棘頰雀鯛的胚胎發育形態學研究

王珊珊　羅海忠　李偉業

摘要 [目的] 了解棘頰雀鯛的發育特點和生理生態條件。[方法] 在水溫（26±1）℃、鹽度（25±1）的實驗室條件下對棘頰雀鯛受精卵的發育過程進行研究。[結果] 棘頰雀鯛受精卵呈橢圓形，根據其胚胎發育過程的形態特征分為10個階段：卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原腸期、神經胚期、體節期、翻轉期、血管形成期、器官形成期、孵化期；受精卵長徑1.99 mm，發育過程中受精卵的顏色逐漸加深，孵化期以后顏色變淺至透明；在水溫26 ℃條件下受精卵歷時154 h孵出，初孵仔魚全長（3.6±0.1）mm。[結論] 該研究可為棘頰雀鯛人工育苗生產提供理論依據。

關鍵詞：棘頰雀鯛；胚胎發育；形態學特征

中圖分類號：S965.82 文獻標識碼 A 文章編號 0517-6611（2015）08-102-04

棘頰雀鯛（Premnas biaculeatus），隸屬鱸形目（Perciformes）、雀鯛科（Pomacentridae）、棘頰雀鯛屬（Premna），俗名透紅小丑，體長10～15 cm，全身紫褐色，與?？采?。此類魚身上有1條或2條白色條紋，好似京劇中的丑角，所以俗稱“小丑魚”，大多生活在印度洋和太平洋較溫暖的水域，因其美麗的外觀而被人們列為觀賞魚類。

目前已知小丑魚有28種，1種來自棘頰雀鯛屬（Premnas），其余來自雙鋸魚屬（Amphiprion），棘頰雀鯛為棘頰雀鯛屬中唯一的一個種[1]。目前，國內外學者主要對二線小丑[2]、紅小丑[3]、眼斑雙鋸魚[4]、克氏雙鋸魚[5-6]等的生理生態、人工繁育及卵徑與季節變化之間的關系、幼魚人工養殖中飼料投喂[7] 及規?；庇齕8]等進行研究。國內對棘頰雀鯛的研究報道并不多，鮑鷹等[1]研究光照、溫度和餌料等對棘頰雀鯛的人工繁育的影響，但關于棘頰雀鯛胚胎發育的形態學觀察迄今尚未見報道。筆者研究了棘頰雀鯛的胚胎發育過程，以期掌握其發育特點和生理生態條件，為棘頰雀鯛人工育苗生產提供理論依據。

1 材料與方法

1.1 親魚的飼養管理 試驗在舟山市水產研究所進行，試驗所用親魚從印尼引進并配對成功，親魚在循環水過濾系統魚缸中飼養，鹽度為20‰～25‰，每天換水20%，缸中放有瓦罐供親魚的受精卵附著，親魚養殖水溫為（26±1）℃，水溫通過循環系統中的加熱棒控制。每天光照14 h，黑暗10 h，每天8：00、10：00、14：00、16：00投喂鮮蟶肉糜4次。

1.2 胚胎發育觀察 親魚通常于上午9：00～11：00產卵，約 15～21 d產卵1次，親魚出現產卵行為時，進行不間斷觀察，待親魚產卵結束后立即將附有受精卵的瓦罐拿出放在另一個循環水系統中放入氣石，模擬親魚孵化環境，水質水溫條件與親魚孵化環境一致。產卵當天每0.5 h取樣1次，每次隨機取樣10粒，其發育期以超50%胚胎達到該發育時期的時間為準。囊胚期前每隔20 min取樣1次，囊胚期以后每2 h觀察1次，原腸期以后每隔5 h觀察1次。測量胚胎發育各階段的卵徑，記錄胚胎發育各階段的時間和主要特征。

2 結果與分析

棘頰雀鯛胚胎發育在水溫26 ℃，鹽度20‰條件下歷時154 h，初孵仔魚全長（3.66±0.11）mm。據其胚胎發育過程的形態特征可分為10個階段：卵裂前期、卵裂期、囊胚期、原腸期、神經胚期、體節期、翻轉期、血管形成期、器官形成期、孵化期（表1）。

2.1 卵裂前期 棘頰雀鯛受精卵呈橢圓形，受精卵內有1個大小油球不均勻分布。棘頰雀鯛受精卵呈橢圓形，屬于黏性卵，呈橙紅色，卵徑1.99 mm，卵膜有彈性，顯微鏡下可見受精卵動物極一端有纖維狀附著絲，附著在瓦罐上。卵內無數個油球，大小油球呈不規則分布，油球接近于植物極一端。受精1 h后胚盤形成于動物極，可見靠近動物極的細小油球向植物極移動，顯微鏡下可見胚盤如帽狀（圖1a）。

