工有限公司，苯甲酸雌二醇購于上海通用藥業股份有限公司，鹽酸苯海拉明注射液購于天津藥業集團新鄭股份有限公司，注射用甲磺酸酚妥拉明購于上海復旦孵化藥業有限公司，異搏定購于天津市中央藥業有限公司，吲哚美辛購于山西云鵬制藥有限公司，甲狀腺素購于上海實業聯合集團長城藥業有限公司，冰醋酸購于天津市化學試劑三廠，二甲苯購于西安化學試劑廠。

1.4 實驗方法

1.4.1 自發活動影響實驗昆明種小鼠50只，雌雄各半，末次給藥45 min后，單只小鼠置GL-I光電計數儀計數倉中，安靜5min后，記錄15min內小鼠自發活動情況(身體通過光電計數器的次數)。

1.4.2 凝血時間影響實驗昆明種小鼠50只，雌雄各半，給藥程序同“1.4.1”項下方法。末次給藥45 min后，頸椎脫臼處死小鼠，取血2 m L加入枸櫞酸鈉抗凝采血管，測定凝血酶原時間。

1.4.3 耐缺氧影響實驗昆明種小鼠50只，雌雄各半，給藥程序同“1.4.1”項下方法。末次給藥45min后，置小鼠于同批同規格250 mL磨口具塞錐形瓶中(內置固定重量新鮮鈉石灰以吸收二氧化碳和水)，瓶口封水以檢查漏氣開始計時，直至小鼠窒息死亡，即為耐缺氧時間。

1.4.4 耳廓微循環影響實驗昆明種小鼠50只，雌雄各半，按性別、體質量隨機分成空白組、陽性對照組、高劑量組、中劑量組、低劑量組5組。以20%烏拉坦麻醉(0.065 mL/10 g)，左耳兩側脫毛，用阿拉伯膠固定，置目鏡6×、物鏡40×光學顯微鏡下觀察，照相并記錄毛細血管清晰、分支較多的部位，次日起連續灌胃給藥7 d，給藥程序同給藥程序同“1.4.1”方法。再次麻醉，左耳雙側脫毛后照相并記錄，統計同一位置微血管管徑和毛細血管網交點。

1.4.5 對醋酸所致扭體反應的鎮痛實驗昆明種小鼠50只，雌雄各半，按性別、體質量隨機分成空白組、陽性對照組、高劑量組、中劑量組、低劑量組5組，高劑量組9mg/10 g、中劑量3mg/10 g、低劑量1 mg/10 g、陽性對照0.1 g/10 g體質量灌胃給藥，空白對照組灌胃等量蒸餾水，1 d給藥1次，連續給藥7 d。末次給藥45 min后，小鼠腹腔注射0.6%醋酸0.2 mL/只，記錄15min內小鼠扭體次數(表現為腹部收縮、軀體扭曲、后肢伸展及蠕行等)。

1.4.6 對未孕大鼠離體子宮影響實驗未孕、性成熟SD雌性大鼠20只，體質量160～180 g，實驗前每只大鼠連續兩天腹腔注射苯甲酸雌二醇0.4mg/d以活化子宮，提高子宮平滑肌對藥物的敏感性。頸椎脫臼處死大鼠，取卵巢及子宮分叉處之間的中段子宮角，沿系膜縱軸剖開子宮，Krebs緩沖液(NaCl 120.6mmol/L、KCl 5.9 mmol/L、NaH2PO41.2 mmol/L、MgCl21.2 mmol/L、NaHCO315.4 mmol/L、CaCl22.5 mmol/ L、C6H12O611.5 mmol/L，pH=7.4)漂洗后，每側子宮依平滑肌纖維縱行方向取寬2 mm的肌條，每只大鼠制備4條。新鮮子宮平滑肌條分別置于15 mL 37℃Krebs液套管中，1 g前負荷溫育1 h(每20min更換Krebs液)。待自發活動穩定后再加入藥物，低劑量、中劑量、高劑量組的終濃度分別是2、4、8 g/L玫瑰花提取物。以加藥8 g/L玫瑰花提取物作為對照，肌條自發活動平穩后分別加入苯海拉明(2×10-6mol/L)、酚妥拉明(2×10-6mol/L)、吲哚美辛(2× 10-5mol/L)、異搏定(2×10-7mol/L)，5 min后，再加入相同濃度玫瑰花提取物(8 g/L)為受體阻斷劑+藥物組。實驗換藥間反復沖洗肌條。記錄平滑肌條(8條有效肌條)收縮波平均頻率、張力和持續時間。

