住院患者分離的紋帶棒狀桿菌耐藥性及同源性研究

鄧洪均(重慶市渝北區中醫院檢驗科 401147)

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·論 著·

住院患者分離的紋帶棒狀桿菌耐藥性及同源性研究

鄧洪均(重慶市渝北區中醫院檢驗科 401147)

目的 分析研究住院患者分離的紋帶棒狀桿菌耐藥性及同源性。方法 選取于2013年10月至2014年4月在該院住院患者58例，對患者不同部位分離的紋帶棒狀桿菌58株，采用肉湯微量稀釋法對患者進行體外藥敏試驗，對紋帶棒狀桿菌陽性患者的周邊環境采用鹽水棉拭子法進行采樣，對分離的紋帶棒狀桿菌進行體外藥敏試驗；對58株紋帶棒狀桿菌采用脈沖場凝膠電泳法(PFGE)進行分子分型。結果 紋帶棒狀桿菌聚集分布于2013年12月至2014年3月。藥敏試驗結果顯示，四環素、紅霉素、克林霉素、環丙沙星和青霉素這5種抗菌藥物的最小抑菌濃度(MIC)≥64 μg/mL；萬古霉素、利福平和慶大霉素的MIC均為0.5 μg/mL；只有1株分離的紋帶棒狀桿菌對除克林霉素之外的所用抗菌藥物全部敏感。PFGE分型結果顯示，50株紋帶棒狀桿菌共分為7個不同基因型，其中0002型和0006型這兩種基因型為優勢型。從同期住院的同一病房患者身上分離出的紋帶棒狀桿菌同源性高。環境采樣結果顯示，紋帶棒狀桿菌分離陽性率達43.48%(10/23)。結論 住院患者分離紋帶棒狀桿菌呈多重耐藥性，且從不同患者身上分離出的菌株同源性極高。

棒狀桿菌屬； 耐藥性； 同源性； 分子分型

棒狀桿菌屬是因為其菌體一端或者兩端膨大，類似棒狀而得名，它屬于無芽孢的革蘭陽性桿菌[1]。棒狀桿菌大多數是致病菌，容易在機體抵抗力低下時引發機體感染。近年來，抗菌藥物大量運用于臨床，甚至出現濫用抗菌類藥物狀況，導致細菌出現耐藥性或多重耐藥性，大大增加了臨床治療的困難度[2]。據相關研究報道，紋帶棒狀桿菌能夠在醫院傳播，尤其對于長期住院患者，該病菌滋生速度極快。本文旨在研究住院患者分離的紋帶棒狀桿菌耐藥性及同源性，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取于2013年10月至2014年4月在本院住院的患者58例，其中男30例，女28例，年齡18～85歲、平均年齡(54.3±2.5)歲，住院5～35 d、平均住院(9.1±2.1)d。

1.2 儀器與試劑 采用VITEK2全自動微生物鑒定系統進行細菌鑒定，鑒定卡選用厭氧菌-棒狀桿菌鑒定卡；采用天津金章有限公司的氧化發酵管進行氧化發酵試驗；選用ATCC經黃色葡萄球菌進行協同溶血試驗；血瓊脂平板以及藥敏試驗板均選自天津金章有限公司；選用美國bio-rad公司的脈沖場凝膠電泳(PFGE)系統；添加2.5%～5.0%溶解的馬血進肉湯，根據Plassmeier等[3]研究選擇如下8種抗菌藥物：四環素、紅霉素、克林霉素、環丙沙星、青霉素、萬古霉素、利福平和慶大霉素，對紋帶棒狀桿菌陽性患者的周邊環境采用鹽水棉拭子法進行采樣。

1.3 體外藥敏試驗 在血瓊脂平板上對分離出來的紋帶棒狀桿菌進行傳代培養。采用肉湯微量稀釋法對所有菌株的最小抑菌濃度(MIC)值進行測定。按梯度將8種抗菌藥物分布于96孔板中[4]，對四環素、紅霉素、環丙沙星、青霉素、萬古霉素、利福平和慶大霉素設置8個梯度濃度；對克林霉素設置7個梯度濃度。最高濃度均為64 μg/mL，最低濃度為0.5 μg/mL。另外設置一個不含任何抗菌藥物的空白生長孔。以肺炎鏈球菌ATCC49619為質控菌株。藥敏平板溫度控制在35 ℃，培養24～48 h。觀察試驗結果。

