電針內關穴預處理對兔心肌缺血再灌注CK及心肌細胞活性的影響

王超,張佳麗,劉昭,劉密,嚴潔,常小榮,郭禮娜,艾坤(湖南中醫藥大學,長沙 410007)

電針內關穴預處理對兔心肌缺血再灌注CK及心肌細胞活性的影響

王超,張佳麗,劉昭,劉密,嚴潔,常小榮,郭禮娜,艾坤(湖南中醫藥大學,長沙 410007)

目的觀察電針內關穴預處理對心肌缺血再灌注損傷兔CK及心肌細胞活性的影響,為證實心包經穴位與心之間的相對特異性聯系提供實驗依據。方法將40只新西蘭大耳白兔隨機分為A組、B組、C組、D組和E組,每組8只。A組為假手術組;B組為缺血再灌注模型組,于左冠狀動脈前降支阻斷冠脈30 min,再灌注60 min;C組、D組和E組在造模前7 d,每日分別取內關、列缺及合谷給予電針刺激20 min。比較各組肌酸激酶(CK)及心肌formazan含量變化。結果B組、C組、D組和E組血清CK及心肌formazan含量與A組比較,差異均具有統計學意義(P＜0.01,P＜0.05)。C組、D組和E組血清CK含量與B組比較,差異均具有統計學意義(P＜0.01)。C組心肌formazan含量與B組比較,差異具有統計學意義(P＜0.05)。D組和E組血清CK 及心肌formazan含量與C組比較,差異均具有統計學意義(P＜0.01,P＜0.05)。結論電針內關穴能減輕心肌缺血再灌注對心肌細胞的損傷,從而對心臟產生保護作用。

針刺療法;電針;心肌再灌注損傷;肌酸激酶;心肌細胞活性;穴,內關;穴,列缺;穴,合谷;兔

缺血性心臟病是冠狀動脈血流減少而引起心肌缺血、缺氧,甚至壞死而導致心臟病,而改善心肌缺血的方法是恢復灌流,但近年來研究表明恢復灌流仍能造成心肌細胞進一步的損傷,即心肌缺血再灌注損傷,防治心肌缺血再灌注損傷已成為冠心病治療亟待解決的關鍵問題之一[1]。針灸作為一種安全而療效獨特的治療手段,正在被廣泛地應用于臨床。大量研究表明,針灸有利于改善心肌缺血再灌注損傷[2-3]。本實驗主要通過觀察電針預處理不同經穴對兔心肌缺血再灌注損傷血清CK和細胞活性物質的影響,來證實心包經穴位與心之間的相對特異性聯系,現報告如下。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組

清潔級新西蘭大耳白兔40只,雌雄各半,體重為1.5～2.5 kg,飼養溫度為20℃～25℃,月齡為3～4個月,由湖南中醫藥大學動物實驗中心提供。常規飼養7 d后,隨機分為A組、B組、C組、D組和E組,每組8只。

1.2 造模方法

參照萬麗麗等[4]方法,兔耳緣靜脈注射20%烏拉坦(4 mL/kg)作全身麻醉。頸部去毛,行氣管切開術,接動物人工呼吸機。沿胸骨正中線左側旁開1～2 cm處切開皮膚,暴露心臟,輕輕剪開心包膜,提起左心耳,在左冠狀動脈前降支上、中1/3交界處穿一根零號醫用縫合線,并置1根硅膠管結扎血管,立即監測心電圖,若結扎前心電圖異常,則退出實驗。缺血標志以左心室前壁發紺及心電圖ST段抬高為準則。關閉胸腔,缺血30 min后開胸,松開硅膠管,恢復左前降支灌流60 min。在造模過程中,結扎冠狀動脈失敗或未發生灌注或中途死亡則視為造模失敗,共有12只動物退出實驗。

1.3 實驗方法

1.3.1 A組

常規飼養7 d,開胸,左冠狀動脈前降支上、中1/3交界處穿線不結扎,90 min后摘取心臟。

1.3.2 B組

常規飼養7 d,開胸,左冠狀動脈前降支上、中1/3交界處穿線,阻斷冠脈30 min,再灌注60 min,摘取心臟。

1.3.3 C組

在造模前7 d進行電針治療,取雙側內關穴。穴位定位參照《實驗針灸學》[5]家兔常用針灸穴位圖譜,并結合解剖學進行穴位定位。內關定位為前壁下1/6折點處內側,橈、尺骨間隙中。采用0.25 mm×13 mm毫針直刺3 mm,行提插捻轉手法1 min后接蘇州醫療用品廠有限公司出品的SDZ-Ⅱ型電子治療儀,穴位處接負極,正極接兔尾部,采用疏密波,強度以雙上肢輕微顫動為度,留針20 min。電針治療7 d后,開胸,左冠狀動脈前降支上、中1/3交界處穿線,阻斷冠脈30 min,再灌注60 min,摘取心臟。

