靛玉紅衍生物PHⅡ-7促進sTRAIL對乳腺癌細胞及其耐藥株殺傷的機制研究

彭洪薇，李 菲，鄭雪蓮，呂燕妮，孫曉春，段舟萍，熊冬生，魏筱華

(1. 南昌大學第一附屬醫院，江西 南昌 330006；2. 中國醫學科學院北京協和醫學院血液學研究所實驗血液學國家重點實驗室，天津 300020)

靛玉紅衍生物PHⅡ-7促進sTRAIL對乳腺癌細胞及其耐藥株殺傷的機制研究

彭洪薇1，李 菲1，鄭雪蓮1，呂燕妮1，孫曉春1，段舟萍1，熊冬生2，魏筱華1

(1. 南昌大學第一附屬醫院，江西 南昌 330006；2. 中國醫學科學院北京協和醫學院血液學研究所實驗血液學國家重點實驗室，天津 300020)

目的 探討靛玉紅衍生物PHⅡ-7聯合腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)對乳腺癌細胞MCF-7及其耐藥株MCF-7/ADR的增殖及調節TRAIL受體表達的相關機制。方法 采用MTT法，分別檢測PHⅡ-7、TRAIL及低濃度PHⅡ-7聯合TRAIL處理MCF-7、MCF-7/ADR細胞的生長抑制率，同時以TRAIL敏感細胞MDA-MB-231為對照，證實上述乳腺癌細胞對TRAIL的敏感性；采用流式細胞術檢測細胞凋亡和藥物作用后活性氧的產生情況；real time PCR檢測PHⅡ-7以及PHⅡ-7和活性氧抑制劑NAC聯用后，乳腺癌細胞TRAIL功能性受體DR4、DR5的表達情況。結果 PHⅡ-7作用24 h后對MCF-7及MCF-7/ADR的IC50分別為(4.49±1.55)、(3.44±0.90) μmol·L-1，TRAIL可誘導MDA-MB-231細胞凋亡，而MCF-7、MCF-7/ADR對TRAIL極不敏感，各濃度組與MDA-MB-231相比差異具有統計學意義(P<0.05)；低濃度PHⅡ-7聯合TRAIL可有效促進TRAIL對MCF-7、MCF-7/ADR的殺傷并誘導凋亡，而兩藥單用對上述細胞的增殖抑制作用有限；此外，低濃度的PHⅡ-7還對人正常細胞PBMC的毒性很小，即使與TRAIL聯用，在該濃度范圍下也不會對正常組織細胞產生明顯毒性；PHⅡ-7可有效誘導MCF-7及MCF-7/ADR細胞內活性氧的產生，同時上調TRAIL受體DR4、DR5的水平，并呈劑量依賴性。當PHⅡ-7與ROS抑制劑NAC聯用時，可有效抑制PHⅡ-7對DR4、DR5的表達上調作用。結論 低濃度的PHⅡ-7可有效增強乳腺癌細胞MCF-7、MCF-7/ADR對TRAIL治療的敏感性，其機制可能是通過PHⅡ-7升高細胞內的活性氧水平進而上調TRAIL受體DR4、DR5表達而實現的。本研究為今后PHⅡ-7聯合TRAIL 治療方案的臨床應用奠定了基礎。

靛玉紅；PHⅡ-7；乳腺癌耐藥；TRAIL；ROS；死亡受體

腫瘤壞死因子相關凋亡誘導配體(TRAIL)是TNF家族唯一一個被發現對腫瘤細胞具有誘導凋亡作用，而對正常細胞沒有影響的蛋白，其可溶形式(sTRAIL,114-281)現在已進入Ⅱ期臨床試驗[1]。目前所用的傳統化療藥物存在毒性大、臨床耐藥率高等問題，TRAIL對腫瘤殺傷的選擇性、特異性使其有可能成為今后新興的腫瘤生物治療“明星”藥物，然而進一步的研究顯示，一些血液腫瘤及實體瘤，尤其是惡性程度高的腫瘤往往對TRAIL引起的凋亡呈天然耐受[2]。由于TRAIL具有良好的腫瘤靶向性及低毒性，因此，尋找克服TRAIL耐受的機制或增強TRAIL對腫瘤細胞殺傷的策略成為近年來抗腫瘤研究的重點。

乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，居女性惡性腫瘤之首，且患者死亡率居高不下。盡管近年來乳腺癌的預后得到了很大的改善，但乳腺癌對傳統化療藥物的多藥耐藥現象的產生往往代表了不良預后——化療失敗、腫瘤復發和轉移。腫瘤的多藥耐藥指的是腫瘤細胞對結構不同、作用機制相異的傳統化療藥物均具有耐藥性的現象。由此，開發出新的、可克服耐藥的新化療方案將有助于解決上述問題。PHⅡ-7是靛玉紅的衍生物(結構如Fig 1)，在我們前期的研究中發現，PHⅡ-7對許多不同來源的腫瘤細胞，尤其是耐藥的腫瘤細胞有效[3]。在本研究中，我們選擇高表達MDR-1的乳腺癌耐藥細胞MCF-7/ADR及其敏感細胞MCF-7為研究對象，并以乳腺癌高轉移細胞MDA-MB-231及MDA-MB-361為對照，重點探討PHⅡ-7對sTRAIL誘導的腫瘤細胞凋亡作用的影響。

Fig 1 Structure of indirubin and derivative of indirubin, PHⅡ-7

1 材料與方法

1.1 細胞系人乳腺癌細胞系MCF-7及其耐藥株MCF-7/ADR、轉移性乳腺癌細胞系MDA-MB-231、MDA-MB-361均由中國醫學科學院血液病研究所惠贈。細胞均培養于含10%滅活胎牛血清的RPMI 1640或DMEM高糖型培養基，37℃、5% CO2恒溫培養箱常規培養，隔天換液，取處于對數生長期的細胞用于實驗。此外，耐藥細胞株MCF-7/ADR常規培養中加入阿霉素(adriamycin, ADR)，終濃度為1 mg·L-1以維持耐藥性，實驗前2周撤藥。

1.2 試劑與儀器sTRAIL(PROSPEC, Israel)；CCK-8 reagent(日本同仁化學研究所)；TRIzol及逆轉錄試劑(Invitrogen, USA)；Real time試劑(大連寶生物公司)；阿霉素購自美國輝瑞制藥有限公司；BCA蛋白定量試劑盒購自Thermo Scientific 公司；兔抗人caspase-8抗體、兔抗人PARP-1抗體、兔抗人GAPDH抗體、兔抗人H2A.X抗體及兔抗人磷酸化-H2A.X抗體均購自Cell Signaling Technology公司。PCR 引物由Invitrogen公司合成。凝膠電泳儀購自上海天能(Tanon) 公司。

1.3 CCK-8試劑檢測細胞活力采用CCK-8試劑測定細胞對藥物的敏感性。取對數生長期的腫瘤細胞，用含有10%小牛血清的RPMI 1640培養液配成1×108·L-1，接種于96孔培養板(細胞數為每孔6×103)，在37℃、5% CO2條件下培養24 h，分組加藥，每個濃度設3個平行孔，實驗組加入對應濃度的藥物，陰性對照加入等體積的生理鹽水，使每孔的終體積為200 μL。培養20 h后，每孔加入CCK-8 20 μL (5 g·L-1)，37℃繼續培養4 h，在酶標儀上檢測450 nm光密度(OD)值。腫瘤細胞生長抑制率按以下公式計算：抑制率/%=(對照組OD值-加藥組OD值)/對照組OD值×100%。以同一藥物的不同濃度對腫瘤細胞生長抑制率作圖可得到劑量反應曲線，根據線性回歸方程求出該藥物的半數殺傷濃度IC50，即細胞存活率減少50%時的藥物劑量[4]。

