白細胞相關指標在白血病篩查和鑒別中的應用評價

許青，祝洪濤，徐衛益

(1、浙江大學醫學院附屬第一醫院檢驗科 浙江 杭州310003;2、溫州醫學院 浙江 溫州325000)

外周血細胞形態學觀察一直被認為是細胞形態學檢驗的金標準[1]，但其對操作者細胞形態學觀察水平有較高的要求，當血片中觀察到一定比例的異常細胞時，有時較難區分是髓系還是淋系。血細胞形態學與血細胞分析儀已聯合應用于白血病檢驗[2,3]，隨著血液分析儀分析技術的不斷提高，一些新的參數不斷應用于臨床[4]。Sysmex XE-2100血細胞分析儀利用流式細胞和核酸熒光染色技術進行白細胞分類，利用IMI通道中特殊溶血劑溶解成熟和幼稚淋巴細胞，通過射頻和直流電計數IG和髓系幼稚細胞。已經有IG應用于炎癥觀察的相關報道[5,6]，但通過結合IG、幼稚細胞計數、白細胞分類散點圖來進行白血病篩查和初步分類還未見詳細報道。

1 材料與方法

1.1一般資料 選取2014年1月至4月來院就診的門診及住院白血病初發患者55例，其中AML 30例，其中男性21例，女性9例，平均年齡 39.0歲；CML 10例，其中男性7例，女性3例，平均年齡40.3歲；ALL 15例，男性8例，女性7例，平均年齡38.0歲。所有患者均最終經骨髓細胞形態學和免疫組化分析確診。

1.2 儀器與試劑 日本Sysmex XE-2100全自動血液分析儀，原裝配套系列試劑；Sysmex SP-1000i全自動推片機，原裝配套系列試劑。

1.3 實驗方法 2mlEDTA-K2抗凝血標本，用Sysmex XE-2100血細胞分析儀進行細胞計數，記錄WBC、IG#、IG%、幼稚細胞數并觀察白細胞分類散點圖；制備血涂片(BASO染液)干燥后用油鏡觀察血片，進行細胞分類計數。抽取患者骨髓進行細胞形態學觀察和免疫組化分析。

1.4 統計學方法 用SPSS16.0軟件處理測試數據。經卡方檢驗，數據呈非正態分布，因此，結果用百分位數表示，作箱圖進行組間比較。

2 結果

2.1 AML、CML和ALL患者外周血白細胞各指標測試結果 AML患者幼稚細胞百分比、IG%明顯增高，WBC正常或中度升高；CML患者WBC、IG%、IG#明顯增高，但幼稚細胞增高不明顯；ALL患者WBC明顯增高、幼稚細胞百分比輕度增高、IG%、IG#一般不增高，結果見表1、圖1。

表1 AML、CML和ALL患者外周血白細胞各指標測試結果

圖1 AML、CML和ALL患者外周血白細胞WBC、IG%、幼稚細胞%三項指標測試結果

2.2 白細胞分類散點圖 各組均有特征性改變，表現為細胞相應區域散點分布異常，AML患者白細胞異常散點區域比ALL組大且往右，CML組具有特征性的散點圖，主要為細胞數量增多，粒系幼稚以下細胞各階段細胞均有出現，且以成熟粒細胞為主，嗜酸細胞散點明顯增多，在BASO通道表現為嗜堿性粒細胞散點增多。在IMI通道AML和CML檢測到較多的未成熟粒細胞和原始細胞，ALL僅檢測到很少的未成熟粒細胞和/或原始細胞，見圖2。

圖2 白細胞分類散點圖

2.3 外周血涂片鏡檢觀察 在AML組和ALL組均見到較高比例的幼稚細胞，CML組見到一定比例的幼稚細胞，IG明顯增高，嗜酸性粒細胞、嗜堿性粒細胞明顯增多，與散點圖相對應，見圖3。

圖3 各組患者外周血涂片細胞形態觀察(瑞姬染色，×1000)

3 討論

Sysmex XE-2100血細胞分析儀IMI檢測通道利用射頻、電阻抗和細胞化學染色法原理，計數經溶血劑處理(幼稚細胞與硫化氨基酸結合量多于較成熟細胞，并且對溶血劑有抵抗作用)的細胞懸液中的幼稚細胞，可定量分析不同類型的幼稚細胞，包括造血祖細胞(HPC)、原始細胞、異型/異常淋巴細胞、未成熟粒細胞[7]。Fernandes B等利用顯微鏡鏡檢、流式細胞計數與XE-2100血細胞分析儀檢測203例不同疾病(急慢性炎癥、惡性腫瘤、敗血癥等)的IG細胞數，認為血細胞分析儀IG計數可替代手工顯微鏡鏡檢計數，且有很好的準確性和重復性[8]。

