血清HE4在子宮內膜癌中的表達及臨床意義

丁金旺，周國明，王克義，葉柳青，周建松，樊 璠，于愛軍

(1.杭州市第一人民醫院，浙江 杭州310006；2.浙江省腫瘤醫院，浙江 杭州310022)

血清HE4在子宮內膜癌中的表達及臨床意義

丁金旺1，周國明2，王克義1，葉柳青2，周建松2，樊 璠2，于愛軍2

(1.杭州市第一人民醫院，浙江 杭州310006；2.浙江省腫瘤醫院，浙江 杭州310022)

目的 探討血清人附睪蛋白4(HE4)在子宮內膜癌患者中的表達情況以及與臨床特點和病理學特征的關系。方法 采用ELISA法檢測并比較266例子宮內膜癌患者、204例子宮良性疾病患者及100例健康女性血清中HE4的表達差異，分析血清HE4與子宮內膜癌患者年齡、月經狀態、病理學類型、組織學分級、淋巴結轉移、肌層浸潤深度、國際婦產科聯盟(FIGO)分期以及療效的相關性。結果 研究組266例子宮內膜癌患者血清HE4的表達水平為85.63(60.98～125.78)pmol/L，明顯高于正常對照組56.05(50.30～63.50)pmol/L(Z=-8.257，P<0.001)及對照組的59.52(50.11～71.09)pmol/L(Z=-8.865，P<0.001)；而在正常對照組與對照組之間，血清HE4的表達比較差異并無統計學意義(Z=-1.458，P>0.05)。研究組中，血清HE4水平在不同患者年齡、月經狀態、組織學分級、淋巴結轉移、肌層浸潤深度以及FIGO分期等方面比較，差異均有統計學意義(Z值分別為-3.849、-3.099、-5.279、-7.763、-5.704、-5.855，均P<0.01)；而在腫瘤的組織病理學類型方面比較差異無統計學意義(Z=5.086，P>0.05)。有198例子宮內膜癌患者術前的血清HE4水平為87.24(62.65～129.95)pmol/L，顯著高于術后血清HE4水平65.38(51.58～82.01)pmol/L，差異有統計學意義(Z=-7.833，P<0.001)。結論 血清HE4水平在子宮內膜癌患者中高表達，且與年齡、月經狀態、組織學分級、淋巴結轉移、肌層浸潤深度、FIGO分期及療效相關，提示血清HE4可以作為子宮內膜癌臨床診斷、療效評價、預后判斷及隨訪監測的分子標記物。

子宮內膜癌；血清；人附睪蛋白4；酶聯免疫吸附試驗；分子標記物

子宮內膜癌是女性三大生殖器官惡性腫瘤之一，在歐美的發病率占婦科惡性腫瘤的第1位[1]。近年來，國內子宮內膜癌的發病率也明顯上升，并呈年輕化趨勢，有些地區已超過宮頸癌而躍居女性生殖系統惡性腫瘤首位。早期子宮內膜癌雖然預后較好，但一直缺乏有效的早期篩查及后期監測的腫瘤指標。人附睪蛋白4(human epididymis protein 4，HE4)是近年發現的一種新型分子標志物，在正常組織及良性病變中不表達或低表達，但在婦科惡性腫瘤(如卵巢癌)中呈明顯高表達，目前血清HE4已被美國食品藥品監督管理局(FDA)批準廣泛應用于卵巢癌的早期篩查及鑒別診斷[2-4]。近年來的研究發現，子宮內膜癌患者也存在HE4高表達，并且可能與子宮內膜癌的發生、發展存在密切關系[5-10]。本文采用酶聯免疫吸附試驗(ELISA)法檢測并比較266例子宮內膜癌、204例子宮良性疾病患者及100例健康女性血清中HE4的表達水平，并分析HE4與子宮內膜癌臨床特點和病理學特征的關系，以進一步探究血清HE4在子宮內膜癌中的臨床意義。