1.4 分子分型 制備好菌懸液和膠塊，進行細胞裂解，做好膠塊內DNA的酶切，再進行電泳，電泳時長為19 h，完畢后，用0.1 μg/mL EB液染色30 min，純水脫色20 min。用凝膠成像儀成像，每塊膠塊上的DNA均用ATCC33591菌株以及相對分子質量標準進行標準化，方便對比。

1.5 聚類分析 采用第5版BioNumerics軟件處理膠塊間圖像的對比。采用1.5%的條帶差異容許度。菌株間相似性系數大于90%則歸為一類。

1.6 統計學處理 本次研究采用SPSS17.0統計學軟件處理，以P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 菌株分布情況 對患者不同部位分離的紋帶棒狀桿菌58株，其中12株從重癥病房患者身上分離，15株從精神外科患者身上分離，5株從精神內科患者身上分離，14株從呼吸內科患者身上分離，7株從普通外科病房患者身上分離，3株從泌尿內科患者身上分離，2株從口腔科患者身上分離。58株分離的紋帶棒狀桿菌標本中有41株下呼吸道標本，5株膿液標本，7株尿液標本和5株腦脊液標本。58例患者在分離紋帶棒狀桿菌前正在使用不少于1種抗菌藥物，使用頻率最高的是β-內酰胺類抗菌藥物，其次是喹諾酮類抗菌藥物。2013年10月紋帶棒狀桿菌有2株，2013年11月有3株，2013年12月有15株，2014年1月有12株，2014年2月有11株，2014年3月有13株，2014年4月有2株。紋帶棒狀桿菌主要集中分布于2013年12月至2014年3月。

2.2 細菌鑒定結果 氧發酵試驗檢驗紋帶棒狀桿菌的氧化型為100%。本組58株菌中有57株CAMP為陽性，占98.27%。VITEK-2鑒定率達到94%，Bionumber為7323120600001，與其他棒狀桿菌無重碼。

2.3 體外藥敏試驗結果 四環素、紅霉素、克林霉素、環丙沙星和青霉素這5種抗菌藥物的MIC≥64 μg/mL；萬古霉素、利福平和慶大霉素的MIC均為0.5 μg/mL；只有1株分離的紋帶棒狀桿菌對除克林霉素之外的所用抗菌藥物全部敏感。詳見表1。

2.4 耐藥性分析 根據脈沖場凝膠電泳分型結果，按90%相似度進行劃分，58株菌共有7個不同基因型，每種不同的基因型菌株都具有一定的耐藥性。其中0002型(除C13和C14之外)為優勢耐藥型，耐藥型與0001型、0003型和0004型以及除C9和C8之外的0006型、0007型耐藥型相同。在0002型中，優勢耐藥型C4和C13、C14的主要區別為青霉素敏感以及慶大霉素敏感。在0006型中，C9 和C1菌株的差異為紅霉素、青霉素、環丙沙星以及四環素敏感。C18和C1菌株的差異在于慶大霉素耐藥。詳見表2。

2.5 環境采樣結果 菌株集中出現在呼吸內科病房、神經外科病房以及重癥監護病房。根據23份有效環境標本檢測結果，紋帶棒狀桿菌分離率達43.48%(10/23)。對2個疑似紋帶棒狀桿菌菌落進行進一步鑒定，并進行體外藥敏試驗，發現20株環境標本分離出的紋帶棒狀桿菌中有17株(85%)和從相應的患者身上分離出的菌株耐藥型相同。

表1 58株紋帶棒狀桿菌藥敏試驗結果(μg/mL)

表2 不同PFGE型紋帶棒狀桿菌MIC值分析(ng/mL)

3 討 論

紋帶棒狀桿菌能夠在醫院內通過異體傳播，引發患者傷口、呼吸道等部位感染。但由于棒狀桿菌生長較緩慢，臨床中往往忽視其危害性。然而不斷有研究表明紋帶棒狀桿菌在醫院傳播能力強，而且具有多重耐藥性[5]。臨床上正確對待并重視紋帶棒狀桿菌的特征，有利于更好地防止其滋生，降低其耐藥性[6]。

