磷酸化表皮生長因子受體與鼻咽癌患者預后關系的研究*

吳偉

鼻咽癌是我國南方常見的惡性腫瘤，放化療是其最主要治療方法，近年來，隨著腫瘤基礎研究的不斷深入，分子靶向治療越來越廣泛地應用于鼻咽癌的個體化治療體系當中。頭頸部惡性腫瘤存在表皮生長因子 受 體（epidermal growth factor receptor，EGFR）超表達現象，鼻咽癌也不例外，很多研究表明，表皮生長因子高表達與鼻咽癌預后有關，磷酸化EGFR（phosphorylated EGFR，pEGFR）是EGFR的活性形式，有學者認為，EGFR在鼻咽癌的發生發展中的作用并非受體高表達，而活性受體才是癌細胞增殖的關鍵因素。本研究對2012年1月-2013年6月在本院治療的107例鼻咽癌患者的病理標本行pEGFR檢測，觀察pEGFR不同表達患者的生存情況是否有差異，現具體報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選擇2012年1月-2013年6月在本院經病理和影像學資料證實為鼻咽癌，病理類型為鼻咽未分化型非角性癌患者107例作為研究對象，其中男77例，女30例，年齡18~77歲，中位年齡50歲。根據pEGFR檢測結果分為兩組，陰性組47例，陽性組60例。兩組一般資料比較差異無統計學意義（P>0.05），具有可比性，見表1。

表1 兩組患者臨床特征比較

1.2. 方法

1.2.1 放化療 陰性組有41例患者行誘導化療，陽性組有50例患者行誘導化療，誘導化療采用“順鉑+5-氟尿嘧啶”或“多西他賽+順鉑+5-氟尿嘧啶”方案，其中多西他賽60 mg/m2d1；順鉑30 mg/m2d1~5；5-氟尿嘧啶500 mg/m2d1~5。所有患者均接受根治性三維適形放射治療，采用直線加速器面頸聯合野照射，50 GY以后采用面頸分野放射，放療總劑量：鼻咽68~74 GY/34~37次，頸部（N1~3）66~70 GY/33~35次，頸部（N0）50~54 GY/25~27次，放療期間均配合化療藥物增敏，化療藥物采用單藥“DDP”方案，1次/周，30 mg/（m2·次）。

1.2.2 pEGFR檢測

1.2.2.1 試劑 鼠抗人pEGFR單克隆抗體購買自美國Abcam公司，二抗及DAB顯色液來自購買自福州邁新公司的Elivision Super DAB檢測試劑盒。

1.2.2.2 免疫組化檢測方法 免疫組織化學染色采用SP二步法。所有標本組織均采用4%中性甲醛液固定，常規包埋、4 μm切片、脫蠟水化，進行高溫高壓抗原修復，加3%過氧化氫阻斷內源性過氧化物酶，依次滴加一抗、二抗，DAB顯色、蘇木素復染。操作步驟嚴格按照說明書進行，用乳腺癌標本作為陽性對照，用PBS代替一抗作為陰性對照。

1.2.2.3 結果判斷 由兩位高年資病理醫生獨立閱片。pEGFR染色主要定位于細胞漿，染色強度計分：0分（無染色）、1分（淡黃色），2分（棕黃色）、3分（棕褐色）；染色范圍計分：0分（無陽性細胞）、1分（陽性細胞1%~25%），2分（陽性細胞26%~50%）、3分（陽性細胞51%~75%）、4分（陽性細胞76%~100%）。兩者相加得分0~7分，以大于等于3分為陽性，3分以下為陰性。

1.3 觀察指標 所有患者均進行隨訪，觀察兩組患者的總生存率、無進展生存率和無局部區域復發生存率。

1.4 統計學處理 應用SPSS 18.0軟件包對所得數據進行統計學處理，計數資料比較采用 字2檢驗，用Kaplan-Meier法計算生存率及比較生存情況，進行Log-rank檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組總生存率比較 隨訪截止時間2015年5月，隨訪率96.3%，中位隨訪時間31個月（23~40個月）。陰性組3年總生存率為77.6%，陽性組3年總生存率為69.4%，兩組3年總生存率比較，差異無統計學意義（ 字2=2.431，P=0.119），見圖 1。