1.4.7 對陰虛內熱癥大鼠影響實驗雌性SD大鼠50只，體質量160～200 g，按體質量隨機均分成空白組、陽性對照、高劑量組、中劑量組、低劑量組5組。每只大鼠每天腹腔注射甲狀腺素2.5mg/200 g體質量以形成雌性大鼠陰虛模型，連續造模3 w，若體質量下降、脫毛、舌腫脹、陰道涂片未角質化細胞明顯增多即為造模成功。玫瑰花總多酚高劑量組3.0 mg/100 g、中劑量組2.0 mg/100 g、低劑量組1.0 mg/100 g、陽性對照組0.5 g/100 g體質量灌胃給藥，空白對照組灌胃等量蒸餾水，1 d給藥1次，連續給藥7 d。測定體質量，頸椎脫臼處死后測量舌、肝、子宮重量與體質量的比值、肛溫、陰道沖洗液未角質化上皮細胞計數。

1.5 統計學處理采用SPSS11.0統計軟件對數據進行統計學分析，數據采用t檢驗和chi-square檢驗，檢驗水準α=0.05。

2 結果

2.1 玫瑰花總多酚對自發活動的影響與空白組相比，僅低劑量組結果明顯偏低，差異有統計學意義(P＜0.05)。玫瑰花總多酚對于雌雄小鼠效果不同，低劑量組雄性小鼠活動次數較空白組明顯偏低，差異有統計學意義(P＜0.05)。雌性小鼠各劑量組和空白、陽性組對比差異均無統計學意義。與空白組比較，玫瑰花總多酚低劑量組小鼠有自發活動降低的趨勢，見表1。

2.2 玫瑰花總多酚對凝血時間的影響玫瑰花總多酚高、中、低劑量組與空白對比，僅中劑量組差異有統計學意義(P＜0.05)，凝血酶原時間延長。與陽性對照組相比，玫瑰花中、低劑量組雌性小鼠的凝血酶原時間延長，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表2。

表1 玫瑰花總多酚對小鼠自發活動的影響(次/小鼠，n=10)

表2 玫瑰花總多酚對小鼠凝血時間的影(n=10)

2.3 玫瑰花總多酚對常壓耐缺氧時間的影響與空白組比較玫瑰花總多酚高、中、低劑量組耐缺氧存活時間明顯延長，差異有統計學意義(P＜0.01)。玫瑰花總多酚高劑量組與陽性對照組比較，耐缺氧存活時間較長，差異有統計學意義(P＜0.01)，說明玫瑰花總多酚能顯著延長小鼠的常壓耐缺氧存活時間，對腦缺氧或心肌缺血具有改善作用，可能具有抗氧化、增強組織耐缺氧能力的藥效作用，見圖1。

圖1 玫瑰花總多酚對小鼠耐缺氧時間的影響(n=10)

2.4 對耳廓微循環的影響給藥后，各組毛細血管網交點數無變化;玫瑰花總多酚各劑量組和陽性對照組的微血管管徑明顯增加，差異有統計學意義(P＜0.01)。與陽性對照組比較，玫瑰花總多酚各劑量組微血管管徑和毛細血管網交點數均無明顯變化，差異無統計學意義(P＞0.05)，見表3。

2.5 玫瑰花總多酚對醋酸所致扭體反應的鎮痛效果與空白對照組比較，玫瑰花總多酚高、中、低各劑量組小鼠扭體次數明顯降低，有統計學意義(P＜ 0.05);與陽性對照組比較，小鼠扭體次數明顯減低，差異有統計學意義(P＜0.05)，見表4。

表3 玫瑰花總多酚對小鼠耳廓微循環的影響(n=10，-x±s)

