液相色譜法測定辣椒中克百威農藥殘留量的不確定度評定

魏維杰　王麗芳

摘要 [目的]了解測定蔬菜中氨基甲酸酯類農藥多殘留量不確定度的主要來源，通過一些方法對不確定度貢獻度大的進行改善修正，從而進一步提升檢測結果的可靠性。[方法]對辣椒中克百威農藥殘留的不確定度進行評定和分析，找出影響不確定度的因素，對各個不確定度分量進行評估并比較各分量對總不確定度的貢獻，從而給出測定結果的置信區間。[結果]分析得出影響結果的主要不確定度分量是色譜儀峰面積的測定和總重復性。[結論]在檢測過程中，需在檢測前做好儀器平衡和調試，確保儀器處于良好的工作狀態，并在重復檢測時盡可能排除其他干擾。

關鍵詞：液相色譜法；克百威；不確定度

中圖分類號：S481+.8 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）08-089-03

近年來，食品安全問題日益凸顯，蔬菜農藥殘留已經成為人們最關心話題之一，因此農藥殘留檢測數據的準確性至關重要。為了提供更公正、更準確的檢測數據，測量不確定度作為判定測量結果準確度的一個重要依據，是實驗室質量體系建立的重要部分，實驗室認證時也對其有明確要求，因此受到了各檢測實驗室的重視，各實驗室對其進行了廣泛的研究與討論[1-6]。克百威屬高毒殺蟲劑，被農業部禁止在蔬菜上使用，但偷用、濫用現象屢有發生，辣椒在南方需求量非常大，但病蟲害多，農藥檢出率較高，為此，筆者選擇對辣椒中克百威農藥殘留量進行了測量不確定度評定，旨在為農藥殘留檢測提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 樣品。鮮辣椒為市售。

1.1.2 試劑。乙腈，甲醇，二氯甲烷，氯化鈉，超純水（哇哈哈純凈水經純水器過濾所得）。

1.1.3 主要儀器。島津LC-20A液相色譜儀（氨基甲酸酯分析系統）；檢測器為熒光檢測器（λex 330 nm，λem 465 nm）；柱子為C8（4.0 mm×250.0 mm），5 μm。

1.2 分析條件 柱溫及衍生溫度：50 ℃；柱后衍生：0.05 mol/L氫氧化鈉溶液，流速0.3 ml/min；OPA試劑，流速0.3 ml/min；反應器溫度：100 ℃。保留時間定性，外標單標法峰面積定量。檢測時，室溫（25±3）℃。

1.3 方法 依據NY/T761-2008《蔬菜和水果中有機磷、有機氯、擬除蟲菊酯和氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定第3部分：蔬菜和水果中氨基甲酸酯類農藥多殘留的測定》改動的非標方法測定。

將鮮辣椒用打樣機打碎混勻，稱取10.00 g樣品放入50 ml離心管中，加入5.00 g氯化鈉，再加入25.00 ml乙腈，充分混勻，用低速離心機4 500 r/min離心4 min，使乙腈相和水相充分分層，室溫下靜置5 min。從離心管中吸取5.00 ml乙腈溶液，放入10 ml試管1中，將試管放在氮吹儀上氮吹，設置水浴溫度70 ℃，緩緩通入氮氣，將乙腈氮吹蒸發至近干，加入2.00 ml甲醇+二氯甲烷（1+99）溶解殘渣，待凈化。將氨基柱用4.0 ml甲醇+二氯甲烷（1+99）預洗條件化，當溶液液面到達柱吸附層表面時，立即加入上述待凈化溶液，用10 ml試管2收集洗脫液，用2 ml甲醇+二氯甲烷（1+99）洗試管1后過柱，并重復1次。將試管2置于氮吹儀上，水浴溫度50 ℃，氮吹蒸發至近干，用2.00 ml 10%甲醇溶解殘渣。樣品在混勻器上混勻后，經0.2 μm有機針式過濾器過濾，吸取10.0 μl凈化后的樣品溶液注入液相色譜儀中待分析。

1.4 計算公式

ω=C標×A樣×V1×V3×1 000/（A標×m×V2×R×1 000）

式中，ω——樣品中農藥的含量，mg/kg；

C標——標準溶液中克百威濃度，μg/ml；

A標——標準溶液中克百威峰面積，mV*s；

A樣——樣品中克百威峰面積，mV*s；

m——樣品的質量，g；

V1——提取溶液總體積，ml；

V2——提取溶液分取的體積，ml；

V3——樣品溶液定容體積，ml；

R——樣品加標回收率，%。

2 結果與分析

2.1 識別不確定度的來源 液相色譜法檢測辣椒中克百威的標準不確定度urel（ω）主要來源：① 檢測方法總重復性導致的相對不確定度urel（rep）；② 標準溶液濃度引入的標準不確定度urel（C標）；③ 樣品稱量引入的標準不確定度urel（m）；④ 樣品前處理溶液體積引入的標準不確定度urel（V）；⑤ 標準溶液峰面積測定引入的標準不確定度urel（A標）；⑥ 樣品峰面積測定引入的標準不確定度urel（A樣）；⑦ 樣品加標回收率引入的不確定度urel（R）。