1.3.4 D組

取列缺穴,采用擬人比照法定位。其余操作方法同C組。

1.3.5 E組

取合谷穴,位于前肢第1、2掌骨之間,其余操作方法同C組。

1.4 檢測指標及方法

1.4.1 肌酸激酶(CK)含量檢測

各組在灌流60 min后均采用真空采血管取頸動脈6 mL,分別等量注入空試管及含10%EDTA-Na2和抑肽酶的試管中,離心分離血清和血漿,移液槍分別吸取上清0.5 mL至離心管內,-20℃冰箱凍存,用酶聯免疫法檢測血清CK含量。

1.4.2 心肌formazan含量檢測

將從灌流裝置上取下的心臟組織切成薄片(1～2 mm),在37℃水浴中用1.25 g/L的MTT孵育30 min。然后取出心肌片,吸干表面水分并稱其濕重,按40 mL/g標準加入二甲基亞砜后勻漿,勻漿液離心(1000×g,10 min),取上清液1 mL在490 nm處測量其吸光度。

1.5 統計學方法

采用SPSS16.0軟件進行處理,各監測指標統計數據以均數±標準差表示,多組間比較采用單因素方差分析,組間兩兩比較用LSD法。以P＜0.05表示差異具有統計學意義。

2 結果

2.1 各組血清CK含量比較

由表1可見,B組、C組、D組和E組血清CK含量與A組比較,差異均具有統計學意義(P＜0.01)。C組、D組和E組血清CK含量與B組比較,差異均具有統計學意義(P＜0.01)。D組和E組血清CK含量與C組比較,差異均具有統計學意義(P＜0.01)。

表1 各組血清CK含量比較 (±s,U/L)

表1 各組血清CK含量比較 (±s,U/L)

注:與A組比較1)P＜0.01;與B組比較2)P＜0.01;與C組比較3)P＜0.01

組別 n CK含量A組 8 259.20±8.61 B組 8 2454.10±17.201)C組 8 945.69±9.711)2)D組 8 1870.20±12.141)2)3)E組 8 1909.10±19.151)2)3)

2.2 各組心肌formazan含量比較

由表2可見,B組、C組、D組和E組心肌formazan含量與A組比較,差異均具有統計學意義(P＜0.05)。C組心肌formazan含量與B組比較,差異具有統計學意義(P＜0.05)。D組和E組心肌formazan含量與C組比較,差異均具有統計學意義(P＜0.05)。

表2 各組心肌formazan含量比較 (±s)

表2 各組心肌formazan含量比較 (±s)

注:與A組比較1)P＜0.05;與B組比較2)P＜0.05;與C組比較3)P＜0.05

組別 n 490 nm吸光度A組 8 1.20±0.03 B組 8 0.86±0.031)C組 8 1.13±0.021)2)D組 8 0.89±0.021)3)E組 8 0.88±0.031)3)

3 討論

肌酸激酶通常存在于動物心臟、肌肉等組織的大量細胞漿和線粒體中。在臨床上,當心肌梗死發作時,人血清中的肌酸激酶水平迅速提高,因此血清酶的升高可作為心肌受損的酶學標志物。實驗研究表明[6],電針內關穴能有效降低家兔急性心肌缺血模型心肌酶的作用,對再次發作的急性心肌缺血有良好的預防和保護作用。

