白菜型油菜CBF基因克隆及功能分析

張騰國，聶亭亭，陳瓊瓊，毛玉珊

（西北師范大學生命科學學院，蘭州730070）

白菜型油菜CBF基因克隆及功能分析

張騰國，聶亭亭，陳瓊瓊，毛玉珊

（西北師范大學生命科學學院，蘭州730070）

利用RACE技術從‘隴油6號'油菜中克隆得到1個新的CBF（C-repeat binding factor）基因（GenBank登錄號為KP974691），全長1 000 bp，其中包括5＇-UTR 114 bp，3＇-UTR 241 bp，開放閱讀框645 bp，編碼215個氨基酸，推測的蛋白質分子量23.8 kD，理論等電點為4.86。在氨基酸序列水平上，該基因與多種植物具有較高的一致性，其中與蘿卜、紫莖澤蘭、卷果澀薺和擬南芥的一致性分別為93.5%、83.7%、81.0%、79.0%。實時熒光定量PCR分析表明，CBF基因在油菜的莖、葉和下胚軸中均有表達，沒有組織特異性；該基因表達受低溫、ABA、H2O2誘導，MAPKK抑制劑U0126預處理12 h再經低溫、ABA、H2O2誘導，與單獨處理結果相比，CBF基因表達明顯降低，表明該基因在油菜適應低溫、ABA、H2O2脅迫過程中發揮作用。

油菜；CBF基因；分子克隆；表達分析

植物為了維持正常的生長和發育，需要不斷地感知和適應外界環境的變化。低溫是主要的環境脅迫因素之一，當受到低溫脅迫時，絕大多數植物需要經過一段低溫馴化過程以獲得對低溫的耐受能力。在植物響應低溫脅迫的馴化過程中，可引起自身生理生化和分子水平上的變化［1］，包括細胞和組織結構的改變、新陳代謝過程以及基因表達水平的變化等［2］，其中以低溫激活或抑制基因的轉錄最為重要。擬南芥中受低溫調節的基因占基因組的4%～20%［3］，其中有一類低溫脅迫響應基因COR（cold responsive），其啟動子區有干旱反應元件DRE/ CRT，擁有共同的核心基序（CCGAC）。Stockinger等［4］從擬南芥中分離得到了能夠結合干旱反應元件DRE/CRT的轉錄因子DREB1/CBF。……