從測定方法看，各影響參數相對獨立，合成標準不確定度可用相對標準不確定度合成：

2.2 量化不確定度分量

2.2.1 檢測方法總重復性導致的相對不確定度urel（rep）。

按照該方法對樣品加標中的克百威含量分別進行測定，檢測結果為

0.170、0.173、0.169、0.167、0.165、0.168、0.171、0.169、0.167和0.170 mg/kg。

=0.168 9（mg/kg） s（w）=0.002 283（mg/kg）

實際測量時，一般對樣品測定2次作為測量結果，則：

u（w）=s（）=s（w）2=0.001 614（mg/kg）

其相對標準不確定度為：

urel（rep）=u（w）=0.009 56（mg/kg）

2.2.2 克百威標準溶液引入的相對標準不確定度urel（C標）。

2.2.2.1 標準溶液純度引入的相對標準不確定度urel（C′標）。

克百威標準溶液母液由農業部環境保護科研監測所（天津）制備，濃度為100 μg/ml，1 ml/瓶，其定值擴展不確定度為±0.08 μg/ml，k=2。屬于B類評定，計算標準物質純度引入的相對標準不確定度：

u（C′標）=ak=0.04（μg/ml）

urel（C′標）=u（C′標）C=0.000 40

2.2.2.2 標準溶液稀釋配制過程中引入的相對標準不確定度評定。

將1 ml安瓿瓶中的克百威標準母液移至10 ml容量瓶（A級）中，用1 ml甲醇沖洗安瓿瓶移至容量瓶中，重復5次，然后用甲醇定容，配成10 μg/ml克百威標準儲備液。用移液槍吸取10 μg/ml克百威標準儲備液500 μl移至25 ml容量瓶（A級）中，用甲醇定容，配成0.2 μg/ml克百威標準工作液。

因克百威標準母液未能完全轉移至容量瓶中而產生的不確定度由于5次清洗已經可以忽略不計。

移液槍為Eppendorf（20～200 μl），根據檢定證書提供的信息其200 μl時的測量重復性為1.0%，按矩形分布處理（屬于B類評定）：

urel（DE1）=0.005 77

移液槍為Eppendorf（100～1 000 μl），根據檢定證書提供的信息其500 μl時的測量重復性為0.5%，按矩形分布處理（屬于B類評定）：

urel（DE2）=0.002 89

根據GB12806-1991《實驗室玻璃儀器單標線容量瓶》規定：單標線10 ml容量瓶的容量允許差為±0.02 ml。按三角分布處理（屬于B類評定）：

urel（DF1）=0.000 82

根據GB12806-1991《實驗室玻璃儀器單標線容量瓶》規定：單標線25 ml容量瓶的容量允許差為±0.03 ml。按三角分布處理（屬于B類評定）：

urel（DF2）=0.000 49

標準溶液稀釋過程引入的相對標準不確定度：

urel（D）=

u2rel（DE1）+u2rel（DE2）+u2rel（DF1）+u2rel（DF2）=0.006 52

2.2.2.3 克百威標準溶液引入的合成相對不確定度評定。

urel（C標）=u2（C′標）+u2rel（D）=0.006 53

2.2.3 樣品稱量引入的相對標準不確定度urel（m）評定。

樣品稱量所用天平最小分度值為0.01 g電子天平，準確稱量樣品10.00 g，由于天平精度不是很高，數顯非常穩定，故稱量重復性引入的不確定度忽略不計。該準確級的天平在（0～50 g）稱量范圍的最大允許誤差為±0.01 g，由稱量誤差導致的不確定度按矩形分布計算（B類評定）：

u2rel（m）=0.000 58

2.2.4 樣品前處理過程溶液體積引入的相對標準不確定度urel（V）評定。

2.2.4.1 提取溶液總體積引入的相對標準不確定度urel（V1）。

用A級25 ml單標線胖肚移液管移取25.00 ml（V1）乙腈，根據GB12808-1991《實驗室玻璃儀器單標線吸量管》規定：A級25 ml單標線胖肚移液管的容量允許差為±0.03 ml。按三角分布處理（屬于B類評定）：

3 討論

總重復性（rep）、標準液（C標）、樣品量（m）、前處理體積（V）、峰面積（A）、回收率（R） 6項參數的相對標準不確定度分量值分別為

0.009 56、0.006 53、0.000 58、0.006 08、0.012 44、0.006 91。

由各個相對標準不確定度分量值可知，影響結果的主要不確定度分量是色譜儀峰面積的測定；其次是總重復性、回收率、標準溶液濃度、前處理體積；樣品量可以忽略不計。因此，在標準進樣和樣品檢測過程中應嚴格按照儀器操作規程進行測定，在測定前做好儀器平衡和調試準備工作，盡量排除儀器的不確定因素，同時在樣品檢測過程中應嚴格控制樣品前處理的各個步驟，減少因定容、取液等引入的不確定度，從而減小測定結果的不確定度。

參考文獻

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