針灸預處理對大鼠缺血再灌注心肌細胞具有保護作用,可通過刺激缺血再灌注大鼠產生更多抗凋亡物質而減少其細胞凋亡,從而有效防治缺血性心臟病的發生[7]。亦有實驗證明針刺心俞預處理對凋亡相關蛋白有調整作用,從而實現對心肌細胞的保護[8]。實驗研究表明,電針心包經的經穴對心動過緩大鼠的心率與心功能的調節作用優于胃經經穴,表明不同經脈的穴位對心臟功能的調節有相對特異性[9]。根據穴位相近原則,本實驗亦選取了列缺與合谷為對照。列缺為手太陰肺經絡穴,與內關同為八脈交會穴,通任脈。現代研究發現列缺在一定程度上能改善心肌缺血狀況。王欣等[10]實驗研究發現,電針肺經“太淵-列缺”經脈段可以顯著促進心力環面積的恢復及提高交感神經的興奮性,從而改善家兔的心功能,對抗急性心肌缺血狀態。合谷為手陽明大腸經原穴,有理氣活血通絡作用,吳松等[11]實驗研究表明電針合谷穴可以有效防治心肌肥厚,且優于內關、神門穴,這種保護作用可能與抑制TNF-α等炎癥細胞因子的表達有關。內關穴是手厥陰心包經絡穴、八脈交會穴之一。《靈樞?邪客》:“心者,五臟六腑之大主也,精神之所舍也,其臟堅固,邪弗能容也……故諸邪之在于心者,皆在于心之包絡。”當邪氣侵犯時,首先由心包代受,從而減輕心臟受到損害。實驗研究表明電針內關穴預處理可以減少心肌梗死范圍,降低心肌酶水平,減輕心肌細胞形態結構損傷[12]。同時針灸內關穴預處理可以抑制死亡受體通路Fas/FasL蛋白的表達,從而抑制缺血再灌注后細胞凋亡的發生,由此對心肌細胞發揮延遲相的保護作用[13]。

本實驗研究結果表明,與B組相比,C組能顯著降低血清CK含量,增加心肌細胞活性,而D組和E組對血清CK含量影響較小,對心肌細胞活性的影響則無統計學意義,表明電針內關預處理能有效改善心肌細胞受損狀態,激活心肌細胞活性,而對心臟產生一種保護作用;C組與D組和E組比較,血清CK含量明顯下降,而心肌細胞活性物質明顯升高,其結果表明,內關穴對心肌缺血再灌注損傷心肌保護作用明顯優于手太陰肺經絡穴列缺穴以及手陽明大腸經原穴合谷,驗證了心包經與心臟聯系的相對特異性。針灸預處理對心肌缺血再灌注損傷的保護機制仍需要進一步闡明。近來研究發現,線粒體通透性轉運孔的開放、細胞內鈣離子濃度增加、活性氧分子、過量的一氧化氮、內質網應激和非折疊蛋白反應等均可促進心肌細胞的自噬。因此,有必要在本研究基礎上進一步探討針灸預處理對MIRI過程中自噬的調控機制。

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Effect of Pretreatment with Electroacupuncture at Point Neiguan(PC6) on CK and Myocardial Cell Activity in Rabbit Myocardial Ischemia and Reperfusion

WANG Chao, ZHANG Jia-li, LIU Zhao, LIU Mi, YAN Jie, CHANG Xiao-rong, GUO Li-na, AI Kun. Hunan University of traditional Chinese medicine,Changsha 410007,China

ObjectiveTo investigate the effect of pretreatment with electroacupuncture at point Neiguan(PC6) on CK and myocardial cell activity in rabbit myocardial ischemia-reperfusion injury and provide an experimental basis for a relatively specific relationship between pericardium meridian points and the heart.MethodsForty New Zealand big ear rabbits were randomly allocated to groups A, B, C, D and E, eight rabbits each. Group A was a sham operation group. Group B was an ischemia-reperfusion model group, in which the left anterior descending coronary artery was occlude for 30 min and reperfused for 60 min. In groups C, D and E, points Neiguan(PC6), Lieque(LU7) and Hegu(LI4) were separately given electroacupuncture stimulation, 20 min every day, at seven days before model making. Creatine kinase (CK) and myocardial formazan contents were compared between the groups.ResultsThere were statistically significant differences in serum CK and myocardial formazan contents between group B, C, D or E and group A (P＜0.01, P＜0.05). There was a statistically significant differences in serum CK content between group C, D or E and group B (P＜0.01). There was a statistically significant differences in myocardial formazan content between groups C and B (P＜0.05). There were statistically significant differences in serum CK and myocardial formazan contents between group D or E and group C (P＜0.01, P＜0.05). Conclusion Electroacupuncture at point Neiguan(PC6) can reduce myocardial ischemia-reperfusion induced injury to myocardial cells to produce a protective effect on the heart.

Acupuncture therapy; Electroacupuncture; Myocardial reperfusion injury; Creatine kinase; Myocardial cell activity; Point, Neiguan(PC6); Point, Lieque(LU7); Point, Hegu(LI4); Rabbit

R2-03

A

10.13460/j.issn.1005-0957.2015.01.0067

2014-09-23

1005-0957(2015)01-0067-03

國家自然科學基金項目(81072868,81102661);湖南省科技廳課題(2013sk3086)

王超(1974 - ),女,副教授,碩士生導師,E-mail:592436380@ qq.com

嚴潔(1941 - ),女,教授,博士生導師,E-mail:yj5381159 @126.com