1 材料與方法

1.1 一般資料

選擇2011年1月至2013年5月在浙江省腫瘤醫院住院并經組織病理證實的266例子宮內膜癌患者為研究組，年齡15～78歲，平均年齡(51.42±8.44)歲，絕經者占53%(141/266)。按照2009年國際婦產科聯盟(FIGO)大會臨床分期標準將患者分為：Ⅰ期174例，Ⅱ期32例，Ⅲ期42例，復發或轉移(Ⅳ期)18例。組織學類型包括：子宮內膜樣腺癌190例，子宮內膜樣腺癌伴鱗化46例，惡性苗勒混合瘤12例，漿液性腺癌9例，透明細胞癌9例。選擇同期子宮良性疾病患者204例作為對照組，年齡22～75歲，平均年齡(49.29±7.29)歲，絕經者占49%(100/204)；其中包括：子宮平滑肌瘤120例，子宮腺肌癥54例，子宮內膜息肉17例，子宮內膜不典型增生13例。選取100例健康女性作為正常對照組，年齡22～76歲，平均年齡(49.15±14.35)歲，絕經者占50%(50/100)。所有入選者均己排除子宮之外其他器官腫瘤病史。所有研究內容均獲得患者本人或者知情照料者同意。

1.2 方法

1.2.1 血清標本的收集與保存

采集患者首次治療(手術或化療)前空腹靜脈血4mL于血清分離管內，室溫靜置1h完全凝固，3 000rpm離心15min后分離血清，置于-70℃超低溫冰箱保存備用。

1.2.2 血清人附睪蛋白4的檢測試劑與方法

采用ELISA檢測血清HE4含量，檢測試劑盒由瑞典康乃格診斷公司(Fujirebio Diagnostics，Inc.，Goteborg, Sweden)提供，濃度單位pmo/L。采用美國伯樂公司CODA酶標分析儀比色。本研究采取盲法、復孔檢測，操作步驟嚴格按照試劑盒說明書進行檢測。

1.3 統計學方法

應用SPSS 19.0統計軟件進行數據分析。因研究數據均呈偏態分布，故采用中位數及四分位數描述，組間兩兩比較進行Wilcoxon秩和檢驗，3組間比較采用Kruskal-Wallis秩和檢驗，相關性分析采用Spearman檢驗，手術前后血清HE4的變化采用配對樣本的Wilcoxon檢驗，以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 血清人附睪蛋白4在各組人群中的表達差異

經Wilcoxon秩和檢驗，研究組266例子宮內膜癌患者血清HE4的表達水平明顯高于正常對照組(Z=-8.257，P<0.001)及對照組(Z=-8.865，P<0.001)；而在正常對照組與對照組之間血清HE4的表達差異并無統計學意義(Z=-1.458，P=0.145>0.05)，見表1。

表1 子宮良、惡性疾病患者及健康女性血清HE4表達水平的比較

Table 1 Comparison of serum HE4 levels among different groups

組別例數(n)HE4(pmol/L)中位數(范圍)研究組26685.63(60.98～125.78)對照組20459.52(50.11～71.09)正常對照組10056.05(50.30～63.50)

2.2 血清人附睪蛋白4表達水平與子宮內膜癌臨床病理特征的相關性

血清HE4水平在年齡≤60歲者與>60歲者、絕經前與絕經后的子宮內膜癌患者中差異均有統計學意義(Z值分別為-3.849、-3.099，均P<0.01)；但子宮內膜癌患者血清HE4表達水平在各種病理學類型之間差異未見統計學意義(Z=5.086，P>0.05)。與組織學G1～G2級患者相比，組織學G3級的子宮內膜癌患者血清HE4含量顯著增高，差異有統計學意義(Z=-5.279，P<0.01)。伴有淋巴結轉移及深肌層浸潤(>1/2肌層)者血清HE4水平顯著高于無淋巴結轉移及不伴有深肌層浸潤(≤1/2肌層)者，差異均有統計學意義(Z值分別為-5.704、-7.763，均P<0.01)。Ⅲ～Ⅳ期患者血清HE4表達水平顯著高于Ⅰ～Ⅱ期患者，差異也有統計學意義(Z=-5.855，P<0.01)。Spearman相關分析顯示，血清HE4表達水平與FIGO分期顯著相關(r=0.498，P=0.000)。以上結果表明，子宮內膜癌患者血清HE4水平與年齡、月經、組織學分級、淋巴結轉移、肌層侵潤深度及FIGO分期密切相關，但與病理類型無關，見表2。