2.2 兩組無進展生存率比較 陰性組3年無進展生存率為70.5%，陽性組3年無進展生存率為62.9%，兩組3年無進展生存率比較，差異無統計學意義（ 字2=2.065，P=0.151），見圖 2。

2.3 兩組無局部區域復發生存率比較 陰性組3年無局部區域復發生存率為86.0%，陽性組3年無局部區域復發生存率為65.7%，陰性組3年無局部區域復發生存率高于陽性組，比較差異有統計學意義（ 字2=4.303，P=0.038），見圖 3。

圖1 兩組總生存率比較

圖2 兩組無進展生存率比較

圖3 兩組無局部區域復發生存率比較

3 討論

鼻咽癌（nasopharyngeal carcinoma，NPC）是發生在鼻咽部的一種惡性腫瘤，是我國最常見的惡性腫瘤之一，惡性程度較高，其發病機制尚未完全明確[1-2]。近年來對于影響研究鼻咽癌的預后因素的研究越來越多。其中，pEGFR的研究更為研究者所關注。

EGFR為酪氨酸激酶受體，屬于Ⅰ型受體酪氨酸激酶超家族，在體內通過多種信號途徑在腫瘤的發生發展中發揮重要作用[3]。EGFR在哺乳動物組織中，尤其是在其上皮、間質、神經源性器官中廣泛表達，在頭頸腫瘤中表達較為常見，87.5%（35/40）的口腔鱗癌，89%（48/54）的鼻咽癌，93.3%（42/45）的喉癌組織均有EGFR 的過表達[4-6]。EGFR是涉及細胞增殖和腫瘤發生、發展中的極為重要的受體信號系統，和腫瘤的侵襲、轉移、惡性程度及預后密切相關。有成熟的研究也顯示了EGFR控制了癌癥的表型，有促進腫瘤細胞增殖以及轉移的作用，同時可以促進血管的生成和抑制腫瘤細胞的凋亡等作用。自身磷酸化是EGFR的活性主要調節方式，EGFR通過磷酸化的酪氨酸殘基與下游底物酶反應而傳遞信號。其下游主要的信號通路包括Ras-Raf-MEK-erk/MAPK信號通路、PI3K-Akt信號通路和JAK/STAT信號通路等。

張小鵬等[7]的研究認為COX-2和EGFR在鼻咽癌患者的組織和血清中都有較高的濃度，同時其濃度的高低和鼻咽癌患者的分期有相關性，故可以成為鼻咽癌患者的診斷和預后的參考指標。EGFR過表達與鼻咽癌進程、放療抗拒性和預后差有關[8-11]。pEGFR是EGFR的活性形式。EGFR與細胞內其他的細胞因子，例如EGF、TGF-α相結合以后，使EGFR本身磷酸化而使其活化，進一步開啟了MAPK通路，MAPK通路的作用可以使細胞外的信號調節激酶發生了核轉位進而活化，最后促使靶基因進行轉錄。并且，在臨床上的相關實驗也證明了干擾EGFR進行磷酸化可以抑制其下游通路的發生，進而使細胞周期發生阻滯和延遲腫瘤的生長速度。有研究已經證實了在非小細胞肺癌患者中，pEGFR的高表達和臨床預后差有明顯的關系[12]。也有研究表明pEGFR低表達鼻咽癌患者無轉移生存明顯優于高表達患者，故pEGFR可能在鼻咽癌的轉移中起著重要作用[13]。袁太澤等[14]的研究顯示pEGFR高表達患者5年無轉移生存率顯著低于pEGFR低表達者（P=0.012）。也有學者認為EGFR表達與患者生存無關[15]。

本研究的結果顯示，兩組3年總生存率與無進展生存率比較，差異均無統計學意義（P>0.05），陰性組3年無局部復發生存率高于陽性組，比較差異有統計學意義（P=0.038）。pEGFR與患者的預后差相關聯，本驗的研究結果在臨床方面進一步證實了pEGFR的過表達與鼻咽癌患者的局部控制差相關。這一研究結論在臨床有一定的實際應用價值，可作為鼻咽癌患者預后的一個推測指標。但有關pEGFR導致鼻咽癌患者預后差的分子機制，本試驗未做相關研究，可在以后的研究中進一步探索。

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