2010年福建省腸道病毒71型血清流行病學調查

王金章,陳 煒,翁育偉,何文祥,張擁軍,黃 萌,謝劍鋒,鄭奎城,嚴延生

2010年福建省腸道病毒71型血清流行病學調查

王金章,陳 煒,翁育偉,何文祥,張擁軍,黃 萌,謝劍鋒,鄭奎城,嚴延生

目的 了解經過2008及2009年手足口病流行之后，福建省普通人群血清腸道病毒71型的抗體水平。方法 采集2010年福建省390名普通人群的血清標本，采用中和試驗檢測血清EV71中和抗體。結果 390名普通人群中和抗體陽性186人，陽性率47.69%。男女性別之間中和抗體陽性率及抗體滴度均沒有統(tǒng)計學差異(χ2=0.42，P=0.52>0.05；U=-0.24，P=0.81>0.05)。各個年齡組之間的抗體陽性率及抗體滴度均有統(tǒng)計學差異(χ2=55.69，P=0.00<0.05；HC=50.36,P=0.00<0.05)，抗體陽性率最低的為0～歲年齡組，為16.67%，抗體陽性率隨年齡增大而增高。0～4歲年齡組的抗體陽性率為25.33%，5～年齡組的抗體陽性率為61.67%，兩者之間的抗體陽性率及抗體滴度均有統(tǒng)計學差異(χ2=48.85,P=0.00<0.05；U=-6.39，P=0.00<0.05)。結論 經過2008及2009年手足口病流行之后，福建省普通人群血清腸道病毒71型的抗體水平仍較低，特別是0～4歲年齡組的兒童。今后福建省仍會出現EV71作為主要病原體之一引起的手足口病疫情，易感人群仍為5歲組以下兒童，應繼續(xù)加強監(jiān)測和防控。

腸道病毒71型；中和抗體；血清流行病學調查

腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)為小RNA病毒科腸道病毒屬成員，是引起手足口病(Hand-foot-mouth disease, HFMD)的主要病原體。EV71感染引起的手足口病，與非EV71感染引起的手足口病相比，臨床表現沒有明顯的特異性，以發(fā)熱和手、足、口腔和臀部等部位出現皮疹為主要臨床特征的一種常見的急性傳染病。多數患者預后良好，但有時會出現比較嚴重的并發(fā)癥，如急性神經源性肺水腫、肺出血和心肌炎等心肺并發(fā)癥和腦干腦炎、無菌性腦膜炎和類脊髓灰質炎樣麻痹等神經系統(tǒng)并發(fā)癥[ 1-2 ]。

自1997年開始，由EV71病毒引起的手足口病暴發(fā)公共衛(wèi)生事件在東亞及東南亞逐漸增多，并經常引起社會恐慌[3]。2008年3月我國安徽省阜陽市等地區(qū)[ 4-5 ]出現了主要由EV71病毒引起的手足口病暴發(fā)流行，5月2日我國將手足口病納入丙類法定傳染病進行管理。福建省2008年及2009年也出現了手足口病流行，分別報告11 740例及19 226例手足口病病例，而EV71所占手足口病病原譜的構成比例均超過80%，分別為85.3%及80.7%，說明EV71是引起當前手足口病的主要腸道病毒。為了解經過2008年及2009年主要由EV71引起手足口病的流行之后，福建省普通人群EV71血清中和抗體水平狀況，我們于2010年開展了福建省EV71型血清流行病學調查。

1 材料與方法1.1 血清標本來源 利用2010年福建省甲型H1N1抗體水平調查所采集的血清標本，選擇390份不同年齡組的血清標本來檢測其EV71中和抗體。具體年齡分組見表1，每個年齡組隨機選擇30份血清標本。

1.2 病毒抗原的制備 EV71病毒毒株(2010FJLY 008)株，GenBank accession No:HQ426649)由本實驗室通過接種2010年福建地區(qū)手足口病患兒咽拭子標本于RD細胞，分離兩代收獲，并進行全長基因組核苷酸序列測定和分析[6]，確定其為2010年福建省本省的EV71型地方株。毒株的分離、滴定嚴格按照操作規(guī)程[7]進行操作。