表2 血清HE4的表達水平與子宮內膜癌臨床特點和病理學特征的關系

Table 2 Correlation between serum HE4 level and clinicopathological characteristics in endometrial carcinoma

注：(1)Wilcoxon秩和檢驗；(2)Kruskal-Wallis秩和檢驗。

2.3 血清人附睪蛋白4表達水平在子宮內膜癌手術前后的變化情況

本組研究266例子宮內膜癌患者中有198例同時檢測了手術前、后血清HE4的表達水平，經配對樣本的Wilcoxon非參數檢驗發現，子宮內膜癌患者術后血清HE4水平[65.38(51.58～82.01)pmol/L]顯著低于術前水平[87.24(62.65～129.95)pmol/L]，差異有統計學意義(Z=-5.846，P=0.000)，見表3。

表3 198例子宮內膜癌患者手術前后血清HE4表達水平變化

Table 3 Pre- and post-operative serum expression levels of HE4 in 198 endometrial cancer patients

注：(1)Wilcoxon秩和檢驗。

3 討論

3.1 人附睪蛋白4在子宮內膜癌中的表達分析

HE4屬于抑蛋白酶基因家族，定位于染色體20q12-13.1，編碼一種與精子成熟相關的小分子分泌蛋白[4]。HE4 cDNA最早是由Kirchhoff等于1991年從人的附睪上皮細胞中發現的，進一步的研究發現其主要分布于包括附睪在內的生殖系統上皮，如輸精管上皮、輸卵管上皮和子宮內膜等組織[5]。研究顯示，HE4在多種惡性腫瘤，如漿液性卵巢癌、肺腺癌、乳腺癌、胃癌等組織中高表達。大量研究表明，HE4在識別卵巢癌的早期階段具有很高的靈敏度和特異度，因此國外許多國家已將HE4作為卵巢癌早期篩查的最佳指標[2-4]。Bignotti等[5]研究結果證實，子宮內膜癌組織中同樣也存在HE4基因擴增和蛋白高表達，隨后的研究還顯示子宮內膜癌患者血清HE4水平明顯升高，并且發現在相同的特異度下，血清HE4較CA125具有更高的敏感性。本研究采用ELISA法檢測266例子宮內膜癌患者、204例子宮良性疾病患者及100例健康女性血清中的HE4水平，結果表明子宮內膜癌患者血清HE4含量顯著高于對照組和正常對照組(均P=0.000)，與國外研究類似[4，6]。因此推測HE4與子宮內膜癌的發病相關，這也提示HE4有望成為子宮內膜癌的血清標志物。

3.2 血清人附睪蛋白4與子宮內膜癌臨床病理特征的關系

本研究中發現，血清HE4水平在年齡>60歲及絕經后的子宮內膜癌患者中顯著高于年齡≤60歲及未絕經者(P<0.01)，并且在不同子宮內膜癌患者組織學分級、淋巴結轉移、肌層浸潤深度以及FIGO分期等方面比較，血清HE4差異也均有統計學意義(均P<0.01)，與Antonsen等[7]及Bignotti等[5]研究結論一致。經Spearman相關分析顯示，血清HE4表達水平與FIGO分期顯著相關(r=0.498，P=0.000)，這提示血清HE4表達水平能預測子宮內膜癌患者的分期狀況。另外，本研究顯示子宮內膜癌患者血清HE4表達水平在各種病理學類型之間差異并無統計學意義(P>0.05)，這表明子宮內膜癌患者高水平HE4與患者高齡、絕經、分化程度低、淋巴結轉移、深肌層浸潤以及FIGO分期晚等臨床病理特征密切相關，而與組織病理無關。最新的兩項研究通過多因素分析發現，高水平的血清HE4是子宮內膜癌患者較低的總生存、無瘤生存以及腫瘤無進展生存等不良預后的獨立因素[8-9]。Li等[10]最近利用轉染及克隆技術已經在子宮內膜癌細胞系及移植瘤小鼠模型中證實了高水平表達的HE4不僅介導子宮內膜癌的形成，而且直接促進腫瘤生長、基質(肌層)浸潤及疾病進展。在復發轉移監測方面，有研究也表明，在復發轉移的卵巢癌患者中血清HE4比CA125提前5～8個月出現異常表達，HE4可作為很好地預測卵巢癌復發的指標[11]。Saarelainen等[12]研究發現，聯合檢測血清HE4和CA125對轉移性子宮內膜癌診斷的敏感性、特異性分別達71.4%和89.5%。因此推斷，血清HE4表達水平不僅可以反映疾病的進展情況，還可以作為子宮內膜癌預后判斷及隨訪監測的重要指標之一。

