3種分光光度法對天然抗氧化物質(zhì)抗自由基性能的分析檢測

高蘭玲

摘 要：該文在分析檢測天然抗氧化物質(zhì)抗自由基的性能，借助于3種分光光度法來比較研究。在3種分光度法對自由基進行分析檢測，包括對抗氧化劑的抗自由基性能進行檢測的方法上，可適應相關研究工作或者常規(guī)實驗室檢測自由基的需要。

關鍵詞：分光光度法 天然抗氧化物質(zhì) 抗自由基性能

中圖分類號：0657 文獻標識碼：A 文章編號：1672-3791（2015）04（c）-0247-01

1 DPPH自由基捕獲分光光度法分析

1.1 實驗部分

（1）儀器及試劑。選取型號752的分光光度計，DPPH溶液的濃度為0.1777nmol/L。混合磷酸鹽緩沖溶液pH值為6.88。抗氧化劑樣品溶液的濃度是10.5g/L。沒食子酸丙酯和葡萄籽提取物，天然抗氧化劑，最后是分離制備的燈盞花素。（2）實驗方法。選取pH6.88混合磷酸鹽緩沖溶液添加10mL比色管，再加入DPPH溶液4mL，混合均勻后并適當添加抗氧化劑溶液，用蒸餾水來補充體積，10min之后于520nm區(qū)域?qū)ξ舛冗M行測算。在抗氧化劑清除DPPH自由基的比率上，按照K/（%）=[1—（Ai—Aj）/Ac] ×100來計算。

1.2 結(jié)果與討論

在實驗中，選取不同體積的抗氧化劑進行添加，通過測定Ai、Aj、Ac的值，從而得到Ai—Aj的數(shù)值，并計算出K，也即自由基清除率，如圖1所示。

在圖1中，1、2、3分別表示沒食子丙酸脂、葡萄籽提取物、燈盞花素。所以就以上物質(zhì)捕獲DPPH自由基的能力，一般和抗氧化劑使用量形成量效關系，而且增加抗氧化劑使用量的話，就會捕獲到更多的自由基。

2 亞硝基R鹽-Co3+褪色法分析

2.1 實驗部分

（1）儀器及試劑。選用型號為752的分光光度計，亞硝酸R鹽溶液濃度為0.00156mol/L。CoSO4溶液濃度為0.00050mol/L。H2O2的體積分數(shù)為1.8%。pH值為7.4的KH2PO4緩沖液，pH值為9.2的Na2CO3溶液。（2）實驗方法。依次把pH9.2緩沖液2mL，CoSO4溶液1mL，亞硝酸R鹽1mL，H2O2溶液1mL加入到10mL的比色管中，并用蒸餾水稀釋。放置在37℃水浴內(nèi)，保持45min恒溫。在494nm區(qū)域?qū)ξ舛華b進行測量，同時對沒有添加的H2O2吸光度Ao進行測量。其中用△A=Ao—Ab來表示自由基產(chǎn)生量。

2.2 結(jié)果與討論

該實驗說明，不斷增加反應時間后，△A的增長速度反而下降，而褪色速度則更快地進行下降。在反應到達40min之后，體系沒有再發(fā)生變化。在分析抗羥自由基氧化性能上，選取了三種抗氧物質(zhì)樣品，具體結(jié)果如圖2所示。1、2、3分別表示沒食子丙酸脂、葡萄籽提取物和燈盞花素。表明當對抗氧劑濃度再次增加時，表觀抗羥自由基幾乎不會增加氧化率。同時抗羥自由基的氧化能力，從高到低分別是沒食子酸丙酯、葡萄籽提取物、燈盞花素。

3 連苯三酚紅褪色光度法分析

3.1 實驗部分

（1）儀器及試劑。選用型號為752的分光光度計。H2O2的體積分數(shù)為1.8%。連苯三酚紅溶液的濃度為0.0001mol/L。EDTA-Fe2+溶液的濃度為0.0038mol/L。Na2CO3緩沖液的濃度為0.1mol/L，pH值為9.1。（2）實驗方法。依次把pH9.2的Na2CO3緩沖溶液2ml，EDTA-Fe2+溶液0.7mL，連苯三酚紅溶液3.5mL，體積分數(shù)為0.6的H2O2液體0.7mL加入到10mL的比色管中，并且利用蒸餾水來稀釋到刻度位置。在對吸光度AS的測定上，抗羥自由基氧化率S=（As—Ab）/（Ao—Ab）×100。

3.2 結(jié)果與討論

該實驗說明，體系褪色速度隨著反應溫度的提高而增加。根據(jù)實驗方法，選取3種抗氧化物，并進行抗羥自由基氧化性能上的研究。在各個抗氧化試劑不同使用量的情況下，羥自由基氧化劑抑制率。

綜上所述，相對于燈盞花素提取物，沒食子酸丙酯以及葡萄籽提取物具有更優(yōu)的抗氧化性。不僅可以清除40%～80%左右的自由基，而且抗氧化能力和清除氧自由基的作用相對理想。

參考文獻

[1] 孫存普.由基生自物學導論[M].合肥：中國科學技術大學出版社，2010.

[2] 裘祖文.電子共旋共振波譜[M].北京：科學出版社，2010.