1.4 人外周血單個核細胞的提?、俨烧Ｈ送庵莒o脈血約10 mL，經抗凝處理后，按 1 ∶1 的體積比加入淋巴細胞分離液，靜置20 min，1 500 r·min-1離心15 min，用吸管小心吸取白膜層相，盡量不要將其它層面的細胞或液體吸入。②將上面收集到的淋巴細胞用 PBS 洗滌2遍后，以含10%胎牛血清的 RPMI 1640培養基培養2 d，同時加入IL-2(1 000 kU·L-1)刺激細胞。

1.5 活性氧(ROS)檢測取處于對數生長期的細胞，稀釋接種于6孔板中培養(每孔3×105細胞)，對照組(細胞未經藥物處理)和實驗組(細胞經過藥物處理)處理后，胰酶消化細胞，于細胞懸液中加入終濃度10 μmol·L-1DCFH2-DA染料，避光孵育30 min；孵育結束后重懸、收集細胞，最后用冰預冷的PBS洗滌2次，用流式細胞儀檢測細胞內的ROS水平[5]。

1.6 細胞凋亡實驗胰酶消化細胞MCF-7/ADR、MCF-7，10%胎牛血清終止消化后PBS洗2遍，制成單細胞懸液，調整細胞濃度為1×108·L-1，6孔板每孔加2 mL細胞懸液，培養過夜后加入藥物處理。參照Annexin Ⅴ/PI雙染凋亡試劑盒操作說明書操作。收集細胞制成單細胞懸液，冰預冷的PBS洗2遍后，用100 μL Binding buffer將待測細胞的密度調整為5×105～1×106細胞懸液，5 μL FITC-Annexin Ⅴ標記液和5μL PI，輕輕混勻。避光室溫染色15 min，再補充400 μL Binding buffer重懸，流式細胞儀(BD,LSRⅡ)測定各組細胞發生凋亡的百分數。實驗重復3次，取均值與標準差進行統計分析。

1.7 RNA提取，cDNA合成和實時定量-PCR收集上述乳腺癌細胞，胰酶消化貼壁細胞，10%胎牛血清終止消化后PBS洗2遍，調整細胞濃度，收集2×105個細胞沉淀，以TRIzol裂解。cDNA合成根據Invitrogen cDNA合成試劑盒說明操作。根據GeneBank數據庫提供的基因序列信息，采用Premier 5.0軟件設計特異性引物，并經BLAS分析，由Invitrogen公司合成，PAGE純化，本研究所用的引物序列如Tab 1所示。

Tab 1 Primer sequences for realtime PCR

1.8 蛋白裂解、SDS-PAGE電泳及Western blot實驗收集上述乳腺癌細胞，胰酶消化貼壁細胞，10%胎牛血清終止消化后PBS洗2遍。調整細胞濃度為1×107個，胰酶消化后，按2×106/100μL RIPA濃度加入含有蛋白酶抑制劑的RIPA中裂解，4℃裂解30 min，10 000×g離心20 min，取上清，BCA法進行總蛋白定量。每組取50 μg蛋白，用10%的SDS-PAGE分離蛋白，然后轉印至PVDF膜上。5%脫脂牛奶封閉2 h后，按預染標志物標記的分子量裁剪轉印膜，分別加入目標蛋白一抗，4℃孵育過夜。再以PBS清洗后加入二抗，室溫下孵育30 min，ECL法顯色。Tanon凝膠圖像分析系統照相并分析結果。