本組研究中，紋帶棒狀桿菌在一定的時間段集中分布，且分布地點也較集中。根據PFGE分型顯示，同期住院的同一病房患者身上分離出的紋帶棒狀桿菌同源性高，存在交叉感染的可能。而且，根據環境采樣結果顯示，環境標本中紋帶棒狀桿菌陽性率為43.48%，其耐藥型和從相應的患者身上分離出的菌株耐藥型相同。這表明紋帶棒狀桿菌在醫院的傳播能力較強，然而，臨床上對其傳播機制尚不清楚[7]。

這需要臨床上對其進行進一步研究。

綜上所述，住院患者分離紋帶棒狀桿菌呈多重耐藥性，且從不同患者身上分離出的菌株同源性極高，臨床上應對紋帶棒狀桿菌高度重視，分析其對臨床用藥的影響。

[1]王俊瑞,杜小莉,崔晶花，等.住院患者分離紋帶棒狀桿菌耐藥性及同源性分析[J].中華醫學雜志,2014,100(32):2501-2505.

[2]李瑋,張正.66株棒狀桿菌臨床分離株的鑒定及其藥物敏感性分析[J].中國實驗診斷學,2007,11(7):932-936.

[3]Plassmeier JK,Busche T,Molck S，et al.A propionate-inducible expression system based on the Corynebacterium glutamicum prpD2 promoter and PrpR activator and its application for the redirection of amino acid biosynthesis pathways[J].J Biol,2013,163(2):225-232.

[4]陳東科,許宏濤,胡付品，等.紋帶棒桿菌醫院內感染狀況分析[J].中華流行病學雜志,2013,34(9):947-948.

[5]蘇瑞蕊.棒狀桿菌細胞壁中的主要成分的合成過程[J].國際檢驗醫學雜志,2013,34(7):853-855.

[6]Brune I,Goetker S,Schneider J，et al.Negative transcriptional control of biotin metabolism genes by the TetR-type regulator BioQ in biotin-auxotrophic Corynebacterium glutamicum ATCC 13032[J].J Biol,2012,159(3):225-234.

[7]謝愛香.棒狀桿菌臨床分離株藥物敏感性及同源性分析[J].國際檢驗醫學雜志,2012,33(7):782-783.

Study on drug resistance and homology of Corynebacterium striatum isolated from inpatients

DENGHong-jun

(DepartmentofClinicalLaboratory,YubeiDistrictHospitalofTraditionalChineseMedicine,Chongqing401147,China)

Objective To analyze the drug resistance and homology of Corynebacterium striatum isolated from inpatients.Methods 58 inpatients in our hospital from 2013 October to 2014 April were selected.58 strains Corynebacterium striatum were isolated from different parts.The in vitro drug susceptibility test was performed by using the broth microdilution method.The surround environment in the patients with Corynebacterium striatum positive were sampled by saline cotton swab.The isolated Corynebacterium striatum was performed the in vitro drug susceptibility test;58 strains of Corynebacterium striatum were performed the molecular typing by using the pulsed field gel electrophoresis (PFGE).Results Corynebacterium striatum aggregation was distributed in December 2013,January,February and March 2014.The results of drug susceptibility test showed that the minimal inhibitory concentrations(MIC) of the 5 kinds of antibacterial drugs,tetracycline,erythromycin,clindamycin,ciprofloxacin and penicillin,were more than or equal to 64 μg/mL;MIC of vancomycin,rifampicin and gentamicin all were 0.5 μg/mL;only 1 isolated strain of Corynebacterium striatum was sensitive to all antibacterial drugs except for clindamycin.The pulsed field gel electrophoresis typing results showed that 50 strains of Corynebacterium striatum were divided into 7 different genotypes,in which 0002 genotype and 0006 genotype were predominant type.Corynebacterium striatum isolated from the patients in the same ward during the corresponding period had high homology.The environmental sampling results showed that the isolation positive rate of Corynebacterium striatum reached 43.48%(10/23).Conclusion Corynebacterium striatum isolated from inpatients presents multi-drug resistance,and which isolated from different in patients has extremely high homology.

Corynebacterium; drug resistance; homology; molecular typing

鄧洪均，女，專科，主管檢驗師，主要從事臨床微生物研究。

10.3969/j.issn.1672-9455.2015.18.037

A

1672-9455(2015)18-2741-02

2015-03-17

2015-04-19)