老年骨肉瘤術后組織中纖毛內轉運蛋白20、癌胚抗原相關細胞黏附分子6和抑癌基因的表達及意義

溫洪鵬

(廉江市人民醫院骨科，廣東 廉江 524400)

老年骨肉瘤術后組織中纖毛內轉運蛋白20、癌胚抗原相關細胞黏附分子6和抑癌基因的表達及意義

溫洪鵬

(廉江市人民醫院骨科，廣東 廉江 524400)

目的 應用免疫組化方法檢測老年人骨肉瘤患者術后組織中纖毛內轉運蛋白(IFT)20、癌胚抗原相關細胞黏附分子(CEACAM)6和抑癌基因PTEN(PTEN)的表達，研究三種蛋白在不同臨床特征中的表達差別。方法 病理確診的69例老年人骨肉瘤術后組織作為觀察組，選擇50例外傷后切除的正常骨組織作為對照組，采用免疫組化SP法檢測兩組中IFT20、CEACAM6和PTEN的表達。結果 兩組中IFT20、CEACAM6和PTEN表達的陽性率差別顯著，觀察組中IFT20、CEACAM6和PTEN表達的陽性率均與腫瘤的最大徑線、有無軟組織浸潤、有無轉移及不同Ennecking分期有關。相關分析顯示IFT20和PTEN的表達呈負相關。結論 老年人骨肉瘤術后組織IFT20和CEACAM6高表達，PTEN低表達，三者異常表達可以促進腫瘤的發生和進展，IFT20可能通過調節抑癌基因PTEN的表達發揮生物學作用。

骨肉瘤；纖毛內轉運蛋白(IFT)20；癌胚抗原相關細胞黏附分子(CEACAM)6；抑癌基因(PTEN)

骨肉瘤發病率較低，約30%發生在40歲以上的患者，且要考慮到相關促進腫瘤發生發展的因素〔1〕。老年人骨肉瘤的發生中常具有特征性，尤其是老年人常伴有退行性改變，因此相關蛋白表達失調的促進作用更明顯〔2〕。纖毛內轉運蛋白(IFT)20高表達時可以調控腫瘤細胞的分化過程，并可以引起細胞增殖加快，抑癌基因表達失調等生物學過程〔3，4〕。癌胚抗原相關細胞黏附分子(CEACAM)6是機體特征性的黏附分子調節蛋白，在腫瘤中表達升高，不僅可以調節細胞的黏附作用，還對細胞增殖和血管生成有一定影響〔5,6〕。抑癌基因(PTEN)可以對細胞周期及凋亡有明顯的影響，進而抑制腫瘤的生長及進展〔7,8〕。本文分析老年骨肉瘤術后組織中IFT20、CEACAM6和PTEN的表達特征及臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料 近5年我院經病理學確診為骨肉瘤的老年患者作為觀察組，均符合WHO中《軟組織與骨腫瘤病理學和遺傳學》中骨肉瘤的診斷標準，共69例，均留取術后組織，年齡60～89〔平均(67.8±6.9)〕歲。收集50例老年人外傷后切除的碎骨組織作為對照組，病理學證實為正常板層骨，年齡60～78〔平均(66.5±5.8)〕歲。兩組一般資料無統計學差異無。

1.2 IFT20、CEACAM6和PTEN蛋白的檢測 IFT20、CEACAM6和PTEN試劑均為濃縮液，在正式免疫組化檢測前，三種蛋白均按不同稀釋比例進行相關預實驗，選擇抗體表達最理想的濃度用于正式實驗。IFT20、CEACAM6和PTEN蛋白檢測的正式實驗應用免疫組化SP法，采用DAB顯色方法，嚴格按照說明書的步驟操作，做好質量控制，減少誤差。

1.3 IFT20、CEACAM6和PTEN結果的判讀 IFT20、CEACAM6和PTEN的顯色部位均為細胞質，以細胞質中出現中-強的棕黃色顆粒認定為陽性細胞(弱陽性細胞不計為陽性細胞)，選擇10個染色密集的陽性細胞區域，計數10個高倍(400倍)視野，計算陽性細胞的百分率，取平均值作為最終統計學的結果。以陽性率≥5%計為陽性，陽性率<5%計為陰性。

1.4 統計學方法 應用SAS6.12軟件行χ2檢驗和線性相關分析。

2 結 果

2.1 兩組中IFT20、CEACAM6和PTEN蛋白表達的比較 觀察組中IFT20(40例)、CEACAM6(39例)的陽性表達明顯高于對照組(5例、4例，均(P<0.000 1)，PTEN的陽性表達明顯低于對照組(16例 vs 47例，P<0.000 1)。

2.2 觀察組不同臨床特征中IFT20、CEACAM6和PTEN表達陽性率的比較 觀察組中三種蛋白表達的陽性率均在腫瘤的最大徑線、軟組織浸潤、轉移及Ennecking分期有明顯差別。見表1。