表4 玫瑰花總多酚對醋酸致小鼠扭體次數的影響(n=10，±s)

表4 玫瑰花總多酚對醋酸致小鼠扭體次數的影響(n=10，±s)

注:與空白組比較，＊＊P＜0.01，*P＜0.05;與陽性對照組比較，##P＜0.01，#P＜0.05。

組別扭體反應次數/次雄性雌性全部空白組29.6±17.7 23.2±21.3 26.4±18.8陽性對照組27.8±8.73 21.6±15.5 24.3±12.6高劑量組6.00±13.2#*9.67±8.69*7.83±10.9##＊＊中劑量組8.33±6.41##*5.00±11.3#*6.67±8.92##＊＊低劑量組18.2±14.9 6.80±9.55*13.0±13.5#*

2.6 玫瑰花總多酚對離體大鼠子宮的影響對比未使用藥物狀態，玫瑰花總多酚高、中、低劑量組的子宮平滑肌收縮頻率增加、張力增強，差異有統計學意義(P＜0.01)，但持續時間無明顯變化。分別加入不同受體阻斷劑5 min后，再加入高劑量組濃度的玫瑰花總多酚，和單獨高劑量組進行比較。結果表明:苯海拉明阻斷H1受體后，加入玫瑰花總多酚子宮平滑肌收縮頻率降低，張力減小，差異有統計學意義(P＜0.01)，但對持續時間無明顯影響。對比空白組，平滑肌無顯著變化。酚妥拉明阻斷α受體后，加入玫瑰花總多酚，子宮平滑肌收縮頻率降低，張力減小，差異有統計學意義(P＜0.01)。與空白組比較，平滑肌無明顯變化。異搏定阻斷L型Ca2+通道后，加入玫瑰花總多酚，子宮平滑肌收縮頻率降低(P＜0.01)，張力減小(P＜0.05)，差異有統計學意義。與空白組比較，平滑肌無明顯變化。吲哚美辛抑制前列腺素合成酶后，加入玫瑰花總多酚，子宮平滑肌僅張力減小，差異有統計學意義(P＜0.01)。與空白組比較，肌條收縮頻率和張力仍明顯增大(P＜0.05)，見表5。

2.7 對陰虛內熱癥大鼠的影響利用腹腔注射甲狀腺素以形成雌性大鼠陰虛模型，出現體質量下降、脫毛、舌腫脹、陰道涂片未角質化細胞明顯增多等特征癥狀。其中體質量、舌重系數、肝重系數、子宮系數、肛溫采用t檢驗，陰道沖洗液未角質化上皮細胞計數采用chi-square檢驗。對比陰虛大鼠造模前、成模后以及實驗結束時的各組大鼠體質量，差異無統計學意義(P＞0.05)(圖2)，僅發現模型組體質量比其他各組偏低。模型組大鼠造模后陰道上皮未角化細胞有增多趨勢，但由于測試時間延后等原因肛溫明顯降低。

圖2 甲狀腺素誘導陰虛模型對雌性大鼠體質量的影響

各組舌重系數對比差異均無統計意義(P＞0.05)。與空白組比較，陽性組和模型組的肝重系數明顯降低，差異有統計學意義(P＜0.01);與空白組比較，玫瑰花總多酚各劑量組的肝重系數降低，但差異無統計意義(P＞0.05)。由于子宮充溢，模型組子宮系數比空白對照組明顯升高，差異有統計學意義(P＜0.05)，其余各給藥組與空白組、模型組比較，差異均無統計學意義(P＞0.05)，玫瑰花總多酚各劑量組子宮系數與陽性組比較均無明顯差異(P＞0.05)。各組陰道未角質化上皮細胞計數結果對比均無統計學意義(P＞0.05)，但與模型組比較，各給藥組未角質化細胞計數有降低趨勢。結果表明玫瑰花總多酚可改善陰虛模型大鼠體癥、降低陰道上皮細胞角質化程度，其對陰虛內熱癥大鼠紊亂的生殖、內分泌系統有正向調節作用，但作用有限，見表6。

表5 玫瑰花總多酚對大鼠離體子宮的收縮作用(n=8，s)