1.3 檢測方法 使用96微孔板中和試驗檢測血清EV71中和抗體，具體操作步驟參照[7]，血清中和抗體<1∶8為陰性，≥1∶8為陽性。

1.4 資料分析 數據錄入到Excel文檔，使用SPSS13.0(SPSS Inc., Chicago, USA)統(tǒng)計軟件對數據進行處理和分析。

2 結 果

2.1 不同年齡組抗體陽性率的比較 390份血清標本中，186份EV71中和抗體陽性，陽性率為47.69%。各個年齡組的EV71中和抗體陽性率，詳見表1及圖1。EV71中和抗體陽性率最低的為0～歲年齡組，為16.67%，4～歲及以下年齡組的抗體陽性率均低于35%，5～歲及以上年齡組的抗體陽性率均高于50%，抗體陽性率隨年齡增大而增高。通過對各個年齡組抗體陽性率進行χ2檢驗分析，各個年齡組之間的抗體陽性率差異具有統(tǒng)計學意義(χ2=55.69，P=0.00<0.05)；同時，采用秩轉換的非參數檢驗對各個年齡組的血清標本抗體滴度進行分析，結果顯示各個年齡組之間的抗體水平差異也有意義(HC=50.36,P=0.00<0.05)。

2.2 不同性別抗體陽性率的比較 390份血清標本中，其中男性血清標本208份，中和抗體陽性96份，陽性率46.15%；女性血清標本182份，陽性90份，陽性率49.45%，具體每個年齡組的男女血清中和抗體陽性率見表1。經過χ2檢驗，男女之間血清標本的EV71中和抗體陽性率沒有差異(χ2=0.42，P=0.52>0.05)；同時，通過對男女之間血清標本的EV71中和抗體滴度進行秩轉換的非參數檢驗，男女之間血清標本的EV71中和抗體水平差異也無統(tǒng)計學意義(U=-0.24，P=0.81>0.05)。

2.3 中和抗體水平構成比 在調查的390份血清標本中，中和抗體滴度<1∶8的有204份(52.31%)，1∶8-1∶32的有118份(30.26%)，1∶64-1∶128的有55份(14.10%)，≥256的有13份(3.33%)，具體見表2。中和抗體檢測結果為陰性及低抗體水平的血清標本占主要部分。

圖1 2010年福建省EV71血清抗體陽性率

3 討 論

EV71是引起手足口病(Hand-foot-mouth disease, HFMD)的主要病原體，全球很多國家和地區(qū)報道了EV71引起的手足口病疫情及其EV71的流行基因型等相關的病原學特征。但是，目前針對普通人群EV71中和抗體的血清流行病學報道研究較少。本研究利用2010年福建省甲型H1N1抗體水平調查所采集的普通人群血清標本，標本覆蓋的年齡組從0～10歲的每個年齡組，同時涵蓋了成人組等年齡組，并使用χ2檢驗和秩轉換的非參數檢驗兩種方法對結果進行統(tǒng)計分析。因此，能夠比較全面和客觀地反映了EV71中和抗體水平在普通人群中的變化特征。

表1 不同年齡段及性別的EV71中和抗體陽性率

表2 不同年齡段的EV71中和抗體構成比

通過對不同年齡組的EV71抗體陽性率及抗體滴度分別采用χ2檢驗和秩轉換的非參數檢驗進行統(tǒng)計分析，結果顯示不同年齡組的抗體陽性率和抗體滴度均有統(tǒng)計學意義，表明普通人群不同年齡組抗體水平是有差異。0～4歲年齡組的抗體陽性率為25.33%，5～年齡組的抗體陽性率為61.67%，對0～4歲年齡組與5～年齡組的抗體陽性率及抗體滴度分別采用χ2檢驗和秩轉換的非參數檢驗進行統(tǒng)計分析，結果顯示0～4歲年齡組與5～年齡組的抗體陽性率及抗體滴度均有統(tǒng)計學意義(χ2=48.85,P=0.00<0.05；U=-6.39，P=0.00<0.05)，表明5～年齡組人群的EV71血清抗體水平比0～4歲年齡組人群高。同時，從表1及圖1可以得到人群中EV71抗體陽性率隨年齡增大而增高，0～4歲年齡組每個年齡組的EV71抗體陽性率均<35%，而5～年齡組的抗體陽性率均≥50%，維持在一個相對穩(wěn)定的水平。這些與手足口病發(fā)病率以4歲及以下年齡組為主，同時發(fā)病率隨著年齡的增長而降低的疫情特點相符合。也與國內外有關報道[8-10,12]基本一致。