2.2 卵裂期 受精后2 h開始進入細胞分裂期，細胞分裂于動物極，胚盤頂部中央產生裂痕，裂痕逐漸加深成為一道裂溝，并能見到細胞分裂為二，此時為2細胞期（圖1b）。受精2 h后胚盤又一道裂溝出現，并與第一道裂溝垂直，胚盤被分成4份，形成4個大小相似的細胞，此時為4細胞期（圖1c）。2.5 h后胚盤處出現與第1次分裂溝平行的又一分裂溝，胚盤分裂成為8個細胞，此時進入8細胞期（圖1d）。3 h后進行第4次卵裂，分裂溝與第2次分裂溝平行形成，將胚盤分成16個細胞，為16細胞期，此時各細胞大小一致（圖1e）。進入32細胞期后各細胞隨著分裂的增多而逐漸變小并不規則排列，逐漸分辨不清細胞個數。達到64細胞期后細胞多至重疊，排列為2層。此時卵裂期結束，即將進入囊胚期（圖1f）。

2.3 囊胚期 受精卵受精4 h后，細胞分裂至無法計數呈帽狀堆積在胚盤上，逐漸與卵黃頂部形成腔，為囊胚腔。囊胚腔的高度約為卵黃的1/4，各細胞間隙還可分辨出。此時為囊胚早期（圖1g）。隨著細胞的繼續分裂，囊胚高度降低。囊胚腔逐漸向卵黃部分降低，至囊胚腔內見無數小細胞的界限無法分清，當受精卵發育至5.5 h時囊胚腔向卵黃部分降低的囊胚開始下包（圖1h），囊胚期結束。

2.4 原腸期 受精后12 h胚盤部分逐漸向卵黃下部包裹，當下包至卵黃1/4位置時可見胚環，此時已達到原腸早期（圖1i）。此時胚層繼續下包并內卷，當下包達至卵徑的1/3時可見胚環，胚環的一側出現胚盾，顯微鏡下從側面觀看猶如膠囊般，油球數量也明顯減少（圖1j），胚體外觀由橙紅色變為橙黃色，為原腸中期。當胚層下包至3/5或3/4時，植物極卵黃被包圍，形成外胚膜，進入原腸晚期（圖1k）。

2.5 神經胚期 受精20 h后，胚層下包至卵黃4/5胚體背面神經板形成，可見一條脊索在中央緊貼在卵黃上（圖1l），胚盤逐漸下包收縮形成胚孔，隨后胚層繼續下包，當植物極大部分被包裹，僅末端一小部分露在外面，卵黃上部形成腦泡（圖1m），胚體頭部出現在動物極。當卵黃全部被包圍，胚孔閉合，胚體在卵黃上清晰可見，頭部出現雛形，，但未有體節出現（圖1n），此時受精卵外觀呈紅棕色。

2.6 體節期 受精后22 h，視泡出現，體節出現，體節最先出現在胚體中部（圖1o），隨后慢慢增多，同時也在漸漸清晰，觀測較為容易（圖1p），當體節達到25對時胚體外膜出現少量黑色素細胞，素點較小，因此受精卵外觀開始變成深紅棕色，同時卵黃開始變小，油球數量繼續變小。

2.7 翻轉期 受精后28 h胚體尾部清晰可見，胚體變長，有尾鰭形成，尾部漸漸離開卵黃，尾后端偶爾出現微弱肌肉收縮，胚體頭部開始由動物極向植物極翻轉趨勢，視杯形成，眼囊可見，眼珠形成但不透明。受精后42 h出現心跳，心跳頻率為80次/min，胚體頭部翻轉至卵黃1/3處（圖1q），黑色素增多、變大，此時受精卵外觀呈棕色，外觀上可見黑色素。受精后45 h，胚體頭部翻轉至卵黃3/5處，尾部與卵黃游離，游離部分達胚體的1/4，胚體在卵膜內不斷抽動，卵黃變小，卵黃油球數量繼續變少，剩下部分較大油球（圖1r）。受精后48 h胚體頭部轉向植物極，標志著翻轉期結束（圖1s）。

