黃芩苷對帕金森病小鼠模型的影響

吳紀凱，王 琳，張 軼，梁 睿

（蘇州衛生職業技術學院，江蘇蘇州215000）

黃芩苷對帕金森病小鼠模型的影響

吳紀凱，王 琳*，張 軼，梁 睿

（蘇州衛生職業技術學院，江蘇蘇州215000）

目的 研究黃芩苷對帕金森病小鼠模型的影響。方法 60只雄性C57BL小鼠隨機分為模型組、黃芩苷組、美多巴組、正常對照組。模型組小鼠腹腔注射30 mg／kg MPTP；黃芩苷組分別給予100 mg／kg黃芩苷灌胃和腹腔注射30 mg／kg MPTP；美多巴組給予31 mg／kg美多巴灌胃，1次／d；正常組給予等量生理鹽水，1次／d，15 d。對4組小鼠的運動功能、腦紋狀體DA、腦組織GSH、GSH－Px、MDA含量進行測定和統計分析。結果 模型組小鼠的懸掛實驗、游泳實驗分值均明顯比黃芩苷組、美多巴組和正常對照組高（P＜0.05）；黃芩苷組的腦紋狀體DA水平、GSH水平均明顯比美多巴組和模型組高（P＜0.05）；黃芩苷組小鼠的腦紋狀體GSH－Px、MDA水平均顯著低于美多巴組和模型組（P＜0.05）。結論 黃芩苷預防給藥能夠有效保護帕金森病小鼠的神經功能，其作用機制可能與促進腦內抗氧化物質GSH水平的有效提升有相關聯系。

黃芩苷；帕金森病小鼠模型；運動功能

帕金森病屬于一種神經系統退行性疾病，老年人是多發人群，近年來其發病率呈現逐年上升的趨勢。其臨床癥狀能夠在左旋多巴類藥物的作用下得到顯著改善，但是其遠期療效對于大部分患者來說并不理想，通常服藥3～5年后就會減退，并引發諸多不良反應，如癥狀波動、精神癥狀等，給臨床治療帶來極大的困難［1］。黃芩苷是黃酮類中藥的有效成分，是由黃芩中提取而來，具有明顯的抗氧化性，能夠有效清除羥自由基、過氧亞硝基等［2］。相關醫學研究［3］表明，氧化引發的DNA單鏈損傷能夠影響到小鼠3T3及細胞上，而黃芩苷的作用可使其有效恢復。給予黃芩苷有助于增強機體抗氧化性，本研究對76只雄性C57BL小鼠的相關資料進行了統計分析，觀察了黃芩苷對帕金森病小鼠模型的影響。報道如下。

1 材料與方法

1.1 材料 76只雄性C57BL小鼠（北京維通利華實驗動物技術有限公司，動物合格證號：BIOON－13287），月齡為11個月，體質量30～34 g。黃芩苷，購自蘇州李良濟藥業有限公司，批號：030812，含生藥量99.7%，鹽酸多巴胺、1－甲基－4－苯基－1，2，3，6－四氫吡啶（MPTP）（Sigma公司），谷胱苷肽（GSH）、丙二醛（MDA）、谷胱苷肽過氧化酶（GSH－Px）試劑盒（南京建成生物工程研究所）。所有小鼠均分籠飼養，依據隨機數字表法將其分為模型組（22只）、黃芩苷組（22只）、美多巴組（16只）、正常對照組（16只）4組。

1.2 方法 給予模型組小鼠腹腔注射MPTP，濃度為30 mg／kg，1次／d，連續注射3 d；給予黃芩苷組小鼠100 mg／kg黃芩苷灌胃，1次／d，連續使用15 d，灌胃后第8天給予小鼠腹腔注射30 mg／kg MPTP，1次／d，連續注射3 d；給予美多巴組小鼠美多巴灌胃治療，濃度為31 mg／kg，1次／d，給予正常組小鼠等量生理鹽水，持續灌注7 d。

1.3 觀察指標

1.3.1 小鼠肢體運動功能檢測 懸掛實驗：將小鼠懸掛在一水平電線上，1分＝小鼠兩前爪均無法將電線抓住，2分＝小鼠用一前爪將電線抓住，3分＝小鼠用兩前爪將電線抓住，4分＝小鼠軀體上舉；游泳實驗：在水箱中放置小鼠，水箱規格和水溫分別為20 cm×30 cm×20 cm和22～25℃，10分＝小鼠偶爾用后肢游動并在一邊漂浮，15分＝小鼠偶爾游泳，20分＝小鼠漂浮至少50%，25分＝小鼠大部分時間游泳偶爾漂浮，30分＝小鼠10 min內連續不斷游泳。將4組小鼠的懸掛實驗和游泳實驗得分計算出來，然后將其詳細記錄［4］。