對手足口病主要患者人群0～4歲組中男女抗體水平進行比較，男性抗體陽性率為23.86%，女性的抗體陽性率為27.42%，雖然女性的抗體陽性率比男性高，但是分別采用χ2檢驗和秩轉換的非參數檢驗對其抗體陽性率及抗體滴度進行統(tǒng)計分析，結果顯示0～4歲組中男女之間的抗體陽性率及抗體滴度均無統(tǒng)計學意義(χ2=0.24，P=0.62>0.05；HC=-0.25,P=0.80>0.05)。提示0-4歲組中男女之間的EV71血清抗體水平是相似的，這與手足口病疫情中的男性發(fā)病率明顯高于女性存在差異，其原因有待進一步研究。

本研究的標本覆蓋年齡組從0～10歲的每個年齡組，同時涵蓋了成人組等年齡組，但缺少嬰兒1～12月月齡組的EV71血清抗體水平變化資料。Eng-Eong Ooi等[8]在對新加坡EV71血清流行病學調查中報道，帶母親血清抗體的新生兒血清44.0%具有EV71抗體，但1個月后迅速消退；Mei Zeng等[9]對上海兒童的EV71血清抗體流行病學調查中報道，1月新生兒的EV71血清抗體陽性率為67%，然后隨著月齡的增大逐漸下降，10月及11月嬰兒的EV71血清抗體陽性率為0。本研究0～歲組人群的中和抗體陽性率是所有年齡組中最低的，僅為16.67%，考慮為月齡相對較大的嬰兒，因為月齡較大的血清相對于月齡較小的特別是0或1月新生兒來說，更容易獲得。

2008年3月份手足口病在中國大陸地區(qū)開始大規(guī)模流行，2008年及2009年引起手足口病的主要病原體為EV71。在中國2008年手足口病大規(guī)模流行之前，部分研究者開展了EV71回顧性流行病學調查，如周世力等[10]檢測1999-2003年深圳市584份正常人血清，其中5歲組以下的人群的EV71抗體陽性率為23.47%；郭學斌等[11]對2005年中國東南、西北、西南的3個縣總計371名1～6歲兒童人腸道病毒71型血清進行流行病學調查，3個縣兒童HEV 71中和抗體陽性率不同，但差異無顯著的統(tǒng)計學意義，其中5歲組以下的人群的EV71抗體陽性率為40.40%；Zhen Zhu等[12]對2005年中國6個不同省份的900份5歲組及以下的兒童進行EV71回顧性流行病學調查，其EV71抗體陽性率為32.00%。本研究是在08年、09年的手足口病(主要病原體為EV71)大規(guī)模流行之后開展普通人群EV71血清中和抗體水平調查，0～4歲年齡組的抗體陽性率僅為25.33%，其抗體水平甚至比上述報道的2008年之前我國其它省份的相應年齡組人群還低，提示今后一段時間福建省仍然會有EV71作為主要病原體之一引起的手足口病流行，其主要的易感人群為5歲組以下兒童。因此，應繼續(xù)加強手足口病的監(jiān)測和防控工作，特別要防控EV71引起的暴發(fā)和EV71引起的重癥死亡事件。

[1]McMinn PC. An overview of the evolution of enterovirus71 and it's clinical and public health significance[J]. FEMS Microbial Rev, 2002, 26 (1): 91-107. DOI: 10.1111/j.1574-6976.2002.tb00601.x

[2]Singh S, Poh CL, Chow VT. Complete sequence analyses of enterovirus 71 strains from fatal and non-fatal cases of the hand, foot and mouth disease outbreak in Singapore (2000)[J]. Microbiol Immunol, 2002, 46 (11): 801-808. DOI: 10.1111/j.1348-0421.2002.tb02767.x

[3]Shimizu H, Utama A, Onnimala N, et al. Molecular epidemiology of enterovirus 71 infection in the Western Pacific Region[J]. Pediatrics Int, 2004, 46(2): 231-235. DOI: 10.1046/j.1442-200x.2004.01868.x

[4]Zhang Y, Zhu Z, Yang W, et al. An emerging recombinant human enterovirus 71 responsible for the 2008 outbreak of hand foot and mouth disease in Fuyang city of China[J]. Virol J, 2010, 7: 94. DOI: 10.1186/1743-422X-7-94

[5]Yang F, Ren L, Xiong Z, et al. Enterovirus 71 outbreak in the People's Republic of China in 2008[J]. J Clin Microbiol, 2009, 47(7): 2351-2352. DOI: 10.1128/JCM.00563-09

[6]Chen W, Zhou CH, Shen XN, et al. Sequence analysis on complete genome of an enterovirus 71 strain(2010FJLY008) isolated in Fujian Province[J]. Chin J Zoonoses, 2011, 27(1): 14-18. (in Chinese) 陳煒，周朝暉，沈曉娜，等. 福建省腸道病毒71型分離株(2010FJLY008)全基因組核苷酸序列分析[J]. 中國人獸共患病學報，2011, 27 (1): 14-18.