2 結果

2.1 PHⅡ-7的細胞毒作用不同濃度的PHⅡ-7及阿霉素處理乳腺癌細胞MCF-7及其耐藥株MCF-7/ADR 24 h后，其對PHⅡ-7的IC50分別為(4.49±1.55)、(3.44±0.90) μmol·L-1；同時MCF-7及MCF-7/ADR對阿霉素的IC50值分別為(3.45±0.05)和(137±12.77) μmol·L-1,差異具有統計學意義(P<0.05)，說明MCF-7/ADR確是耐藥的乳腺癌細胞株。PHⅡ-7對乳腺癌細胞MCF-7及MCF-7/ADR的增殖抑制作用均存在劑量依賴性，且當PHⅡ-7濃度為1 μmol·L-1時，細胞抑制率<10%，因此，在以下的實驗中選擇1μmol·L-1PHⅡ-7為聯合用藥濃度。

2.2 sTRAIL對乳腺癌細胞的增殖抑制作用乳腺癌高轉移細胞MDA-MB-231是文獻報道的對TRAIL較敏感的乳腺癌高轉移細胞系[6]，MDA-MB-361是對TRAIL耐受的乳腺癌高轉移細胞，在本實驗中我們將它們作為對照。

不同濃度(0～400 μg·L-1)的sTRAIL處理乳腺癌細胞MDA-MB-231、MDA-MB-361、MCF-7及MCF-7/ADR 24h后，與TRAIL敏感細胞MDA-MB-231細胞相比，其他乳腺癌細胞生長抑制率均低于20%，表現出對TRAIL殺傷不敏感。Western blot進一步證實了sTRAIL可有效地誘導TRAIL敏感細胞MDA-MB-231細胞凋亡(Fig 2)。

Fig 2 Cytotoxic effect of TRAIL to breast cancer cell line

A: Breast cancer cells MDA-MB-231,MDA-MB-361,MCF-7 and its multidrug resistant counterpart MCF-7/ADR were treated by various concentrations of TRAIL(0～400 μg·L-1) for 24 h, then after incubated by CCK-8 reagent for 2 h, the absorbance was read in 450nm and the inhibition rate was calculated. B: Cell lysates containing equal amounts of protein(50μg)were separated by SDS-PAGE and immunoblotted with anti-PARP-1/caspase-8/cleaved caspase-8 antibody. GAPDH was shown as an internal control.*P<0.05,**P<0.01vssurvival rate of 0 concentration of each group

2.3 低濃度的PHⅡ-7與sTRAIL聯用可有效促進sTRAIL對乳腺癌細胞的增殖抑制作用

2.3.1 低濃度的PHⅡ-7對正常組織細胞的毒性 不同濃度的PHⅡ-7(0～20 μmol·L-1)處理人外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cells, PBMC)，低濃度(<1 μmol·L-1)的PHⅡ-7對PBMC的增殖抑制作用較弱(<80%)，即使與50 μg·L-1的sTRAIL聯用，對PBMC的抑制作用仍不明顯(Fig 3 A、B)。

Fig 3 PHⅡ-7 with low concentration augment TRAIL-induced apoptosis in breast cancer cell line

A:Cytotoxic effect of PHⅡ-7(0～20μmol·L-1)on human peripheral blood mononuclear cell(PBMC). PBMC was treated with each concentration of PHⅡ-7 for 24h.*P<0.05,**P<0.01vscontrol. B: Cell survival rate of PBMC treated by low concentration of PHⅡ-7(0～1μmol·L-1)alone or in combination with sTRAIL(50 μg·L-1) for 24h. C: Cell survival rate of breat cancer cell line MCF-7 and its multidrug resistant counterpat MCF-7/ADR treated by low concentration of PHⅡ-7(0～1μmol·L-1)alone or in combination with sTRAIL(50 μg·L-1) for 24h.*P<0.05vsPH Ⅱ-7 alone. D: Apoptosis detected in breast cancer cells by Annexin Ⅴ-FITC tests when PHⅡ-7(1μmol·L-1) in combination with sTRAIL(50 μg·L-1). E： Apoptosis rates counted with three independent repeated experiments.*P<0.05vscontrol.F: Western blot analysis of apoptosis pathway protein. Cell lysates containing equal amounts of protein(50μg) were separated by SDS-PAGE and immunoblotted with anti-PARP-1 and anti-caspase-8 antibody. GAPDH was shown as an internal control.