表5 玫瑰花總多酚對大鼠離體子宮的收縮作用(n=8，s)

注:與空白組比較，＊＊P＜0.01，*P＜0.05;與阻斷組比較，##P＜0.01，#P＜0.05;與玫瑰花多酚高劑量組比較，※※P＜0.01，※P＜0.05。

組別收縮頻率/(次/5min)張力/g持續時間/s空白組3.88±0.83 1.31±0.16 28.38±2.56高劑量組7.00±0.76＊＊8.11±0.46＊＊29.13±3.56中劑量組6.75±0.71＊＊6.51±0.85＊＊32.25±11.51低劑量組5.50±0.76*5.25±1.22＊＊28.38±2.56苯海拉明組4.88±0.64 4.92±0.99 27.25±3.77苯海拉明+高劑量組3.38±0.52##※※3.13±0.43##※※26.38±4.57酚妥拉明組3.25±0.46 2.45±0.26 25.25±4.92酚妥拉明+高劑量組3.38±0.52※※3.27±1.00#※※23.00±3.07#吲哚美辛組3.13±0.35 1.96±0.05 23.75±3.96吲哚美辛+高劑量組4.29±0.95*#2.34±0.60＊※※21.71±1.89維拉帕米組2.50±0.53 2.50±0.46 22.12±2.17維拉帕米+高劑量組3.29±0.49##※※4.37±2.50※21.14±1.57

表6 玫瑰花總多酚對陰虛大鼠體癥的影響(n=10，

表6 玫瑰花總多酚對陰虛大鼠體癥的影響(n=10，

注:與空白組比較，＊＊P＜0.01，*P＜0.05;與模型組比較，※※P＜0.01。

組別肛門溫度/℃舌重系數/(g/100 g)肝重系數/(g/100 g)子宮系數/(g/100 g)陰道未角質化上皮細胞計數/(個/cm2)空白組38.0±0.48※※0.28±0.02 4.80±0.22 0.35±0.07 40.6±31.8模型組36.0±0.69 0.27±0.01 3.39±0.22＊＊0.48±0.17*47.0±24.3陽性對照組37.2±1.03※※0.27±0.04 3.32±0.38＊＊0.32±0.15 23.7±12.2高劑量組37.6±0.65※※0.27±0.08 3.50±1.28 0.35±0.14 32.3±5.03中劑量組37.6±0.38※※0.25±0.09 3.38±1.11 0.46±0.19 28.3±13.7低劑量組37.9±0.56※※0.27±0.06 4.06±0.74 0.34±0.09 64.8±46.4

3 討論

通過不同劑量的玫瑰花總多酚給藥方式，并且和空白組以及玫瑰花浸膏陽性對照組進行比較，研究分析了玫瑰花總多酚的各種藥效作用。自發活動是動物最基本的行為學表示，可用來測試動物的活動性及對新異環境的適應能力。本研究結果表明，玫瑰花總多酚低劑量給藥有降低小鼠自發活動的趨勢，說明玫瑰花總多酚具有鎮靜安神的藥效作用，對雄性小鼠作用顯著。中劑量給藥玫瑰花總多酚有延長凝血時間的趨勢，其中中、低劑量給藥對雌性小鼠影響明顯，說明玫瑰花總多酚能延長凝血時間有量效依賴性，可能存在抗血栓等藥效作用。