2.3 IFT20、CEACAM6和PTEN的相關性分析 觀察組中IFT20與PTEN(r=-0.49，P=0.047 5)的表達呈負相關性，其他指標間未見明顯的相關性(P>0.05)。

表1 觀察組不同臨床特征中IFT20、CEACAM6和PTEN表達陽性率的比較〔n(%)〕

3 討 論

老年人骨肉瘤發生和發展常與退行性改變有關，其中引發腫瘤形成的主要是機體和蛋白表達的失調，此時不僅引起抑癌基因的丟失，同時可以有效活化癌基因，使腫瘤的侵襲和生長能力明顯增強〔9〕。老年人骨肉瘤一般是體積大，常超過5 cm，以干骺端為中心，形成肉質或質硬的腫瘤，它常破壞骨皮質并與軟組織包塊相關聯。也有少數骨型骨肉瘤可以呈灰褐色和不規則的顆粒狀，有些則致密、硬化、偏黃白色，伴不同程度的鈣化，切面呈魚肉樣或有黏性物質。腫瘤大小、分期、是否有轉移可以用于骨肉瘤預后的判斷，此種進展過程均與腫瘤的蛋白表達失調有關〔10〕。IFT存在于真核細胞表面的纖毛和鞭毛中，具有正向和逆向轉運功能，如果IFT 缺陷，會產生許多與纖毛相關的疾病〔11,12〕。IFT20與多囊腎的發生、視神經褪行性改變和心臟的發育有一定關系〔13〕。IFT20定位于細胞胞質內高爾基細胞器的周圍，使細胞信號從高爾基細胞器傳送到細胞原纖毛的基底部，并結合中心粒周圍蛋白后形成嵌合物，使信號傳遞到細胞原纖毛的底部。也有研究顯示惡性腫瘤組織內IFT20 蛋白高表達，使細胞原纖毛的長度增加，不僅加速細胞的運動，還可以有效促進細胞的增殖過程〔14〕。近來人們關注IFT20與腫瘤的關系，并發現IFT20是促進卵巢腫瘤進展的重要蛋白之一〔15〕。CEACAM6是細胞表面的糖蛋白，也是免疫球蛋白超家族的成員之一，在正常成骨細胞中表達低，當成骨細胞增殖活性提高后，CEACAM6的表達增高，并通過糖基磷脂酰肌醇連接在細胞質中，促進腫瘤進展〔16〕。近年也有學者認為腫瘤中CEACAM6高表達可以引起間質血管的生成，從多種信號途徑加速腫瘤的形成〔17〕。PTEN不僅具有磷酸酯酶的活性，還具有多種腫瘤生物學的作用特征〔18〕。有觀點認為PTEN可以有效地抑制腫瘤細胞的轉移、活化、聚集和黏附作用〔19〕。

本研究提示IFT20和CEACAM6高表達、PTEN低表達是促進老年人骨肉瘤形成的重要因素。IFT20可能通過對Wnt的經典信號通路進行調節發揮生物學作用，也可能與對骨肉瘤細胞增殖的影響發揮生物學功能。CEACAM6是癌基因，可以直接啟動腫瘤的發生過程〔20,21〕，而PTEN是抑癌基因，正常情況下高表達，可以抑制腫瘤的發生，當PTEN表達下調或丟失后，正常細胞的腫瘤抑制作用消失，腫瘤繁殖增快，惡性潛能增加。本研究結果提示IFT20、CEACAM6和PTEN異常表達是腫瘤生長、浸潤及轉移的重要促進因素，由于以上因素均為判斷骨肉瘤預后的臨床指標，因此也提示三種蛋白可能是判斷預后的指標，即IFT20和CEACAM6高表達、PTEN低表達患者的預后可能較差。IFT20與PTEN具有協同效應，即IFT20對骨肉瘤的促進作用可能與對PTEN的作用減弱或消失有密切關系，此時IFT20對腫瘤生長和進展的抑制作用減弱，腫瘤加速生長和侵襲〔22〕。也有觀點認為當PTEN對腫瘤抑制作用減弱后，促腫瘤生長的基因相對激活，如血管內皮生長因子、P53等，從而引起細胞增殖分化失控、凋亡障礙以及血管生成通路異常，加速腫瘤的進展〔23〕。

綜上，老年人骨肉瘤術后組織IFT20和CEACAM6高表達，PTEN低表達可以促進腫瘤的發生和進展，IFT20可能通過調節抑癌基因PTEN的表達發揮生物學作用。

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〔2013-12-17修回〕

(編輯 苑云杰)

溫洪鵬(1980-)，男，主治醫師，主要從事骨科疾病研究。

R738.1

A

1005-9202(2015)12-3333-03；

10.3969/j.issn.1005-9202.2015.12.067