2.3.2 低濃度的PHⅡ-7與sTRAIL聯合應用對乳腺癌細胞的增殖抑制作用 低濃度的PHⅡ-7(0～1 μmol·L-1)與sTRAIL聯合處理乳腺癌細胞MCF-7及其耐藥株MCF-7/ADR，如Fig 3C所示，盡管上述濃度范圍內的PHⅡ-7對乳腺癌細胞的增殖抑制作用有限，但一旦與sTRAIL聯用，顯示出劑量依賴性的增殖抑制作用，其中1 μmol·L-1PHⅡ-7與50 μg·L-1sTRAIL聯用后乳腺癌細胞MCF-7及其耐藥株MCF-7/ADR的抑制率分別為(68.03±1.23)%、(60.03±2.44)%。

2.3.3 低濃度的PHⅡ-7與sTRAIL聯用可有效誘導乳腺癌細胞凋亡 如Fig 3D、E所示，1 μmol·L-1PHⅡ-7及sTRAIL(50 μg·L-1)單用均未明顯誘導乳腺癌細胞凋亡，而一旦1μmol·L-1PHⅡ-7與sTRAIL聯用，細胞凋亡率明顯升高，MCF-7及MCF-7/ADR的凋亡率分別為(25.00±3.23)%、(28.18±0.33)%。

2.3.4 低濃度的PHⅡ-7與sTRAIL聯用可激活乳腺癌細胞凋亡信號通路 Western blot法證實1 μmol·L-1PHⅡ-7與sTRAIL(50 μg·L-1)聯用可有效激活caspase-8，誘導乳腺癌細胞凋亡(Fig 3F)。

2.4 低濃度的PHⅡ-7通過升高乳腺癌細胞內的活性氧水平上調DR4、DR5的表達

2.4.1 低濃度的PHⅡ-7可激活升高細胞內的活性氧水平 利用活性氧的特異探針DCFH2-DA，我們檢測了1μmol·L-1PHⅡ-7作用于MCF-7及MCF-7/ADR后細胞內活性氧的動態變化情況。如Fig 4A所示，細胞內的活性氧水平在藥物作用2 h后達到最高，之后下降，符合細胞氧化應激的特征。細胞內活性氧水平升高會對細胞內的生物大分子如蛋白質、DNA造成損傷。H2A.X是ATM的效應蛋白，當細胞的DNA受損后，激活ATM/ATR激酶系統，從而將H2A.X磷酸化，因此H2A.X的磷酸化是檢測DNA損傷的一個重要指標。如Fig 4B所示，乳腺癌細胞中H2A.X的磷酸化狀態隨著PHⅡ-7作用時間的增加逐漸增強，說明PHⅡ-7引致的ROS升高可能造成了DNA損傷。

2.4.2 低濃度的PHⅡ-7升高細胞內DR4、DR5的表達 實時定量PCR及Western blot分析結果顯示，PHⅡ-7可升高乳腺癌細胞內DR4、DR5的表達，且呈劑量依賴性；用ROS的抑制劑NAC處理之后，細胞內DR4、DR5的表達水平恢復至與對照組相當(Fig 5)。

Fig 4 1 μmol·L-1 PHⅡ-7 generated ROS production in breast cancer cells

A: DCFH2-DA probe detected the ROS production by PHⅡ-7(1μmol·L-1) in breast cancer cells; B: Western blot analysis confirmed DNA damage. Cells were treated with PHⅡ-7(1μmol·L-1) for various time(0-24h). Equal amouts of protein(50μg)from cell lysates were separated by SDS-PAGE and immunoblotted with anti-phospho-H2A.X/ anti-H2A.X antibody. GAPDH was shown as an internal control.*P<0.05vscontrol