1.3.2 小鼠腦紋狀體多巴胺（DA）含量測定 運用HPLC法對小鼠腦紋狀體多巴胺（DA）含量進行測量。對小鼠的運動功能進行有效檢測后將其處死，在冰上放置，稱重取出來的腦紋狀體，并將其和5倍量0.1 mol／L高氯酸混勻，在低溫離心機中放置并進行離心運動，在4℃條件下，以10 000 r／min離心20 min，分析上清液色譜。色譜柱Luna C－18（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動相甲醇為0.05 mol／L，磷酸氫二鈉為0.02 mol／L，檸檬酸為5%∶72%∶23%，流速為1.0 mL／min，檢測波長為280 nm，柱溫為25℃［5］。

1.3.3 小鼠腦組織MDA、GSH、GSH－Px含量測定將小鼠腦組織紋狀體取出后嚴格依據試劑盒說明書中的方法測定其余腦組織的MDA、GSH、GSH－Px含量［6］。

1.4 統計學處理 對本研究中所有數據進行統計學處理的過程中運用統計學軟件SPSS 20.0，用均數±標準差（ˉx±s）表示計量資料，用t檢驗組間比較，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 4組小鼠的運動功能測定結果比較 模型組小鼠的懸掛試驗分值均明顯比黃芩苷、美多巴組和正常對照組高（P＜0.05），懸掛實驗分值越高，小鼠抓住電線越牢固；說明小鼠肢體運動協調情況越好，反之，則說明小鼠震顫、肌強直等情況嚴重；模型組小鼠的游泳實驗分值明顯比美多巴組、正常對照組以及黃芩苷組低（P＜0.05），游泳分值越高小鼠游泳的時間越多；說明小鼠肢體運動協調情況越好，反之，則說明小鼠震顫、肌強直等情況嚴重，見表1。

表1 4組小鼠的運動功能測定結果比較（ˉx±s）

2.2 4組小鼠的腦紋狀體DA、腦組織MDA、GSH、GSH－Px含量測定結果比較 黃芩苷組的腦紋狀體DA水平、GSH水平均明顯比美多巴組和模型組高（P＜0.05）；黃芩苷組小鼠的腦紋狀體GSH－Px、MDA水平均顯著低于美多巴組和模型組（P＜0.05），見表2。

表2 4組小鼠的腦紋狀體DA、腦組織GSH－Px、GSH、MDA含量測定結果比較（ˉx±s）

3 討論

相關醫學研究［7－9］表明，帕金森的發病受到氧自由基的直接影響，帕金森患者處于氧化應激狀態，腦黑質中和正常人相比具有明顯較多的固醇類過氧化物，增加了血清MDA，同時顯著增加8－羥基脫氧鳥苷（DNA氧化標志物），降低黑質紋狀體中GSH水平及腦中水解酶、GSH－Px的活性，同時血中自由基（由多形核白細胞產生）的數量也顯著增多。臨床普遍認為，給予C57BL小鼠腹腔注射神經毒素MPTP制備的帕金森模型較為理想［10］。本研究［11］結果表明，黃芩苷組小鼠的懸掛實驗分值、游泳實驗分值均明顯比模型組、美多巴組和正常對照組高（P＜0.05）和相關醫學研究結果一致。治療后的結果提示說明了模型動物的神經能夠在黃芩苷預防及治療給藥的作用下得到切實有效的保護，其作用機制與促進腦內抗氧化物質GSH水平的有效提升有相關聯系。具體來說是GSH屬于抗氧化保護性物質，在體內發揮著極為重要的作用。以往研究［12－13］表明，疾病和部位選擇性是帕金森患者黑質GSH含量降低的主要性質。但是促進神經細胞凋亡的減少、促進DA釋放等是否是其作用機制還需要相關實驗進行進一步驗證。本研究將初步的實驗依據提供給臨床黃芩苷抗帕金森病的治療工作，更為深入的探討還需要進一步的深入研究和分析。