AML患者外周血血細胞可出現數量不等的原始細胞和未成熟粒細胞，表現為IG計數絕對和/或相對增高，由于細胞總數增高不明顯，因此，相對值更有意義，散點圖顯示粒細胞區域范圍變大，白細胞無法正常分類計數。CML患者由于外周血細胞各階段粒細胞明顯增多，IG計數絕對和相對增高，散點圖出現粒細胞區域散點變多變密，且散點向右上方延伸，表示未成熟、幼稚粒細胞明顯增多，嗜酸、嗜堿性粒細胞散點增多，與王霄霞等報道的血細胞分析儀CML特征性散點圖描述相符[9]。ALL患者外周血細胞主要以原始或幼稚淋巴細胞為主，因此，IG計數絕對和/或相對僅輕度增高或正常，散點圖出現淋巴細胞區域散點往右上方延伸，表示未成熟淋巴細胞增多，但其中有6例患者幼稚細胞計數僅輕度增高，與血片鏡檢結果不成比例，分析原因可能為IMI通道溶血劑對原始、幼稚淋巴細胞有一定的破壞作用，需在今后的實驗中繼續觀察。

因此，初診患者外周血細胞分析儀出現異常分類散點圖時，對血液病往往有篩查或輔助診斷價值[10,11]，應分析白細胞數是否明顯增高，有無特征性散點圖，其次，分析IG%和幼稚細胞百分比。有白細胞數明顯增高，CML特征性散點圖，應當考慮是CML；有白細胞數輕度增高，IG%增高，散點圖粒細胞區域范圍變大，無法分類，應當考慮AML；有白細胞數中度增高，IG%正常或輕度增高，散點圖出現淋巴細胞區域散點往右上方延伸，應考慮ALL。研究發現，白細胞相關指標的綜合分析對白血病篩查和鑒別有重要的應用價值。

但有時一些特殊病例可能沒有明顯的規律，亦存在血細胞分析儀對外周血幼稚細胞漏檢的情況[12]，還需結合血片鏡檢一起考慮。血涂片檢查在白血病診斷中有重要意義，較多血液病的細胞形態學改變，血涂片優于骨髓片[13,14]，一些血液病的定義和診斷也是以外周血細胞異常為主要依據的[15]。另外，本次研究只是在利用血液分析儀已有的一些定量參數客觀分析，對血液病進行篩查，給血片鏡檢細胞分類某些方向性指導，明確診斷還需進一步檢查。

[1]王建中.外周血細胞形態學檢驗診斷的發展趨勢[J].中華檢驗醫學雜志,2013,36(5):389-392.

[2]王建中.全自動血細胞分析儀與血涂片細胞形態學在血常規檢驗中的聯合應用效果[J].江西醫藥,2014,49(11):1329-1331.

[3]桑奕雯.外周血細胞計數與形態學檢查對常見白血病診斷的重要性[J].國際檢驗醫學雜志,2014,35(21):2934-2938.

[4]謝志雄,張陽根,朱小東.急性白血病初診患者血細胞參數分析[J].檢驗醫學與臨床,2010,7(1):15-18.

[5]Nigro KG,O’Riordan M,Molloy EJ,et al.Performance of an Automated Immature Granulocyte Count as a Predictor of Neonatal Sepsis[J].Am J Clin Pathol,2005,123(4):618-624.

[6]Ansari-Lari MA,Kickler TS,Borowitz MJ.Immature Granulocyte Measurement Using the Sysmex XE-2100:Relationship to Infection and Sepsis[J].Am J Clin Pathol,2003,120(5):795-799.

[7]Shibata H,Yamane T,Yamamura R,et al.Automatic Analysis of Normal Bone Marrow Blood Cells Using the XE-2100 Automated Hematology Analyzer[J].J Clin Lab Anal,2003,17(1):12-17.

[8]Fernandes B,Hamaguchi Y.Automated Enumeration of Immature Granulocytes[J].Am J Clin Pathol,2007,128(3):454-463.

[9]王霄霞,李少禧,楊蓉蓉,等.白血病初診患者血細胞分析儀的白細胞散點圖及警示信息評價[J].溫州醫學院學報,2007,37(5):488-490.

[10]歐歌,張偉,陳水平,等.血細胞分析儀異常散點圖對血液病的輔助診斷價值[J].標記免疫分析與臨床,2014,21(4):442-444.

[11]王霄霞,夏雯麗,楊蓉蓉,等.白血病初診患者血常規綜合指標的分析[J].臨床檢驗雜志,2007,25(5):397-398.

[12]王梅華,莊和,歐海云,等.血細胞分析儀對外周血幼稚細胞漏檢的臨床分析[J].現代檢驗醫學雜志,2013,28(3):87-89.

[13]Swerdlow SH,Campo E,Harris NL,et al.World Health Organization classification of tumors pathology and genetics of tumors of haematopoietic and lymphoid tissues[M].4th ed.Lyon:IARC Press,2008.

[14]Gong X,Lu X,Wu X,et al.Role of bone marrow imprints in haematological diagnosis:a detailed study of 3 781 cases[J].Cytopathology,2012,23(2):86-95.

[15]Fend F,Kremer M.Diagnosis and classification of malignant lymphoma and related entities in the bone marrow trephine biopsy[J].Pathobiology,2007,74(2):133-143.