[7]National of polio and national measles laboratory. HFMD Laboratory Manual[R]. Beijing: Chinese Center for Disease Control and Prevention. 2010: 20-26. (in Chinese) 國家脊髓灰質炎和國家麻疹實驗室. 手足口病實驗室手冊 [R]. 4版. 北京：中國疾病預防控制中心，2010: 20-26.

[8]Ooi EE, Phoon MC, Ishak B, et al. Seroepidemiology of human enterovirus 71, Singapore[J]. Emerg Infect Dis, 2002, 8 (9): 995-997. DOI: 10.3201/eid0809.10.3201/eid0809.010397

[9]Zeng M, El Khatib NF, Tu S, et al. Seroepidemiology of Enterovirus 71 infection prior to the 2011 season in children in Shanghai[J]. J Clin Virol, 2012, 53 (4): 285-289. DOI: 10.1016/j.jcv.2011.12.025

[10]Zhou SL, Li LL, He YQ, et al. Serological epidemiology investigation of enterovirus type 71 infection in Shenzhe[J]. J Trop Med, 2007, 7(1): 66-67. (in Chinese) 周世力，李琳琳，何雅青. 深圳市腸道病毒 71 型血清流行病學初步調查 [J]. 熱帶醫(yī)學雜志，2007, 7 (1):66-67.

[11]Guo XB, Zhu SL, Wang DY, et al. Seroepidemiology investigation of HEV 71 in healthy children of 1-6 years old in three counties[J]. Chin J Vaccines Immunization, 2009, 15(2): 141-144. (in Chinese) 郭學斌，祝雙利，王東艷，等. 2005年中國3個縣1～6歲兒童人腸道病毒71型血清流行病學調查[J]. 中國疫苗和免疫，2009, 15 (2): 141-144.

[12]Zhu Z, Zhu S, Guo X, et al. Retrospective seroepidemiology indicated that human enterovirus 71 and coxsackievirus A16 circulated wildly in central and southern China before large-scale outbreaks from 2008[J]. Virol J, 2010, 7: 300. DOI: 10.1186/1743-422X-7-300

Sero-epidemiological investigation of Enterovirus 71 antibodies in Fujian Province, China, 2010

WANG Jin-zhang,CHEN Wei,WENG Yu-wei,HE Wen-xiang,ZHANG Yong-jun,HUANG Meng,XIE Jian-feng,ZHENG Kui-cheng,YAN Yan-sheng

(FujianCenterforDiseaseControlandPrevention,Fuzhou350001,China)

In order to investigate EV71 antibody levels among general population from Fujian Province after the 2008-2009 HFMD epidemics, 390 sera-specimens were collected from 390 participants in 2010. EV71-specific antibody was detected by neutralization test, indicating 186 (47.69%) sera of 390 were EV71-seropositive. Although the difference by gender was not statistically significant on positive rates and antibody titers, significant differences were observed in positive rates and antibody titers among age groups. The positive rate was increasing with age, while the 0 age-group yielded the lowest positive rate of 16.67%. Subsequently, significant difference was detected among positive rates and antibody titers between age groups of 0 to 4 years-old and 5-years-old, with the positive rate of 25.33% and 61.67%, respectively. Therefore, the EV71 antibody levels among general population from Fujian Province after the 2008-2009 HFMD epidemics was still in the low level, especially the age groups of 0 to 4 years-old. The epidemic of HFMD mainly caused by EV71 will still occur in the future, and children under 5 years old are major susceptible population, continuously intensive surveillance, prevention and control are required.

Enterovirus 71; neutralizing antibody; seroepidemiology survey

Yan Yan-sheng, Email: yysh@fjcdc.com.cn

10.3969/cjz.j.issn.1002-2694.2015.03.008

國家科技重大專項《艾滋病和病毒性肝炎等重大傳染病防治》(2012ZX10004-210-003)

嚴延生，Email：yysh @fjcdc.com.cn

福建省疾病預防控制中心，福建省人獸共患病研究重點實驗室，福州 350001

R183.4

A

1002-2694(2015)03-0227-05

Supported by the National Mega-Project of Science & Technology for Infectious Diseases in China (No. 2012ZX10004-210-003)

2014-05-16；

2014-08-07