［1］吳正治，高小威，李映紅．內源性MSCs向腦內遷移分化為多巴胺能神經元及其中藥干預的可行性研究［J］．深圳中西醫結合雜志，2010，20（5）：269－271．

［2］吳正治，ANDREW C H，朱慶偉，等．安顫靈對泛素－蛋白酶體通路損傷細胞模型的保護作用［J］．中華神經醫學雜志，2009，8（9）：877－880．

［3］段冷昕，李瑞芳，金瑾，等．黃連解毒湯對MPTP所致帕金森病小鼠的防治作用［J］．中國老年學雜志，2010，30（14）：2004－2006．

［4］段凱，唐瑛．半夏總生物堿對帕金森病大鼠的學習記憶及氧化應激反應的影響［J］．中國實驗動物學報，2012，20（2）：49－53．

［5］金澤，王玉琳，姜珊珊，等．洋金花對帕金森病大鼠腦紋狀體組織SOD、GSH－Px影響的研究［J］．中醫藥信息，2013，30（2）：87－90．

［6］宋揚文，陳忻，張楠，等．黃芩苷抑制魚藤酮帕金森病大鼠黑質鐵積聚及作用機制［J］．中國藥理學通報，2011，27（12）：1740－1744．

［7］向莉，侯辰，李雅麗，等．銀杏葉提取物對部分損毀的帕金森病大鼠黑質多巴胺能神經元的作用［J］．醫學研究雜志，2011，40（1）：102－105．

［8］王亞麗，劉燕．疏筋解毒方對PD大鼠中腦DA及其代謝產物含量的影響［J］．現代中醫藥，2010，30（1）：41－42．

［9］王亞麗，劉燕．疏筋解毒方對PD大鼠黑質紋狀體Bcl－2／BaxmRNA表達的影響［J］．陜西中醫學院學報，2010，33（1）：42－43．

［10］楊海東，林碧蓮．人參皂苷Rg1拮抗MPTP誘導小鼠黑質中鐵增高的作用［J］．山西醫科大學學報，2011，42（1）：10－14．

［11］VANDEPUTTE C，TAYMANS J M，CASTEELS C，et al．Automated quantitative gait analysis in animal models of movement disorders［J］．BMC Neuroscience，2010，11（1）：92．

［12］DEVOS D，DEFEBVRE L，BORDET R．Dopaminergic and nondopaminergic pharmacological hypotheses for gait disorders in Parkinson's disease［J］．Fundamental&Clinical Pharmacology，2010，24（4）：407－421．

［13］賴道旭，郭寶劍，程俊輝，等．司來吉蘭對帕金森病小鼠運動能力的影響［J］．中南藥學，2013，11（6）：421－424．

Effects of Baicalin on mouse model with Parkinson's disease

WU Jikai，WANG Lin*，ZHANG Yi，LIANG Rui
（Suzhou Health College，Suzhou 215000，Jiangsu Province，China）

Objective To study the effects of baicalin on mouse model with Parkinson's disease．Methods The 60 male C57BL mice were were randomly divided into model group，baicalin group，the US－dopa group and normal control group，the model group were given intraperitoneal injection 30 mg／kgMPTP，the baicalin group were given 100 mg／kg baicalin gavage 30 mg／kgMPTP，the US－dopa group to 31 mg／kg lavage treatment，1 times a day，the normal group was given equal saline，1 times a day，15 d．Then the motor function，brain striatal DA，brain tissue GSH，GSH－Px，MDA content and nigra TH immunohistochemical staining of the three groups of mice were measured and statistically analyzed．Results Model mice suspension test，swimming test scores were significantly higher than the baicalin group，US－dopa group and normal control group（P＜0．05）；brain striatal DA levels baicalin group，GSH levels were significantly Bimei dopa and model groups of high（P＜0．05）；striatum baicalin group of mice GSH－Px，MDA levels were significantly lower than madopar group and model group（P＜0．05）．Conclusion Baicalin prophylaxis can effectively protect mice with Parkinson's disease．

Baicalin；mouse model of Parkinson's disease；exercise function

R285.5

A

2095－6258（2015）03－0454－03

2014－12－17）

10．13463／j．cnki．cczyy．2015．03．006

蘇州市吳門醫學發展中心基金項目“吳門民間驗方的現代制劑研究”（201412）。作者簡介：吳紀凱（1970－），男，大學本科，講師，主要從事中藥藥理學研究。

*通信作者：王 琳，碩士，講師，電子信箱－wujik70＠163．com