小鼠在密閉容器中受缺氧因素損害，主要反應在心和腦缺氧，屬非特異性缺氧。缺氧對機體是一種劣性刺激，影響機體的氧化供能并導致心腦等重要器官缺氧或損傷，引起氧供應能力不足而死亡。小鼠在缺氧環境中存活時間越長表示對缺氧的耐受力越強。本研究中各劑量給藥均能明顯延長小鼠耐缺氧存活時間，說明玫瑰花總多酚能顯著延長小鼠的常壓耐缺氧存活時間，對腦缺氧或心肌缺血具有改善作用，可能具有抗氧化、增強組織耐缺氧能力的藥效作用。小鼠扭體實驗是通過注入小鼠腹腔化學刺激性物質以刺激臟層和壁層腹膜，引起較大面積較長時間的炎性疼痛，致使小鼠出現扭體反應。玫瑰花總多酚各劑量組對0.6%醋酸所引發的小鼠扭體反應次數有明顯的抑制作用，說明玫瑰花總多酚存在鎮痛藥效。正常小鼠離體子宮在體外較恒定的條件下可維持一定時間的節律性收縮。玫瑰花總多酚可能具有激動大鼠離體子宮平滑肌自發活動的藥效作用。通過促進子宮肌肉收縮，既壓迫內膜螺旋動脈以止血，又可使壞死未脫落的內膜完全脫落并及時排出從而促進內膜修復，有可能治療功能性子宮出血，加之玫瑰花總多酚還有鎮痛抗炎的作用，玫瑰花總多酚可以顯著增加離體子宮平滑肌收縮頻率，增強張力，但對持續時間無明顯影響;其是通過細胞膜上H1受體、α受體以及L型Ca2+通道起作用，能被苯海拉明、酚妥拉明、異搏定所阻斷而吲哚美辛不能阻斷玫瑰花總多酚引起的激動作用，說明其不是通過刺激前列腺素合成酶的生成和釋放而對大鼠離體子宮平滑肌條起作用。

女性進入更年期，由于卵巢功能的衰退，引起下丘腦-垂體-卵巢內分泌軸平衡失調，生殖、內分泌系統性激素分泌紊亂，卵巢對促性腺激素的應激能力減弱，分泌的雌激素大幅度降低，反饋性的引起下丘腦、垂體分泌亢進，促性腺激素分泌過多，引起植物神經功能失調，進而出現潮熱、多汗、煩躁不安、失眠等以植物神經功能紊亂為主的癥候群，陰虛內熱型為一常見癥型。本研究結果表明玫瑰花總多酚可有限地改善陰虛模型大鼠體癥、降低陰道上皮細胞角質化程度，其對陰虛內熱癥大鼠紊亂的生殖、內分泌系統有正向調節作用，因此在婦科方面有潛在的應用價值。

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Prelim inary pharm acodynam ic research of rosa rugosa total polyphenol

Mahinur Bakri1，2，CHEN Jun3，XU Jianjun1，2，Hajiakber Aisa1，2
(1The Key Laboratory of Plant Resources and Chemistry of Arid Zone;2State Key Laboratory Basis of Xinjiang IndigenousMedicinal Plants Resource Utilizatio，Urumqi830011，China; 3University of Chinese Academy of Sciences，Beijing 100049，China)

Ob jective To study the pharmacological activities of rosa rugosa total polyphenol，a Xinjiang Uyghur folk medicine.Methods Animal experiment was adopted to study the analgesic effect of total polyphenols from rose on mice's spontaneous activity，coagulation time，anoxia and Auricle Microcirculation，induced by acetic acid writhing reaction，and the effects of rats in vitro uterus and yinxu deficiency in rats.Resu lts Rosa total polyphenol could inhibit spontaneous activities ofmice，prolong the blood coagulation time as well as the anti-hypoxia survival time，and expand the diameter ofmicro-artery/vein.In addition，they could significantly decrease the writhing times induced by acetic acid corresponding to analgesia activities.Rosa total polyphenol could also increase the contraction of isolated uterine smooth muscle strips and to some extent，it can improve the situation of rats of yinxu-deficiency.Conclusion Rosa rugosa total polyphenol has good medical and edible values.

rosa rugosa total polyphenol;coagulation;anti-hypoxia;auriclemicrocirculation;analgesia;uterus

R914

A

1009-5551(2015)06-0700-06

10.3969/j.issn.1009-5551.2015.06.010

2014-09-11］

(本文編輯施洋)

國家自然科學基金聯合基金(U1203203);中國科學院西部博士基金(XBBS201312)

馬依努爾·拜克力(1979-)，女(維吾爾族)，博士，助理研究員，研究方向:民族藥研究與開發。

阿吉艾克拜爾·艾薩，男(維吾爾族)，博士，博士生導師，研究方向:民族藥研究與開發，E-mail:haji@ms.xjb.ac.cn。