3.3 血清人附睪蛋白4對子宮內膜癌手術療效評估的價值

有研究證實，HE4水平在子宮內膜癌治療后可明顯降低[13]。本研究結果提示，198例子宮內膜癌患者術后血清HE4水平為65.38(51.58～82.01)pmol/L，顯著低于術前水平的87.24(62.65～129.95)pmol/L，差異有統計學意義(P=0.000)，支持以往研究的結論，提示血清HE4水平亦有助于判斷手術效果及檢測病情是否進展。

總之，通過本次研究認為，血清HE4的檢測對子宮內膜癌的早期診斷、療效評估、預后判斷以及隨訪監測方面具有一定的價值，血清HE4可作為子宮內膜癌的腫瘤標志物。

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[專業責任編輯：張欣文]

Expression of serum HE4 in endometrial carcinoma and its clinic significance

DING Jin-wang1, ZHOU Guo-ming2, WANG Ke-yi1, YE Liu-qing2, ZHOU Jian-song2, FAN Fan2, YU Ai-jun2

(1.HangzhouFirstPeople’sHospital,ZhejiangHangzhou310006,China; 2.ZhejiangCancerHospital,ZhejiangHangzhou310022,China)

Objective To investigate the expression of serum human epididymis protein 4 (HE4) in endometrial cancer patients and its relationship with clinical and pathological characteristics. Methods The serum HE4 levels were detected by Enzyme linked immunosorbent assay (ELISA) and compared among 100 healthy women, 204 patients with benign uterus diseases of uterus and 266 patients with histologically confirmed endometrial carcinoma. The correlation between expression of serum HE4 and clinicpathological characteristics (age, menstruation status, histopathology, tumor grade, lymph node metastasis, depth of myometrial invasion, FIGO stage) and therapeutic effect was also evaluated. Results The concentration of serum HE4 was 85.63 (60.98-125.78)pmol/L in patients with endometrial cancer, which was significantly higher than that in healthy women[56.05 (50.30-63.50)pmol/L,Z=-8.257,P<0.001] and benign lesion group[59.52 (50.11-71.09)pmol/L,Z=-8.865,P<0.001], but the difference was not significant between healthy group and benign lesion group (Z=-1.458,P>0.05). In endometrial cancer group, the expression of serum HE4 was not associated with the type of histopathology (Z=5.086,P>0.05), but it was positively correlated with age, menstruation status, tumor grade, lymph node metastasis, depth of myometrial invasion and FIGO stage (Zvalue was -3.849, -3.099, -5.279, -7.763, -5.704 and -5.855, respectively, allP<0.01). Furthermore, the postoperative level of serum HE4 [65.38 (51.58-82.01)] in 198 cases of endometrial cancer was significantly lower than preoperative level [87.24 (62.65-129.95)] (Z=-7.833,P<0.001). Conclusion The serum HE4 is over-expressed in endometrial carcinoma, and its concentration significantly correlates with age, menstruation status, histological grade, lymph node metastasis, depth of myometrial invasion, FIGO stage and treatment effect, which indicates that serum HE4 may serve as a biomarker for endometrial carcinoma and has significant application in diagnosis, therapeutic evaluation, prognostic prediction and postoperative surveillance.

endometrial carcinoma；serum；human epididymis protein 4 (HE4)；enzyme linked immunosorbent assay (ELISA)；biomarker

2014-09-30

丁金旺(1983-)，男，主治醫師，腫瘤學碩士，主要從事常見腫瘤的早期診斷與治療工作。

于愛軍，主任醫師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015.03.024

R711

A

1673-5293(2015)03-0471-03