2.8 血管形成期 此時心跳達到150次/min左右，視泡變大，眼囊中出現黑色晶體，胚體黑色素明顯增多，受精卵外觀呈深棕色，此時在顯微鏡下可見到血液循環，卵黃外血管較粗，胚內血管較細。血液由心臟流出經腦部至尾基，再由尾基反流回胚體，由于胚體與卵黃連接，因此血液流經卵黃囊表面的血管，然后到卵黃囊表面半周，最后再流回心臟（圖1t）。

2.9 器官形成期 受精后72 h，眼鏡、肌節、耳石、腦泡和心臟等器官已見雛形，眼睛發亮，心跳加快，卵黃迅速變小，胚體在卵內扭動次數頻繁，黑色素細胞在逐漸消失（圖1u），因此受精卵外觀顏色逐漸變淺，由深棕色變為棕黃色，個別卵粒有破膜現象，破膜多半是通過尾部掙脫卵膜而出，破膜后12 h內死亡。通過對破膜卵粒的觀察所見胸鰭、臀鰭、尾鰭和背鰭都已發育完全。

2.10 孵化期 孵化前1 d，黑色素細胞已消失剩下很小的色素點，因此受精卵外觀由之前的棕黃色變為透明，發亮的眼睛在受精卵外觀可明顯看出，胚體在卵內占據大部分空間（圖1v），心跳達到180次/min。孵化一般在天黑后進行，胚胎分泌孵化酶將卵膜溶解，胚體破膜而出。仔魚全長3.60～3.80 mm，身體透明（圖1w～x）。

3 討論

3.1 受精卵的胚胎發育特征 棘頰雀鯛受精卵屬端黃卵盤狀分裂，同大多數真骨骨魚類類似[9]。受精卵屬黏性卵，較光滑呈橢圓形，具有油球，油球大小不一，不均勻分布在受精卵內，有附著絲，附著于產卵基上，其特征同慈鯛科盤麗[10]、七彩神仙魚[11]的受精卵比較相似。棘頰雀鯛受精卵徑1.99 mm，比棘鯛科黑棘鯛[9]（0.84～0.98 mm）和鯛科金頭鯛[12]（0.82～0.92 mm）卵徑長，比麗魚科的尼羅羅非魚[13]受精卵卵徑（2.06～2.40 mm）短，較慈鯛科盤麗[10]（1.02～1.14 mm）和七彩神仙魚[11]（1.51±0.3 mm）相似，導致棘頰雀鯛受精卵與慈鯛科魚類相似的原因有待研究。

3.2 受精卵的顏色變化 受精卵外觀顏色在體節期、器官形成期和孵化期的變化較為明顯，因為胚體在發育至體節期時胚體黑色素細胞不斷沉積[14]，導致受精卵外觀顏色加深，變為紅棕色。胚體在翻轉的同時眼的黑色素也在增多，因此受精卵在血管形成期胚體已完全翻轉至植物極，眼的黑色素已形成，此時受精卵外觀變至深棕色。當器官發育完全后，胚體中的黑色素逐漸消失，受精卵內卵黃在減小，此時其顏色又逐漸轉變成棕黃色。在孵化期，一方面卵黃大部分被吸收并急劇減小，受精卵內被膨大的胚體充盈，另一方面胚體眼部發育成熟，晶體出現，在此情況下受精卵的外觀呈透明色，見受精卵內部閃閃發亮時，既是孵化期的即將結束。通過對受精卵顏色變化的觀察可作為判斷為判斷孵化時間的標志，為此可為人工育苗生產中判斷胚胎發育的時期作為參照。

3.3 受精卵的胚胎發育時間 不同魚類受精卵的胚胎發育時間不同，棘頰雀鯛受精卵發育時間較大多數海水魚類長，如斑鱾[15]胚胎發育時長為28～29 h、雙棘黃姑魚[16]胚胎發育時長為19.2 h。該試驗在水溫（26±1）℃下在歷時154 h完成整個胚胎發育過程。其他雙鋸魚屬于小丑魚，?？p鋸魚[17]發育時間為151～152 h。紅小丑[3]發育時間為216～240 h。眼斑雙鋸魚[4]發育時間為180～200 h；二線小丑魚[2]胚胎發育時間為176 h。5種小丑魚中，棘頰雀鯛受精卵和發育時間與二線小丑魚相近。

該試驗過程中棘頰雀鯛受精卵在水溫（26±1）℃下歷時154 h完成整個胚胎發育過程，水溫25 ℃下胚胎發育歷時178 h，可見在一定溫度范圍內溫度越高，胚胎發育時間越短，這也驗證了大部分魚類胚胎發育時間大多與水溫有關[14]。

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