3 討論

TRAIL 因其對腫瘤細胞良好的特異性，且對正常細胞毒性很小而顯示出很好的應用前景。TRAIL為Ⅱ型跨膜蛋白，其可溶形式(114-281肽段)(soluble TRAIL, sTRAIL)作為跨膜蛋白 TRAIL 胞外區的一部分，可以與完整的TRAIL 分子一樣，募集細胞膜表面的功能性受體 DR4、DR5，啟動外源性凋亡[7]。然而，盡管TRAIL顯示出令人欣喜的抗腫瘤前景，許多腫瘤組織對TRAIL殺傷的耐受也是不容忽視的問題。

有報道表明,c-Fos在前列腺癌組織中，因參與抑制抗凋亡蛋白c-FLIP的功能故可以促進TRAIL介導的細胞凋亡[8-10]。在我們實驗室保存的耐藥細胞株K562/A02及MCF-7/ADR也發現c-Fos高表達，并被認為與多藥耐藥相關蛋白P-gp的過表達相關[4]。受到Zhang等[8]的研究啟發，我們比較了sTRAIL分子對耐藥及敏感細胞的殺傷，結果發現sTRAIL對它們的殺傷并無差異，說明c-Fos在上述兩株耐藥細胞株中并未對TRAIL啟動的外源性凋亡通路產生明顯影響。

Fig 5 1μmol·L-1 PHⅡ-7 up-regulated expression of TRAIL receptor, DR4 and DR5 and ROS scavenger could block the effect

A.Realtime PCR analysis confirmed TRAIL receptors, DR4 and DR5 up-regulation by PHⅡ-7(1 μmol·L-1) with various time(0-24h), and ROS scavenger, NAC, blocked the effect. B. Western blot analysis confimed DR4 and DR5 up-regulation by PHⅡ-7(1 μmol·L-1) and once NAC in combination with PHⅡ-7, the expression of DR4 and DR5 remain to control.*P<0.05vscontrol

盡管部分化療藥物可不同程度地有助于腫瘤細胞克服TRAIL的耐受[11-12]，但這些化療藥物大多對已經獲得多藥耐藥性的腫瘤細胞無效。臨床上，常常由于腫瘤細胞高表達P-gp，獲得對許多傳統化療藥物的多藥耐藥性而導致化療失敗。這樣一來，因為耐藥性的產生，這些化療藥物在細胞內不能達到有效的藥物濃度，造成這些細胞依舊對與TRAIL聯合的用藥方案不敏感。同時，由于傳統化療藥物在治療過程中的毒性較大，不僅降低了病人的生活質量，也將對治療的依從性造成很大的影響。

PHⅡ-7是我們實驗室以傳統中藥當歸龍薈丸的有效成分靛玉紅為模板，經過構效關系分析合成得到的靛玉紅衍生物，我們之前的研究已發現PHⅡ-7可有效地降低多藥耐藥腫瘤細胞K562/A02、MCF-7/ADR中多藥耐藥蛋白MDR-1的表達，其可能機制是通過升高細胞內的活性氧水平[5,13]；而多項研究發現，細胞內活性氧水平的高低可影響腫瘤細胞對TRAIL的敏感性[14]。本研究的結果顯示，PHⅡ-7正是通過升高細胞內的活性氧水平上調乳腺癌細胞中DR4、DR5的表達水平，進而促進TRAIL對上述細胞的殺傷。盡管多種化療藥物均證實可不同程度地提高腫瘤細胞對TRAIL的敏感性，但上述傳統化療藥物對多藥耐藥的腫瘤細胞無效。且多數情況下，大劑量的化療藥物可以通過不同途徑有效殺死腫瘤細胞，但治療過程中的毒性反應難以避免，開發新的低毒高效的化療方案一直是腫瘤學界學者們追求的目標。利用TRAIL對腫瘤細胞的選擇性，同時借助于低濃度的PHⅡ-7對敏感和多藥耐藥的腫瘤細胞相當地促進TRAIL殺傷的抗腫瘤作用，低濃度的靛玉紅衍生物PHⅡ-7聯合TRAIL分子將有希望成為今后腫瘤治療可選擇的有效治療方案。

(致謝：本實驗所用細胞系均為中國醫學科學院血液學研究所熊冬生教授惠贈，實驗工作主要在中國醫學科學院血液學研究所實驗血液學重點實驗室及南昌大學第一附屬醫院醫學科研中心完成，在此一并感謝。)

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Study of mechanism of indirubin derivative PH Ⅱ-7 in augmenting TRAIL-induced cytotoxicity in breast cancer cell line as well as its chemo-resistant counterpart

PENG Hong-wei1, LI Fei1, ZHENG Xue-lian1, LYU Yan-ni1, SUN Xiao-chun1,DUAN Zhou-ping1, XIONG Dong-sheng2, WEI Xiao-hua1

(1.TheFirstAffilatedHospitalofNanchangUniversity,Nanchang330006,China;2.StateKeyLaboratoryofExperimentalHematology,InstituteofHematology,BeijingUnionMedicalCollege&ChinaAcademyofMedicalSciences,Tianjin300020,China)

Aim To investigate the effect of indirubin derivative PHⅡ-7 and TRAIL on proliferation in breast cancer cell MCF-7 and its MDR counterpart MCF-7/ADR and the mechanism.Methods Growth inhibition rate was examined respectively by MTT assay under treatment with TRAIL or PHⅡ-7 or in combination. Cell apoptosis and ROS production were examined by flow cytometry. The change of TRAIL receptors(DR4/DR5) in mRNA was analysed by realtime PCR.Results IC50of PHⅡ-7 on MCF-7 and MCF-7/ADR was (4.49±1.55), (3.44±0.90) μmol·L-1respectively;MDA-MB-231 was TRAIL sensitive cell line, and apparently TRAIL induced apoptosis in MDA-MB-231.Low concentration of PHⅡ-7 in combination with TRAIL could augment TRAIL-induced cytotoxic effect including apoptosis while TRAIL or PHⅡ-7 treatment alone had limited cytotoxity to those cells. Besides, PHⅡ-7 at this concentration had little toxicity to human peripheral blood mononuclear cells even if in combination with TRAIL. PHⅡ-7 generated ROS production inside MCF-7 and MCF-7/ADR cells and up-regulated DR4/DR5 expression concentration dependently.Once upon ROS scavenger NAC involved, the effect of TRAIL receptors up-regualtion by expression was abrogated.Conclusions PHⅡ-7 at low concentration could improve the sensitivities of breast cancer cell MCF-7 and MCF-7/ADR to TRAIL, the mechanism of which may be the ability of ROS production by PHⅡ-7 help up-regulated TRAIL receptor DR4,DR5. Our research set a solid foundation for PHⅡ-7 in combination with TRAIL in future clinical application.

indirubin; PHⅡ-7; multidrug resistance in breast cancer; TRAIL; ROS; death receptor

時間：2015-4-15 15:44 網絡出版地址：http://www.cnki.net/kcms/detail/34.1086.R.20150415.1545.018.html

2015-02-17,

2015-03-19

江西省教育廳科技項目(No GJJ13027)

彭洪薇(1985-)，女，博士，主管藥師，研究方向：腫瘤靶向治療與多藥耐藥,Tel:0791-88694216，E-mail:wavypeng1985@126.com; 魏筱華(1964-)，女，學士，主任藥師，研究方向：臨床藥學,通訊作者,Tel:0791-88692736,E-mail:wxh-hello@163.com

10.3969/j.issn.1001-1978.2015.05.018

A

1001-1978(2015)05-0679-07

R284.1；R329.24；R392.11；R737.902.2；R979.1